溶藻弧菌OP/Tr变体生物被膜形成能力及其相关因素的比较研究

溶藻弧菌天然存在OP/Tr的相变现象。相变作为许多弧菌的一种适应机制,通常会导致生物被膜形成能力和运动能力的改变,进而会导致细菌毒力和活力的改变。本研究应用结晶紫染色的方法对溶藻弧菌OP/Tr变体生物被膜形成进行定量分析;并用alcianblue solution染色的方法对可能影响相变和生物被膜形成的菌表多糖的分泌进行了量分析;最后用多标记微孔板检测仪计数的方法检测了两变体抵御人类等宿主的胆盐胁迫的能力。结果与其他弧菌不同的是,溶藻弧菌天然存在的两种变体(OP/Tr),Tr变体生物被膜形成能力比Op变体强,但二者EPS的分泌量并无显著差异;两变体均具有较强抗胆盐胁迫的能力,非致死浓度的胆盐可能对增殖旺盛的菌株具有显著抑制作用。

食源性沙门氏菌Sau-PCR基因分型研究

为建立食源性沙门氏菌Sau-PCR基因快速分型方法。用限制性内切酶Sau3AI酶切14株沙门氏菌基因组DNA,以酶切产物为模板,用根据酶切位点设计的引物进行PCR扩增,样品用核酸染料SYBR Green Ⅰ染色,经琼脂糖凝胶电泳后用Quantity One软件对14株菌进行同源性分析。结果显示,经Sau3AI酶切6h后,4种引物均扩增出条带,其中使用引物STG扩增的条带最为清晰,14株沙门氏菌均得到6-11条大小在0.2-1.5kb片段,利于分型。

黄伞菌丝体多糖的分离鉴定及其抗氧化性研究

黄伞菌丝体烘干后经热水提取,乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖经Sevag法除蛋白后DEAE-纤维素柱层析,分离得到两种多糖组分PAMPⅠ和PAMPⅡ。红外光谱分析表明PAMPⅠ和PAMPⅡ均为含有葡萄糖醛酸的β-D-吡喃葡聚糖。采用化学比色法测定黄伞菌丝体多糖在体外的总抗氧化能力、抑制活性超氧阴离子自由基的能力、清除羟自由基的能力及对小鼠肝组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的的影响。结果表明:一定浓度范围内不同纯度的黄伞菌丝体多糖均有总抗氧化能力,能清除O2·和·OH及抑制MDA的生成,且呈现一定剂量关系。表明黄伞菌丝体多糖在一定浓度范围内具有抗氧化作用。

河北地区食源性单核细胞增生李斯特菌脂肪酸的分型研究

对脂肪酸分型方法在单核细胞增生李斯特菌（LM）菌株鉴定、菌株相似性分析等方面的应用价值进行评价。本研究选取2005~2007年从河北地区六大类食品中分离到的90株LM菌,提取脂肪酸,利用MIDI公司Sherlock系统进行菌体脂肪酸成分分析,使用SPSS 19.0软件对获得的数据资料进行统计分析及聚类分型,并将脂肪酸分型与传统的血清分型和分型金标准PFGE分型进行比较。结果表明,脂肪酸分析法判定LM菌的符合率为96.67%,所有菌株共检出20种脂肪酸成分,主要脂肪酸成分有3种,分别为脂肪酸15：0anteiso、17：0 anteiso和15：0 iso。各血清型间脂肪酸含量存在一定差异,血清1/2c型菌株与血清1/2a、1/2b和4b型菌株相比,有2种主要脂肪酸含量差异有统计学意义（P〈0.01）。与PFGE分型相比,在对结构简单的小样本资料的菌株亲缘关系鉴定中脂肪酸分型更具优势。将脂肪酸分型与血清学分型和PFGE分型相结合能够更好的分析LM菌菌株之间的相关性。

食源性单核细胞增生李斯特菌CRISPR结构的研究

为探明河北省2177份零售食品样本中检出的18株谱系I(血清型1/2b,4b)菌株的CRISPR序列结构,用PCR方法扩增了其CRISPR序列,采用生物信息学方法进行序列同源性分析,并根据在18菌株中CRISPR结构的阵列排布进行聚类分型研究。结果表明:18株菌共检出三类CRISPR序列排布(CRSIPR array:locus1,2,3)。CRISPR locus1是一退化残基,repeat序列保守性差,spacer数量少。locus2和locus3是新掺入的,结构完整,活力旺盛,repeats序列保守,spacer数量增长迅速。locus1最普遍(13/18);有5株serotype1/2b的菌株检出至少两个活性loci(locus2和locus3)中的一个,在serotype 4b菌株中未检出。总计,基因组中具有3个CRISPR loci的有2株,具有2个的有3株,仅有1个的有8株,无该结构的有5株。根据CRISPR array的排布共将18株菌聚类分型为5簇,4个亚簇,能较好的对1/2b血清型的菌株进行分型研究。该免疫防御系统的插入,增强了高致病性谱系I菌株对环境的适应能力,增大了消除食品加工销售过程中该类菌株的难度,给食品安全造成更大威胁,因此相关部门应加强对该特征菌株的监管力度。

广州某生猪养殖场大肠杆菌流行性及抗生素的耐药性

本研究采集广州某规模化养殖场腹泻仔猪、健康仔猪及环境样本共147份,据国标GB 4789.6-2016分离鉴定大肠杆菌,用K-B法分析分离株对12种抗生素的敏感性,并用PCR检测其对应的耐药基因。结果共检出大肠杆菌115株;分离菌株依次对复方新诺明,左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星呈高水平耐药,耐药率>30%;对庆大霉素、头孢他啶、氨曲南也呈现一定水平耐药(20%~30%);对多粘菌素B、替加环素、亚胺培南耐药水平较低(<15%),对美罗培南敏感;46.09%菌株呈现多重耐药(≥3种抗生素),且腹泻仔猪源菌株多重耐药率显著高于健康仔猪源及环境源菌(p<0.05)。分离株耐药基因携带严重,其中ant(3')-Ⅰa、aac(3')-Ⅰb、sul1、aac(3)-Ⅱb,blaTEM、blaCTX、tet M基因检出率>50%,因此,这可能是本研究菌株的主要耐药机制。研究结果表明该养殖场大肠杆菌污染严重,耐药水平高,有关部门需加强养殖中腹泻仔猪防治用药的监管与指导。