杠柳ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

为建立适用于杠柳ISSR分子标记研究的扩增体系,进一步利用ISSR标记研究杠柳遗传多样性,探讨了杠柳ISSR分子标记中的各影响因素,分别对河北11个不同地区杠柳基因组DNA进行PCR扩增,在Taq MasterMix(康为世纪)基础上对影响ISSR-PCR扩增结果的模板DNA浓度、循环次数、引物退火温度进行梯度筛选。结果表明:在100条通用引物中共筛选出34条扩增条带清晰、整齐的ISSR引物;确立了适合杠柳ISSR分子标记的反应体系:总反应体积25μL,其中Taq MasterMix(含DNA聚合酶、MgCl_2、dNTPs、反应缓冲液以及稳定剂)12.5μL,模板DNA 1μL(70ng/μL),正向引物和反向引物各1μL(10μmol/L)。该体系的确立为今后利用ISSR技术对杠柳种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。

河北省不同地区杠柳遗传多样性的ISSR分析

通过ISSR分子标记技术,对采自河北石家庄、保定、邢台、邯郸、张家口的11个杠柳(Periploca sepium Bunge)样品进行遗传多样性分析。结果表明,从100条通用引物中共筛选出34条适用于杠柳ISSR研究的多态性引物;对11个供试样品进行PCR检测,进一步筛选出8条多态性好、稳定性高的引物,共检测出79个ISSR位点,多态性位点63个,占79.7%;遗传相似系数(GS)变化范围在0.454 5~0.854 5,8对多态性引物多态信息含量值变化范围为0.747~0.884,平均为0.827;11份供试样品聚类分为三大类,聚类相对复杂,呈一定的地域相关性;ISSR分子标记适用于杠柳遗传多样性研究,且杠柳遗传多样性丰富。