三七总皂苷抑制自然衰老大鼠神经细胞凋亡作用的研究

目的观察三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对自然衰老大鼠神经细胞凋亡的作用及其机制。方法将50只SD雄性大鼠随机分为青年组(3M组),自然衰老组(24M组),PNS低、中、高剂量组,每组10只。从18月龄开始,PNS低、中、高剂量组分别灌胃给与PNS 10、30、60 mg·kg-1,自然衰老组给予生理盐水,灌胃至24月龄,每周停药1 d,持续6个月。HE和Tunel染色法观察脑海马区神经元形态及细胞凋亡的变化。Western Blot法检测内质网应激(ERS)凋亡通路相关蛋白和Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及相关炎性因子的蛋白表达情况。结果与3M组比较,24M组大鼠海马区神经细胞排列紊乱,细胞大量变性,凋亡细胞明显增多,凋亡及炎症相关因子蛋白表达显著升高(P <0.05,P <0.01,P <0.001)。给予PNS干预后,可明显改善海马神经细胞形态,并减少细胞凋亡,显著降低凋亡相关蛋白c-Jun氨基端激酶(p-JNK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白表达,降低炎症小体3相关因子NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关点状蛋白(ASC)及下游炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF-α)的蛋白表达(P <0.05,P <0.01,P <0.001)。结论 PNS对衰老大鼠脑组织海马神经元具有保护作用,其机制可能与抑制ERS凋亡信号通路以及抑制NLRP3炎症小体的激活有关。

从内质网应激途径探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用

目的:研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法:将40只18月龄雄性SD大鼠随机分为4组,即自然衰老组及竹节参总皂苷低、中、高剂量组,以6月龄大鼠作为青年对照组,每组10只。竹节参总皂苷低、中、高剂量组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10、30、60 mg/kg的竹节参总皂苷,青年对照组和自然衰老组大鼠灌胃等体积生理盐水。灌胃持续6个月,每周连续灌胃6 d,停药1 d。HE染色观察大脑皮层的形态,TUNEL法检测各组大鼠大脑皮层中细胞凋亡情况,Western blot检测大脑皮层中GRP78、p-JNK、JNK、CHOP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与自然衰老组比较,竹节参总皂苷各剂量组大脑皮层组织形态结构有所改善,且细胞凋亡数量减少;竹节参总皂苷还能显著升高自然衰老组大脑皮层中Bcl-2蛋白表达,抑制GRP78、CHOP、Bax和p-JNK蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,减少脑细胞凋亡有关。

从NLRP3炎症小体途径探讨竹节参总皂苷改善自然衰老大鼠认知功能衰退的作用机制

探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对自然衰老大鼠认知功能衰退的改善作用及机制。18月龄SD雄性大鼠随机分为3组,即自然衰老组、竹节参总皂苷10 mg·kg^(-1)和30 mg·kg^(-1)剂量组,每组10只。竹节参总皂苷给药组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10,30 mg·kg^(-1)竹节参总皂苷,自然衰老组大鼠灌胃等量的生理盐水。灌胃持续6个月,每周连续灌胃6 d,停药1 d,另取10只6月龄的大鼠作为青年对照组。采用旷场、新物体认知和Morris水迷宫方法检测各组大鼠认知功能的改变,场电位记录法检测各组大鼠海马CA1区突触传递长时程增强(LTP)的变化。Western blot法检测各组大鼠NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3,ASC,caspase-1的表达变化以及突触可塑性相关蛋白Glu A1,Glu A2和学习记忆相关蛋白CAMKⅡ,CREB及其磷酸化表达的变化。竹节参总皂苷可改善衰老大鼠的认知功能衰退,减轻衰老大鼠海马CA1区LTP的受损程度,减少衰老大鼠NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3,ASC,caspase-1的表达水平。同时,竹节参总皂苷可增强突触可塑性相关蛋白AMPA受体亚型Glu A1和Glu A2的膜表达,增强衰老大鼠学习记忆相关蛋白CAMKⅡ,CREB的磷酸化表达水平。竹节参总皂苷可改善衰老大鼠认知功能衰退,其机制可能与其调节NLRP3炎症小体,进而调节AMPA受体膜表达,增强学习记忆相关蛋白CAMKⅡ和CREB的磷酸化表达有关。

竹节参总皂苷改善高脂高糖饮食小鼠的神经炎症及可能的机制

探索了竹节参总皂苷(saponins of Panax Japonicus,SPJ)对高脂高糖饮食诱导小鼠脑组织炎症反应的改善效果。Balb/c小鼠随机分为四组:正常对照组、模型对照组、SPJ低剂量组(100 mg/kg),SPJ高剂量组(300 mg/kg),分别给予普通饲料、高脂高糖饲料及添加不同剂量SPJ的高脂高糖饲料,喂养4个月。与正常对照组比较,模型对照组的皮层形态结构异常,细胞凋亡增多,小胶质细胞激活增加,炎症相关因子表达升高。给予竹节参总皂苷干预,可明显改善脑组织形态结构,减少细胞凋亡和小胶质细胞活化,减轻炎症相关因子i NOS、COX-2和IL-1β的蛋白表达,并抑制NLRP3炎症小体包括NLRP3、ASC、Caspase-1的表达。可见,竹节参总皂苷可具有改善高脂高糖饮食小鼠的脑组织炎症反应的效果,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的激活从而减少炎症因子表达有关。

基于小鼠子宫平滑肌收缩活性测定的桂枝茯苓胶囊质量评价研究

目的从桂枝茯苓胶囊(Guizhi Fuling Capsules,GZFLC)临床用于治疗痛经的功效出发,探索建立基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量生物活性评价方法。方法通过注射雌激素增加小鼠子宫敏感性,建立缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩模型,采集给药前后小鼠子宫平滑肌的收缩频率、幅值和峰面积,以收缩峰面积为指标进行统计并对药效进行归一化处理。考察小鼠离体子宫平滑肌收缩模型的主要影响因素如雌激素注射方式与天数、缩宫素浓度、动物周龄和GZFLC前处理方法。建立GZFLC质量生物活性评价方法并进行方法学考察,测定10个批次GZFLC合格样品及2个GZFLC高温破坏样品的生物活性。结果连续3 d ip雌激素10 mg/(kg·d)后小鼠子宫平滑肌收缩峰面积较高且收缩节律较好;最适缩宫素造模质量浓度为0.050μg/mL;将GZFLC配制成质量浓度为0.125 g/mL的药液并超声溶解60 min有利于药效发挥;重复性考察RSD为11.298%,日内精密度RSD为12.452%,日间精密度RSD为10.438%;10批次GZFLC半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为1.526~1.631 mg/mL,高温破坏后GZFLC的IC50明显增大。结论基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量评价方法重复性和精密度较好,为后续GZFLC的综合质量评价标准建立提供了科学依据。