基于RPA-CRISPR/Cas12a技术快速检测犬猫皮肤癣菌方法的建立

旨在建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)结合CRISPR/Cas12a技术的荧光检测方法,以快速、灵敏、可视化检测犬猫皮肤癣菌。以犬小孢子菌、石膏样小孢子菌及须毛癣菌为研究对象,针对真菌内转录间隔区,设计并合成特异性RPA引物和CRISPR RNA(crRNA),建立可同时或分别检测上述皮肤癣菌的荧光检测方法,并评价其检测灵敏度,通过检测临床样本评价本检测方法的敏感性和特异性。结果表明:RPA-CRISPR/Cas12a在37℃、总反应时间30 min的条件下,对三种皮肤癣菌的检测灵敏度可低至单拷贝。对24份临床样本进行检测,以真菌培养和菌落测序结果作为标准,使用可同时识别犬小孢子菌、石膏样小孢子菌及须毛癣菌的皮肤癣菌crRNA(dermatophyte crRNA,crRNA-DM)和可特异性识别犬小孢子菌的犬小孢子菌crRNA(Microsporum canis crRNA,crRNA-Mc)参与RPA-CRISPR/Cas12a反应时,敏感性和特异性均为100%。RPA-CRISPR/Cas12a技术可同时和分别检测犬小孢子菌、石膏样小孢子菌及须毛癣菌,所需时间短,结果可视化,敏感性和特异性高,无需昂贵仪器,适合临床快速诊断。

光动力疗法抗皮肤感染性疾病的研究进展

1光动力疗法的概念及原理光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)是指利用光敏剂和特定波长的光源,产生具有细胞毒性的物质,进行细胞杀伤作用的疗法;是一种非侵入性、副作用较小的治疗方式。该疗法利用具有光敏作用的光敏剂,在吸收特定波长的光能后跃迁到第一激发状态(First excited singlet-state,S_(1)),成为单线态光敏剂。单线态光敏剂分子不稳定,可以通过2种不同的弛豫过程回到基态:(1)单线态光敏剂放出所吸收的能量,直接从激发态回到基态,同时发出荧光;(2)激发态光敏剂通过系间窜越失去部分能量,跃迁至激发三线态(Excited triplet state,T_(1))。