基因与免疫的关系

(一)基因的概念结构与功能 早在1858～1865年奥地利遗传学家孟德尔在进行豌豆杂交试验中,提出了遗传因子(Hereditay factor)的概念,并发表了著名的遗传定律。后来,丹麦遗传学家约翰逊把这种因子命名为Gene,其音译即基因,一致延用到现在。但基因是什么?基因在哪里?当时都一无所知,经过半个多世纪的深入研究,已确定:携带传递遗传信息并编码一条多肽链的特定DNA(少数病毒为RNA)小片段即基因;后来,美国遗传学家摩尔根证明基因位于细胞核的染色体上。

白细胞介素研究进展

1 概况在讨论白细胞介素之前,还是应当把淋巴因子的发现情况作一简略的回顾,早在50年代初,George等用体外检测技术发现了由淋巴细胞产生的巨噬细胞移动因子,以后又相继发现了一些类似的因子,但对这类因子统一用淋巴因子(Iymphokine)命名,还是Dumonde于1969年首先提出的。淋巴因子系指T.B淋巴细胞再次受特异抗原作用时,产生的一种不能透析的可溶性的免疫活性因子,是细胞免疫和免疫调节的介质,以后发现,除淋巴细胞外。

猪致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱分析

在系统鉴定和药敏试验的基础上，对７０株致病性大肠杆菌进行了质粒指纹图谱分析。结果，菌株的质粒得率为１００％，可分为３２种质粒谱型。分离菌株在遗传距离０．１４０处聚成４类，在遗传距离０．２２４处聚成一大类。来源相同的菌株具有相同或非常相似的质粒图谱和质粒酶切图谱，来源不同的菌株具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱。来源相同菌株的质粒谱相同，而耐药谱可相同亦可不同，两者之间无明显规律。

乳房链球菌对克林霉素耐药基因的定位

采用试管稀释法和纸片法测定 9株乳房链球菌对克林霉素的耐药性 ,通过PCR反应检测克林霉素的耐药性基因 ,并进行测序比较。发现克林霉素对乳房链球菌的抗菌活力较强 ,克林霉素耐药基因同时存在于乳房链球菌的染色体和质粒上。

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中的应用

应用B淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空弯菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中4株的McAb针对CA中的耐热抗原成分,1株的McAb针对CA中的不耐热抗原成分。应用32种其它细菌对这些McAb的特异性检查表明,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,均为阴性反应。应用不同地区、不同来源的516株空弯菌对这些McAb进行检查,结果均为阳性反应。应用BA-ELISA、间接-ELISA对909份实际标本进行了检测,结果均与常规培养法无显著差异,可在28小时内报告结果。这表明本文研制的McAb对空弯菌的鉴定与检测具有特异、敏感和对本菌覆盖率高的特点,可用于人、兽空弯菌的鉴定与检验。

鸡致病性大肠埃希氏菌耐氧氟沙星质粒的检测

对分离的 2 0株鸡致病性大肠杆菌进行了药敏实验 ,筛选出 1 3株耐氧氟沙星 ( OFL )的菌株。经质粒提取、电泳和转化实验 ,获得一株由质粒介导的耐 OFL的多重耐药菌株。该菌株对参试的 1 1种抗生素全部耐药 ,其中 OFL MIC>50 μg/ml。该菌 R质粒电泳可见 6条带 ,转化大肠杆菌 DH5α,在 2 0 μg/ml OFL的 LB平板筛选得到转化子。该转化子含有原菌株中 2 .7kb的质粒 ,获得原菌株部分耐药性。连续转化 5次 ,均获得耐 OFL的转化子。证实该菌株对

猪链球菌病三价灭活疫苗的研究——安全性与免疫效力试验

在对长春地区临床分离的 2 0株猪源致病性链球菌基因分型的基础上 ,挑选出分属 3个血清型的 4株毒力强、免疫原性好且遗传距离较远的猪链球菌作为疫苗株 ,研制猪链球菌病氢氧化铝胶三价灭活疫苗。该疫苗对小鼠、断奶仔猪、育肥猪和妊娠母猪安全性好 ,无不良反应 ,对母猪繁殖性能无影响。小鼠效力试验证实 ,该疫苗的保护率为 10 0 % ,优于单价灭活疫苗和猪链球菌病活疫苗 ;田间效力试验证实 ,2种三价灭活疫苗 (菌液浓度分别为 2× 10 9CFU/mL和 4× 10 9CFU/mL)对猪的保护率分别为 83.3%和 10 0 % ;经田间试用免疫效果较好 ,试验组猪发病率和死亡率分别为 4 .2 %和 1.8% ,对照组猪发病率和死亡率分别为 2 6 .8%和 13.4 % ,经卡方检验 ,试验组与对照组相比差异极显著。表明该疫苗的安全性好 ,免疫效力高 。

提高细菌常规检验速度的探讨

目前,我国兽医临床检验室对细菌的诊断,多采用常规检验方法做检测,其最大优点是准确可靠,并且可以获得活细菌。依此,可以做出传染性疾病的最终诊断,还能做药敏试验,供做临床诊断的依据。

人肿瘤坏死因子α逆转录病毒表达载体的构建

应用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒构建了含人肿瘤坏死因子－α ｃＤＮＡ的过渡性载体ｐＢＴ１和ｐＢＴ２。用限制性内切酶ＢａｍＨＩ与ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＴ１ＤＮＡ，分离出了ＴＮＦ－α ｃＤＮＡ基因片段，并在其平末端加入了ＢａｍＨＩ接头。进而将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＴＮＦ－αｃＤＮＡ克隆到了逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１５′－端长末端重复序列（ＬＴＲ）下游的ＢａｍＨＩ切点上，构建了重组质粒ｐＺＩＰＴＮＦ。该重组质粒经琼脂糖凝胶电泳，限制性内切酶消化和核酸杂交鉴定分析，证明ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１中插入了ＴＮＦ－α ｃＤＮＡ，并且方向正确。本研究为应用重组逆转录病毒介导ＴＮＦ－α基因转移与治疗奠定了基础。

RAPD技术及其在链球菌分型中的应用

微生物的分型技术包括传统的分型方法和分子生物学分型方法两种。随机扩增多态性 DNA( RAPD)是一种建立在 PCR基础上的新的 DNA多态性检测技术 ,已广泛地应用于微生物基因分型。其主要特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组 DNA片段 ,继而通过凝胶电泳分析其指纹图谱特征 ,揭示不同菌株间的细微差别。这种方法简单、快速 。

质粒指纹图谱法对猪大肠杆菌病的分子流行病学研究

对从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的５株普通大肠埃希氏菌和７０株致病性大肠埃希氏菌进行了质粒指纹图谱分析，并对二者的关系进行了比较。结果表明，７０株致病性大肠埃希氏菌共分为３２种质粒谱型，质粒含有４．４×１０２～９．６２×１０４ｂｐ，相同来源的菌株属于同一种质粒谱型，不同来源的菌株属于不同的质粒谱型。从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的大肠埃希氏菌具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱，提示二者之间无同源性。本试验结果亦证明质粒指纹图谱法适用于大肠埃希氏菌菌株的分型鉴定，是一种简单、快速、有效的方法。

提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗原在鸡体内的免疫应答

应用木瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次。应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明：免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，ＥＬＩＳＡ的ＯＤ值（Ｘ）为０．２３，至第３次免疫后１０天，ＯＤ值（Ｘ）为０．４４。这表明从鸡ＭＤ肿瘤细胞提取的ＭＡＴＳＡ，再好鸡免疫接种后可出现明显的抗体应答。木研究结果为ＭＤ肿瘤疫苗的研制提供了重要的参考依据。

人白细胞介素6逆转录病毒表达载体的构建

实验以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒为载体，构建了人白细胞介素６次级克隆ｐＢＩＬ－６。用限制性内切ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＩＬ－６，分离并回收了ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段，并在其平未端加入了ＢａｍＨＩ接头。实验将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＩＬ－６全基因片段插入到了逆转录病毒载体ｐＺＬＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１的ＢａｍＨＩ位点上，构建了重组质粒ｐＺＬＰＩＬ－６。经对重组予ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳、限制住内切酶分析和核酸杂交鉴定，筛选出了含有ＩＬ－６ｃＤＮＡ片段及插入方向正确的ｐＺＬＰＩＬ－６。

pCMV－TNFα的构建及其在动物细胞中的表达

以ＸｂａⅠ和ＥｃｏＲＶ双酶消化ｐＢＴ１获得肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ基因片段，以ＸｂａⅠ和ＳｍａⅠ酶切点定向克隆入质粒载体ｐＣＭＶ４，构建了人ＴＮＦα重组质粒ｐＣＭＶ－ＴＮＦα。采用ＤＮＡ—磷酸钙共沉淀法转染ＣＯＳ７和ＮＩＨ３Ｔ３细胞，收集转染后不同时间的细胞培养上清，检测ＴＮＦα的表达水平和生物学活性。ＥＬＩＳＡ检测表明，两种细胞转染后，其培养上清中均有ＴＮＦα抗原存在，而载体等对照则测不出ＴＮＦα。以Ｌ９２９细胞检测其细胞毒活性，发现ＣＯＳ７细胞于转染后４８ｈ表达水平最高，活性高达１６Ｕ／ｍＬ以上，但７ｄ时测不出ＴＮＦα活性；ＮＩＨ３Ｔ３细胞于转染后２４ｈ活性最高（８Ｕ／ｍＬ），９ｄ时尚有表达，但不足１Ｕ／ｍＬ。

应用McAb·BA-ELISA快速检测动物源空肠弯杆菌的研究

应用抗空肠弯杆菌共同抗原的单克隆抗体,建立了快速检测动物源空肠弯杆菌的 BA-ELISA 程序。此程序可检出每 ml 含5个空肠弯杆菌24小时增菌培养物或每ml 含3.2×10~4个空肠弯杆菌纯培养物,不与金黄色葡萄球菌等16种对照菌及混合菌液发生交叉反应。用其对雉鸡等10种动物456份肛拭粪便标本进行检测,总阳性率为45.5%,与常规分离鉴定法的阳性符合率为99.1%.敏感性为99.2%.特异性为100%。统计学分析表明,所建立的 BA-ELISA 检测程序与常规分离鉴定法间具有极显著的一致性(p【0.01),能使检测时间缩短4～5天.