棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的表达

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Ａｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 凋亡抑制基因ｐ３５ 的合成引物，从棉铃虫核型多角体病毒（ Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ） 基因组中用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增到了１ｋｂ 片段。采用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 双脱氧核苷酸链终止银染法，测定了所扩增到的１ ０１０ｂｐ 全序列，发现其开放阅读框完整，长８９７ｂｐ ，编码２９９ 个氨基酸。用 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ Ｉ Ｓ 和 Ｐ Ｒ Ｏ Ｓ Ｉ Ｓ 软件分析发现，此片段与 Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ ｐ３５ 基因同源区核苷酸同源性为９１ ％ ，氨基酸同源性也达８１ ％ ，证明了所扩增的片段是 Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ 的ｐ３５ 基因。为了研究此ｐ３５ 基因的功能及其效应机制，克隆了这一基因并在大肠杆菌细胞中实现了表达。

棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救

野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞，不引起细胞凋亡，用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活，得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡，但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达，能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达，证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因，也是一个与杆状病毒复制相关的基因，它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。

国内生物芯片专利技术研究现状

概述了生物芯片技术的发展及国内生物芯片专利技术研究与开发现状

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原，为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．

稀燃天然气掺氢发动机循环变动的试验研究

对火花点火天然气发动机而言,稀燃是提高发动机燃油经济性和降低发动机排放的一种有效途径,但稀燃导致的循环变动是拓宽稀燃极限的一个主要限制因素,在天然气中掺混氢气作为燃料,可解决稀燃工况下循环变动过大的问题。为了研究掺氢对发动机循环变动影响,选取纯天然气和掺氢体积比为20%的天然气掺氢燃料,在6缸进气道喷射增压稀燃天然气发动机上进行不同点火提前角和空燃比工况下的试验研究。通过对缸内压力特性参数、燃烧特性参数以及排放数据的分析,结果表明:掺氢可有效降低发动机最高压力循环变动和平均指示压力循环变动,在稀燃情况下效果更为明显;掺氢可降低火焰发展期和燃烧持续期及其循环变动;在稀燃工况下,掺氢对控制发动机NOx及未燃HC排放有利。

实时荧光定量PCR法检测日本血吸虫

目的运用实时荧光定量PCR法检测日本血吸虫。方法根据日本血吸虫18S小亚基单位核糖体核酸(18SrRNA)基因设计特异性引物,PCR扩增出1450bp序列,经TA克隆后转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为模板制作荧光定量PCR标准曲线。方法重现性评价,用初始循环数(Ct,拷贝/反应)进行标准差分析,并计算变异系数(CV)。结果制作的标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9987。方法重现性评价,在1.05×107～1.05×103个拷贝范围内,对应的Ct平均值分别为17.55、20.93、24.32、27.59和30.95;CV值分别为1.31%、1.53%、0.90%、1.85%及0.90%,在重复性试验中试验间数据平均变异系数为1.27%,无非特异性扩增。在试验检测范围内(Ct≤30.95),可检测的日本血吸虫基因组浓度为6.15pg,3h内完成。结论运用荧光定量PCR方法检测日本血吸虫DNA,快速、灵敏、特异性高。

点燃式HCNG发动机一维数值模拟研究

利用AVL BOOST软件建立天然气掺氢(HCNG)发动机的整机工作过程一维模拟模型,通过与试验结果对比,证明了模型的适用性和准确性。并对HCNG发动机进行了一系列的变参数分析研究,主要变化参数包括体积掺氢比、负荷、压缩比及配气相位。模拟计算结果表明:提高掺氢比和负荷可提高缸内燃烧温度,使传热损失和NOx排放增加;提高压缩比有利发动机的动力性和经济性;进气迟闭角和排气提前角相位对发动机的动力性和经济性有较大影响。

天然气发动机掺氢20%时瞬态排放性能研究

对天然气发动机掺氢20%(体积比)的瞬态性能进行了研究。主要研究包括不同催化器ETC循环排放的对比、不同加速加浓因子的排放对比以及20%天然气掺氢发动机(HCNG)与纯天然气发动机的排放对比。试验结果表明:三种催化器都能使天然气掺氢发动机排放达到环境友好型汽车标准。随着加速加浓因子的增大,发动机扭矩跟随性越好,但会造成各种排放同时上升,特别是NOx上升幅度很大。三种氧化型催化转化器转化效率大小排序为:ECOCATⅡ型>国产催化器>ECOCATⅠ型。对于这三种催化器来说,随着催化效率的提高,排气阻力加大,发动机动力性下降,燃料消耗率上升。掺入20%氢气后,在不带催化器的情况下,NOx、CO、NMHC、CH4排放和燃料消耗率相对于原天然气发动机分别下降51%、36%6、0%4、7%和7%。

增压稀燃天然气掺氢发动机排放特性

为了研究20％掺氢比的增压稀燃天然气掺氢（HCNG）发动机的排放特性，通过对发动机进行了空燃比和点火提前角调整试验、ETC循环测试试验和加装氧化型催化器试验，获得了20％HCNG发动机的排放规律。CH4排放随着空燃比的增大先减少后增加；CO排放在高于理论空燃比后骤减；NOx排放随着空燃比的增大先增加后减少，在空燃比19～21左右达到最大值，1600～1800r／min时最低。CO、NOx随着点火提前角的增大而增加；CH4随着点火提前角的增大略有增加，并且点火提前角越大，对CH4排放的影响越小。加装催化器后，CO、CH4的转化效率均〉90％。试验结果表明：增压稀燃和氧化型催化器相结合是天然气掺氢发动机节能减排的有效方案。

慢性丙型肝炎患者中医证型与白细胞介素-28B基因多态性的关系

目的:研究CHC患者中医证型与白细胞介素28B(IL-28B)单核苷酸多态性(SNP)的关系,探讨中医证候的分子学机理。方法:通过回顾性研究,收集245例住院CHC患者的一般临床资料、中医证型和肝功能指标(ALT、AST、GGT、DBil、TBil、ALP和Alb)、HCV RNA含量,采用DNA测序技术检测CHC患者IL28B SNPs(rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs10853728)基因型,并与235例健康对照组比较。用SPSS 20.0软件分析各数据与中医证型的相关性。结果:245例CHC患者中医证型分布规律为肝郁脾虚证最多(177例,72.2%),其余证型分别为瘀血阻络证(38例,15.5%)、肝肾阴虚证(22例,9.0%)、肝胆湿热证(7例,2.9%)和脾肾阳虚证(1例,0.4%);肝郁脾虚证患者在年龄、AST、DBil、TBil、ALP和HCV RNA含量与其他证型比较,差异有显著性意义(P<0.01),且多见于年轻的、肝功能损伤程度较轻和HCV RNA含量较低的患者;肝郁脾虚证CHC患者的rs12980275 AA基因型和rs8099917 TT基因型和rsl2979860 CC基因型均显著高于其他证型(P<0.05,P<0.01),IL-28B 5NP与健康对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:CHC患者中医证型以肝郁脾虚证最多;年龄和肝功能某些指标在不同中医证型之间存在差异,CHC患者中医证型与IL-28B基因某些位点的多态性相关,值得深入研究。

实时荧光定量PCR鉴别检测单纯疱疹病毒方法的建立

目的:建立快捷、灵敏、特异的单纯疱疹病毒(HSV)的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测及分型方法。方法:选择HSV1和HSV2的糖蛋白B基因设计一对通用引物和对应的探针组建2个FQ-PCR反应体系,应用克隆的质粒建立系列标准品制作标准曲线,进行重复性和敏感性试验,以其他种类的细菌、病毒、真菌进行特异性分析,并用于检测生殖器疱疹患者的HSV1和HSV2。结果:HSV1和HSV2两标准曲线的线性检测范围均为105到1011Copies/L,相关系数均大于0.99,其他种类的细菌、病毒、真菌均未出现特异性扩增;48例生殖器疱疹患者疱液中HSV1和HSV2的检出率分别为6.3%(3/48)和87.5%(42/48)。结论:实时FQ-PCR法鉴别检测HSV1和HSV2,具有快速、特异、灵敏、便捷的特点,有助于HSV感染的流行病学和病理机制的研究;生殖器疱疹患者以HSV2感染为主。

人类疱疹病毒6、7、8型实验室诊断方法的研究进展

疱疹病毒是一类在分子生物学和医学上有重要意义的病毒,它们是典型的双链DNA病毒,在自然界中分布广泛。其中人类疱疹病毒（HHV）6、7、8型是近年来发现与幼儿急疹、移植性疾病和神经性疾病等相关的疱疹病毒。目前国内外对此3种病毒感染的致病机制、流行病学特征以及检测方法的研究比较活跃。疱疹病毒大约有100种之多,

猪瘟病毒荧光定量RT-PCR和RT-LAMP快速检测方法的建立

建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量RT-PCR和反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)技术检测猪瘟病毒(CSFV)的两种方法。根据对NCBI中CSFV E2基因序列进行分析,设计了CSFV E2基因的引物和探针,并以E2基因为模板构建了重组质粒。通过梯度稀释阳性标准品进行试验表明荧光定量RTPCR和RT-LAMP检测下限分别为102拷贝/μL和101拷贝/μL;特异性试验表明,两种方法对于其他5种病毒不能检出,具有良好的特异性。临床样本检测同样表明两种方法都具有良好的特异性和灵敏度。说明所建立的Taq Man-LNA荧光定量RT-PCR和RT-LAMP可应用于CSFV的检测。

用于基因治疗的病毒载体

近几年来，基因治疗研究发展迅速，目的是将外源基因导入靶细胞，在体内产生疗效。早在１９９０年美国ＮＩＨ的研究人员就将腺苷脱氢酶（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＡＤＡ）基因导入病人的淋巴细胞，改善了由于ＡＤＡ基因缺损造成的免疫缺陷［１，２］。基因...

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1,HIV-2IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点。用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟。与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点。同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值。

基于生物信号纳米放大技术的戊肝病毒检测基因芯片

建立了一种利用"双探针夹心银染"技术快速检测戊型肝炎病毒(HEV)的基因芯片方法.提取的病毒核酸经过RT-PCR扩增,PCR体系中用掺入生物素修饰的dUTP扩增得到带有生物素的核酸片段,5′末端-NH2修饰的同源寡核苷酸作为捕获探针固定到处理后的玻片上,该探针识别病毒的带有生物素的核酸片段,而链霉亲和素标记的胶体金与生物素紧密结合,通过银沉积在金颗粒表面放大信号可以目视结果.采用该方法对已经确证的86个血清样本进行检测,检出52个阳性和34个阴性样本,结果与荧光定量PCR检出一致.

血吸虫核酸诊断方法研究进展

血吸虫病是由裂体吸虫属血吸虫引起的一种热带性疾病。主要通过接触血吸虫疫水,尾蚴经接触部位的皮肤、黏膜侵入人体而造成感染。根据WHO报告,全世界有超过2亿人感染血吸虫病,孩童的感染率高于成人,我国是日本血吸虫病流行最严重的4个国家之一。血吸虫病的诊断通常是通过显微观察排泄物中的虫卵来确定。但这种方法的灵敏度不高,粪便中排出虫卵分布不均匀和排出量的波动性会对结果的准确性造成影响。

增压稀燃天然气掺氢发动机稳态标定

以东风EQD210N—20天然气发动机为原型机,在燃用体积掺氢比为20%的HCNG燃料的条件下,根据某公司电控系统的相关资料,分析了电控系统内部的控制策略,结合HCNG燃料自身的特点,对HCNG发动机进行稳态工况标定。外特性和其他工况采用不同的空燃比控制策略以使标定后的电控系统可以同样适用于HC-NG发动机,并且标定后的HCNG发动机满足国Ⅲ排放标准,其动力性和经济性与原型机水平相当。

目视化纳米探针检测宫颈癌组织HPV16E6基因的研究

目的 :建立目视化纳米探针检测宫颈癌组织HPV16E6基因的方法 ,为临床降低HPV感染者宫颈癌的发病率提供技术支持。方法 :采用固定于硅烷化片基上的捕获探针 ,特异性结合单链人乳头瘤病毒 16型新疆株E6基因 (HPV16E6 )扩增片断 ,再与互补的纳米金颗粒标记的探针结合 ,通过银染加强显色。结果 :初步建立了金标银染法快速检测HPV16E6DNA的技术。结论 :金标银染法灵敏 ,可以快速特异地检测出各类宫颈组织中人乳头瘤病毒的感染 ,为进一步应用于临床检测降低新疆维吾尔妇女宫颈癌的发病率奠定了基础。

目视化乙肝病毒基因芯片

优化了基于纳米金标记探针的目视化检测方法 ,将其用于检测从阳性血清中提取的乙肝病毒 ( HBV)基因 ,并与基于荧光素异硫氰酸酯 ( FITC)标记探针的荧光检测方法进行了比较 .结果表明 ,目视化乙肝病毒基因芯片诊断方法操作简单 ,成本低廉 .此类基因芯片在病毒基因检测领域将会有广泛用途 .