耐酸微生物的酸胁迫天然产物

耐酸微生物是指那些可在低pH环境中生存的微生物,主要分布在含硫的温泉和土壤、红树林根际土壤、金属矿山土壤及矿水等环境中。它们具有特殊的生物代谢途径,能够产生具有抗菌、抗肿瘤、抗炎和抗甲型流感病毒H1N1等生物活性的新结构。本文总结了1971年12月—2016年12月间报道的62个新的耐酸微生物酸胁迫天然产物,包括其来源、结构与生物活性。结果表明,耐酸微生物酸胁迫天然产物的出新率为65%、活性率达68%,是一类潜在的药用生物资源,值得深入研究。

切除眼轮匝肌下脂肪垫在肿泡眼重睑成形术中的应用

目的:通过对眼轮匝肌下脂肪垫(SOOF)的解剖观察,探讨其部分切除在肿泡眼重睑术中的应用效果。方法:对215例肿泡眼施行切开重睑术,在常规切除肥厚的眼轮匝肌和膨隆的眶隔脂肪以减轻上睑臃肿的同时,去除部分上睑外侧肥厚的眼轮匝肌下脂肪垫。结果:临床解剖观察表明眼轮匝肌下脂肪垫在肿泡眼眼睑中较丰富,它位于眼轮匝肌下,覆盖在外侧眶缘上,向外伸展指向眉弓的末端,在眼睑的眶外缘形成檐盖状膨隆,该脂肪垫在上睑外1/3处肥厚更明显,组织较致密。肿泡眼患者重睑术中适当去除部分肌下脂肪垫后上眼睑变薄,重睑弧度自然,形态逼真。术后随访3个月～1年,均获满意效果。结论:只要熟悉眼睑的解剖层次,并谨慎操作,术中适当切除该脂肪垫,可明显提高肥厚眼睑重睑后的美容效果。

核磁共振定量技术引入药物分析实验的探索

核磁共振定量技术是一种以结构分析为基础的新型定量分析方法,在药物质量控制领域得到了广泛的应用。该文从传授理论知识、创新教学内容及建立课程评价体系3个方面,探索了将核磁共振定量技术引入药物分析实验的具体实施方案。实践表明,这一探索将科研新成果新方法带入实验教学,激发了学生探索科学的积极性,提高了他们的动手能力,为实现高水平高校创新人才培养打下坚实的基础。

两种入路眼袋整复术中发生的眼心反射

目的:通过眼袋整复术观察眼心反射,并探讨其可能的发生机制及预防措施。方法:共对 80 例受术者进行眼袋整复,其中经结膜入路 42 例,经皮肤入路 38 例,术中进行动态心电图监测,分析比较术前、术中心率的变化。结果:眼心反射阳性标准:心率较术前每分钟减慢 10 次以上。所有病人中,共 13 例出现眼心反射,其中经结膜入路 8 例,经皮肤入路 5 例,均在提拉剪除眶隔脂肪时发生。眼心反射发生率为 16.25%。 结论:眼袋整复术中可以发生眼心反射,即出现心率减慢、心脏节律的改变。所以手术应轻柔、准确、快捷,以尽量避免眼心反射的发生。

核磁共振测试平台管理模式的探讨与实践

核磁共振波谱仪属于大型精密贵重仪器设备,是高校人才培养和科学研究的重要支撑资源,如何构建"运转高效、服务共享"的测试平台至关重要。中国海洋大学核磁共振测试平台在多年的运行实践中,探索出适合学校实际情况的管理运行模式。由学校宏观调控,建立健全专人管理、资源共享、有偿使用收费等管理制度,学院微观自主,建立高效运转的运行机制,切实提高核磁共振波谱仪使用效率,更好地为教学和科研提供技术支撑。

小分子化合物与铝佐剂联用对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833保护效果的影响及机制初步研究

目的评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate,DTC)、左旋咪唑(levamisole,LMS)、咪喹莫特(imiquimod,Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响,并进一步对其机制进行初步研究。方法抗原PA0833分别与上述3种小分子以及铝佐剂配伍制备疫苗,通过肌肉注射的方式于0、14、21 d分别免疫BALB/c小鼠。收集3次免疫后血清,ELISA测定PA0833特异性IgG抗体水平。采用铜绿假单胞菌PAO1感染免疫后的小鼠,通过生存率、体重变化、临床评分、炎症因子检测和肺组织病理学改变等评价疫苗的保护效果。在此基础上,对小鼠连续7 d肌肉注射DTC,取肺脏组织进行转录组测序分析,并通过流式细胞术检测其对抗原提呈细胞活化的影响。结果联用小分子免疫组能够有效提高PA0833特异性IgG抗体效价,降低细菌感染后肺组织中细菌负荷和TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平,显著提高细菌感染后的生存率,其中DTC效果最好。转录组测序结果表明,相比于PBS对照组,DTC处理组样本有121个基因表达上调、18个基因下调;差异表达基因主要富集在免疫信号通路,IL-17信号通路活化明显。流式细胞术结果表明DTC能促进脾细胞中Th17细胞分化,且能促进抗原提呈细胞活化。结论本研究中的3种小分子都能够有效地增强抗原的免疫原性,其中DTC效果最优,可用于新型疫苗佐剂的研发。

调Q开关紫翠宝石激光治疗颧部褐青色痣的应用研究

目的 观察调Q开关紫翠宝石激光机治疗颧部褐青色痣的临床效果。方法 采用美国赛诺秀公司调Q开关闪光灯泵浦紫翠宝石激光机，波长752nm，选用不同的激光技术参数进行治疗。结果 38例患者均经3～5次治疗，每次间隔2～3个月。经3次治疗9例（23．7％），4次治疗13例（34，2％），5次治疗16例（42．1％）。痊愈22例（57．9％），显效11例（28．9％），有效5例（13．2％），无效0，总有效率为86．8％，疗效与治疗次数成正相关。5例出现不同程度的继发性色素沉着。3个月后逐渐消退，所有病例均无瘢痕形成。结论 调Q开关紫翠宝石激光机治疗颧部褐青色痣安全有效。

南极嗜冷真菌Pseudogymnoascus sp.OUCMDZ-3578次级代谢产物研究

目的对来源于南极苔藓的嗜冷真菌Pseudogymnoascus sp.OUCMDZ-3578进行菌种鉴定及次级代谢产物的研究。方法通过分子生物学方法鉴定菌株种属;综合运用硅胶柱层析、薄层色谱和半制备高效液相色谱等色谱学方法对次级代谢产物进行分离纯化,通过核磁共振(NMR)、质谱(MS)等现代波谱学方法并结合文献对所得化合物进行结构鉴定,测试了化合物对Aβ42聚集的抑制活性。结果分离鉴定出6个单体化合物,包含3个二苯甲酮类化合物sulochrin(1)、hydroxysulochrin(2)、desmethylsulochrin(3),3个蒽醌类化合物questin(4)、questinol(5)、endocrocin(6)。化合物对Aβ42聚集均未表现出抑制活性。结论从南极苔藓样品中分离获得的嗜冷真菌次级代谢产物中分离鉴定了化合物1~6,对研究嗜冷真菌及其代谢产物做出了探索。

耐酸青霉菌Penicillium purpurogenum OUCMDZ-019的次级代谢产物研究

目的对耐酸产紫青霉OUCMDZ-019的次级代谢产物进行化学成分和生物活性研究,发现潜力结构资源。方法对菌株进行规模发酵得到粗提物,利用常压柱层析、凝胶分子筛以及半制备高效液相等方法进行次级代谢产物的分离纯化;利用现代波谱学方法(核磁共振1D NMR、2D NMR、圆二色谱ECD、旋光等)对化合物进行结构鉴定,并评价其抗病毒生物活性。结果分离鉴定得到4个单体化合物,(-)-mitorubrinol(1)、6″-Hydroxy-(R)-mitorubrinic acid(2)、(-)-mitorubrinic acid(3)、purpurquinone D(4)。结论从耐酸真菌产紫青霉OUCMDZ-019的次级代谢产物中分离鉴定得到了化合物1~4,均属于嗜氮酮类化合物。生物活性测试结果显示,化合物1~4均无显著抗H1N1病毒活性。研究获得量产化合物3,为后续药物的结构衍生打下基础。

黄河三角洲耐盐真菌Penicillium chrysogenum HK14-01的次生代谢产物

【目的】从黄河三角洲耐盐微生物的代谢产物中寻找具有抗菌和抗肿瘤活性的化合物。【方法】应用化学与生物活性相集成的筛选方法,从耐盐微生物中筛选获得代谢产物丰富并具有生物活性的目标菌株;通过高盐胁迫目标菌株,利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用波谱解析、钼靶X-射线单晶衍射分析、圆二色散谱(CD)和密度泛函数(DFT)-ECD的计算鉴定化合物的结构。【结果】从采自黄河三角洲的泥土样品中得到一株耐盐真菌HK14-01,鉴定为产黄青霉Penicilliumchrysogenum;从其发酵产物中分离鉴定了8个化合物:(2S,3R)-oxaline(1,主产物)、(3R,4R)-3,4,8-trihydroxy-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one(2)、(Z)-N-(4-hydroxystyryl)formamide(3)、(E)-N-(4-hydroxystyryl)formamide(4)、emodin(5)、4-(2-hydroxyethyl)benzene-1,2-diol(6)、methyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(7)和2-(4-hydroxy phenyl)acetonitrile(8);化合物1、3和4对大肠杆菌以及化合物1和5对金黄色葡萄球菌表现出抑菌活性,化合物5对P388细胞表现出微弱的细胞增殖抑制活性。【结论】首次确定了化合物2的绝对构型、首次报道了化合物1和2的CD数据;从黄河三角洲的耐盐微生物的次生代谢产物中可以得到活性化合物,这一区域的耐盐微生物资源值得深入研究。

环境胁迫对珊瑚共附生真菌Aspergillus ochraceus LCJ11-102次生代谢产物的影响

【目的】研究环境胁迫对珊瑚共附生真菌Aspergillus ochraceus的次生代谢的影响,寻找活性代谢产物。【方法】采用仿生培养和高盐胁迫两种不同的发酵条件对菌株进行液体大发酵,运用HPLC指纹图谱考察发酵产物的化学多样性,采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用波谱和Mosher方法鉴定化合物的结构。【结果】发现菌株在两种环境胁迫条件下产生了不同的次生代谢产物,从中分别鉴定了4个(1-4)和1个主要化合物5:R(-)-mellein(1)、(5,6-trans,8,9-threo-)-9-chloro-8-hydroxy-8,9-deoxyaspyrone(2)、(5,6-erythro-,8,9-threo-)-9-chloro-8-hydroxy-8,9-deoxyasperlactone(3)、(5S,6R,9S)-dihydroaspyrone(4)和R(+)-semi-vioxanthin(5)。【结论】环境胁迫可以诱导海洋微生物产生不同的次生代谢产物,仿生培养是从海洋微生物中获得氯代产物的有效途径。

海洋来源放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件优化

目的对海洋来源放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件进行优化,提高放线菌素D的产量。方法对培养基的组成、种龄、装液量、pH、盐度和发酵时间等条件的研究,通过单因素和正交试验,选择最优发酵条件;并通过波谱分析及其理化性质确定放线菌素D结构。结果最佳培养基为:K2HPO41.5g、MgSO40.5g、酵母浸膏5g、可溶性淀粉22.5g、陈海水1 000mL;最佳发酵条件:装液量150/500mL(体积分数)、种龄4d、盐度3%、起始pH=7.5、摇床(180rpm)发酵12d。结论以最佳发酵条件发酵,优化后放线菌素D的产量为优化前的3.6倍,达到364mg/L。

花刺柳珊瑚共生真菌Penicillium sp. gx wz406的次生代谢产物研究

目的从珊瑚共生真菌中获得抗肿瘤药物先导化合物。方法通过集成化学与细胞毒性的筛选方法筛选目标菌株,采用现代色谱和波谱的方法分离鉴定目标菌株的活性代谢产物,通过化学沟通鉴定化合物的绝对立体构型。结果和结论从采自广西涠洲岛的花刺柳珊瑚(Echinogorgia floraNutting)中筛选获得了1株具有细胞毒活性的青霉菌(Penicillium sp.)gxwz406,从其发酵产物中分离鉴定了5个化合物:S(-)-2-(2-hydroxypropanamido)benzamide(1)、R(+)-chrysogine(2)2、-pyruvylaminobenzamide(3)、nicotinamide(4)和2',3'-dihydrosorbicillin(5),并首次确定了化合物1的绝对构型。

浒苔共生真菌HT-2次生代谢产物的研究

目的探究浒苔共生真菌——蜡叶散囊菌(Eurotium herbariorum)HT-2的次生代谢产物及其抗菌活性。方法菌株规模发酵,有机溶剂萃取,采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及HPLC等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用紫外、红外、核磁共振等手段鉴定化合物的结构;采用二倍稀释法评价化合物的抑菌活性。结果从浒苔共生真菌E.herbariorum HT-2的发酵产物中分离鉴定了10个化合物:preechinulin(1)、cyclo-(L-Trp-D-Val)(2)、(+)-neoechinulin A(3)、neoechinulin B(4)、crypotechinulin C(5)、cyclo-(L-Trp-L-Ala)(6)、variecolorin H(7)、2-(E-1-庚烯基)-3,6-二羟基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛(8)、2-(E,E-3,5-庚二烯基)-3,6-二羟基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛(9)和2-(E,E-1,3-庚二烯基)-3,6-二羟基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛(10)。化合物2、4和8分别对产气杆菌Enterobacter aerogenes、大肠杆菌Escherichia coli、枯草芽孢杆菌Ba-cillus subtilis具有弱的抗菌活性。结论浒苔共生真菌HT-2菌株能代谢产生具有抑菌活性的化合物。

复合诱变选育星形孢菌素产生菌

目的提高蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素产生菌株的发酵效价。方法以海洋来源的链霉菌Strepto-myces fradiae 007、S.arenaeZ4007和S.rubrolavendulae T H W-12为出发菌株,采用紫外线照射和亚硝基胍复合诱变,结合HPLC进行筛选。结果从菌株Streptomyces fradiae 007中得到一株高产突变株,发酵效价由原来的1.02μg.mL-1提高到9.06μg.mL-1,提高了8倍,突变株性状稳定。结论复合诱变是一种简便有效的提高菌株发酵效价的方法。

口内入路下颌角碎骨矫治下颌角肥大

2002年3月至2004年1月，我们采用口内入路高速旋转碎骨的手术方法，去除肥大的下颌骨24例，通过临床观察及随访发现，该高速旋转碎骨法．不仅手术方法安全可靠、操作简单，而且术中视野暴露清楚、去除下颌骨的量及弧形容易掌握，手术时间短，术中出血少，恢复快。

睑板前联合筋膜重建符合生理特征的重睑术

目的 通过对睑板前联合筋膜组织的解剖特点分析,探讨其在符合生理特征的重睑术中的临床意义。方法解剖显示上睑提肌向下延伸的联合筋膜将位于其外层的皮肤肌肉与深面的睑板粘连在一起,起着上睑提肌与眼轮匝肌到睑板前各层组织的动力传递作用。在切开重睑形成术中采用切口下唇皮缘直接与联合筋膜相缝合的方式形成重睑皱襞。结果通过对125例单睑患者施行重睑成形术,术后平均7～10天局部消肿,1～2个月恢复自然,重睑弧度流畅,在睁眼时显现生动活泼的重睑线,而闭眼时重睑线不明显,极似天然的双眼皮形态。随访3个月～年,均获满意效果。结论与传统重睑成形术相比,这种方法可提供一种符合生理特征的重睑成形术,值得推广与应用。

筋膜悬吊和串珠线埋藏法面部除皱术

目的探讨延长面部除皱手术远期效果的手术方法。方法自1999年10月至2008年8月，采用局部麻醉的方法，对105例额颢部轻中度皮肤松弛的患者行发际内微切口筋膜提紧悬吊，同时行面部皮下串珠线埋藏术。结果105例患者中，线结露出者1例，将露出线剪短即可；术区皮肤不平整者3例，于术后4周自然平整；余患者无明显并发症发生。随访其中的86例患者1～6个月，78例患者感觉满意，满意率达90．7％。结论串珠线皮下埋藏可拮抗除皱术对皮肤的过度拉伸而导致的皮肤弹性的破坏，减缓皮肤的弹性衰减生理过程，延长单纯筋膜悬吊术的远期效果。

红树林耐酸真菌Aspergillus sp.OUCMDZ-1914次生代谢产物研究

为获得活性微生物代谢产物,从海南文昌红树林根泥样品中分离筛选到耐酸真菌Aspergillus sp.OUCMDZ-1914,通过酸性条件发酵培养,发酵产物经过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱进行分离纯化,运用NMR、MS、UV、IR、X射线单晶衍射等手段鉴定了9个化合物的化学结构,即:(2Z,3E,5E,7E,9E)-4,10-二甲基-11-[3-(2,5-二氧亚基四氢吡咯)基]-2-(2-羟基乙亚基)-11-氧亚基-3,5,7,9-十一碳四烯酸甲酯(1)、RKB-3384A(2)、JBIR-74(3)、JBIR-75(4)、secalonic acid D(5)、oxaline(6)、meleagrin(7)、okaramine H(8)、citreorosein(9),其中1为新化合物.活性测试表明化合物2对甲型流感病毒H1N1的抑制活性与阳性药利巴韦林相当,IC50为116.2μmol/L;化合物5对A549、MCF-7和K562细胞株表现出较好的抑制活性,IC50分别0.23,4.45和3.68μmol/L;化合物6具有α-糖苷酶抑制活性,IC50为0.84mmol/L,与阳性药阿卡波糖相当.