热激活的Vg1转基因文昌鱼品系构建及表型分析

[目的] Vg1作为Nodal信号通路的重要配体之一参与了早期胚胎发育过程中的背腹分化调控及左右不对称模式的建立.构建Vg1转基因文昌鱼品系以研究其在文昌鱼胚胎不同发育阶段的功能.[方法]结合Tol2转座子转基因系统和热敏启动子Hsp70构建文昌鱼BbHsp70-BfVg1稳定转基因品系;并用热激实验、表型统计和原位杂交等手段对该转基因品系的有效性进行评估.[结果]热激结果显示,在囊胚晚期热激处理Vg1转基因文昌鱼导致胚胎背腹轴形成异常;在原肠胚中期热激处理Vg1转基因文昌鱼导致胚胎原本左右不对称的器官变为对称分布.基因表达分析结果显示,在囊胚晚期热激F1代胚胎中有部分比例胚胎的Vg1呈现全身性表达,背部中胚层标记基因Gsc表达扩张,腹部标记基因Evx表达下调,神经标记基因SoxB1a向腹侧蔓延;在原肠胚中期热激F1代胚胎中有部分比例胚胎的左侧特异基因Pitx呈现两侧对称表达,左侧口前窝标记基因Pit呈现两侧对称表达.[结论]初步构建了一个能够实现实时热激活Vg1的文昌鱼稳定转基因品系,并为后续在文昌鱼中进行基因功能研究提供了一个新手段.

文昌鱼Gsc基因在早期胚胎发育中的功能

同源异型盒基因Goosecoid(Gsc)在脊椎动物胚胎“组织者”和脊索前板形成中具有重要功能.为探究该基因在脊索动物胚胎发育中的功能演化,通过基因过表达、原位杂交等手段对其在文昌鱼胚胎发育中的功能展开分析.结果显示:向文昌鱼胚胎中注射Gsc mRNA及其转录抑制形式EN-Gsc(HD)mRNA,均导致胚胎发育出现相似的体轴发育畸形,说明Gsc在文昌鱼胚胎发育中具有重要功能,且主要以抑制型转录因子形式发挥作用.基因表达分析显示,Gsc过表达导致原肠胚期中胚层发育相关基因Brachyury、Wnt8和背部标记基因Chordin、Lefty的表达量下降,腹部标记基因Vent表达范围向背部扩张;神经胚中期Brachyury在后端尾芽的中胚层祖细胞中表达量下降,体节标记基因m-actin标记的体节数减少,神经管和尾芽标记基因Wnt3在尾芽处的表达量下降而在神经管处表达范围变宽.以上结果表明,文昌鱼Gsc基因在胚胎早期发育过程中的体轴建立、中胚层形成及后期尾芽功能维持中均有重要功能.

金钱白花蛇及其伪品的Cyt b基因片段序列分析和PCR鉴别研究

对金钱白花蛇及其伪、混品药材和原动物的Ｃｙｔｂ基因片段的序列分析发现，该基因片段在金钱白花蛇及其伪品间的差异远远大于金钱白花蛇种内个体间的差异，是理想的用于鉴别金钱白花蛇及其伪混品的分子遗传标记。在对Ｃｙｔｂ基因片段序列分析的基础上，设计了金钱白花蛇ＰＣＲ鉴别的一对高度特异性引物ＢｕＬ１和ＢｕＨ１。结果表明，该对引物在对金钱白花蛇的ＰＣＲ鉴别中，用６０℃～６５℃的复性温度，可以１００％检出金钱白花蛇，误检率和漏检率为０，并能在混合的药材粉末中检测出被检样品中是否含有金钱白花蛇组份。本研究还表明ＰＣＲ鉴别将有可能成为中成药复方组分鉴别的一种新手段。

通过Cyt b基因同源序列比较评估厦门文昌鱼的分类学地位

白氏文昌鱼Branchiostomabelcheri (Gray)在我国和日本沿海均有分布 ,由于南、北方文昌鱼形态学上有一定差异 ,且二者间存在一些过渡类型 ,其分类地位问题仍有待进一步澄清。本文测定了厦门欧厝海域产的文昌鱼mtDNACytb基因序列 ,并与日本产的文昌鱼以及另外产于大西洋的两种文昌鱼Cytb基因序列比较。分子系统学分析结果表明 :厦门欧厝海域产的文昌鱼与日本产的文昌鱼平均遗传距离为 2 1 12 % ,达到了种间分化的水平 ;经过对已有文献和文昌鱼地理分布的综合分析 ,作者建议将原来的白氏文昌鱼青岛亚种B belcheritsingtauense提升为种 ,南、北方所产文昌鱼分别作为两个独立的种存在 ,即南方的B belcheri (Gray)和北方的B

中药材乌梢蛇及其混淆品的DNA序列分析鉴别

ＤＮＡ序列分析鉴别是中药材品种鉴定的新方法［１］，已应用于海马、龟甲、鳖甲等中药材的鉴定［２～７］。目前商品流通中乌梢蛇（ＺＡＯＣＹＳ）药材的混淆品种类较多，游蛇科（Ｃｏｌｕｂｒｉｄａｅ）的常见种类都有可能被当作乌梢蛇制成药材，品种鉴定困难［８］。而...

几种游蛇的Cyt b基因片段序列分析及其演化关系(英文)

分别从蛇类药材和冷冻保存的新鲜蛇类肌肉标本中提取DNA，经PCR扩增出12种蛇共25个样品的Cytb基因片段，并用银染测序的方法对DNA序列进行了分析。在此基础上用MEGA软件重建的系统发生树表明，研究的11种游蛇科蛇类可以分为3组：第一组为赤链蛇和水赤链游蛇，第二组为马梢蛇和灰鼠蛇，第三组为锦蛇属的蛇，它们与第二组较近。锦蛇属是一高度分化的属，该组至少可分为两类，一类包括百花锦蛇和黑眉锦蛇；另一类包括玉斑锦蛇、棕黑锦蛇、红点锦蛇、王锦蛇和双斑锦蛇。后一类还可进一步分为3个亚组，玉斑锦蛇和棕黑锦蛇为第一亚组，红点锦蛇单独为第二亚组，王锦蛇和双斑锦蛇为第三亚组。本研究结果还表明，多年保存的陈旧药材标本可以用DNA序列分析的方法对其进行分子系统演化关系的研究。

不同固定剂保存动物组织标本对RAPD反应的影响

为解决野外采集动物标本时，有效地保存好标本，并方便地带回实验室用于ＲＡＰＤ分析的难题，该研究以同一个体的冻存组织为对照，比较了从４种不同固定剂保存的组织标本中提取ＤＮＡ，并用于ＲＡＰＤ扩增。结果表明，用含５０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ的７０％乙醇作为固定剂最好，这种固定剂固定的标本，夏季室温下至少可以保存两个月，不影响其中的ＤＮＡ提取和扩增结果。

用RAPD标记检测六种蛇基因组DNA多态性

用 ＲＡＰＤ技术检测了乌梢蛇 Ｚａｏｃｙｓ ｄｈｕｍｎａｄｅｓ、王锦蛇 Ｅｌａｐｈｅ ｃａｒｉｎａｔａ、黑眉锦蛇 Ｅ．ｔａｅｎｉｕｒａ、双斑锦蛇 Ｅ． ｂｉｍａｃｕｌａｔａ、赤链蛇 Ｄｉｎｏｄｏｎ ｒｕｆｏｚｏｎａｔｕｍ和日本蝮短尾亚种 Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｂｌｏｍｈｏｆｆｉｉｂｒｅｖｉｃａｕｄｕｓ等６种蛇的基因组ＤＮＡ的多态性。经２０个随机引物扩增得到２５３个多态片段，其中锦蛇属３个种共有片段８条，游蛇科５个种共有片段５条。在这些共享片段中未检测出种内多态现象。片段分布和片段共享度聚类分析所得的游蛇科５种蛇之间的亲缘关系与染色体、颅骨和半阴茎研究的结果基本一致。

扬子鳄饲养种群线粒体DNA控制区的序列多态性

扬子鳄 (Alligatorsinensis)是中国特有的珍稀爬行动物 ,至 2 0 0 0年 ,野生扬子鳄的个体数已不足 15 0条 ,作为保护这一物种的措施之一 ,先后于 80年代初建起了 2个养殖场 ,现人工繁殖的扬子鳄总数已达 90 0 0余条。为揭示扬子鳄种群遗传多样性 ,从两个饲养种群中采集了 42个个体的样品 ,其中宣州样品 33个 (XZSP) ,长兴样品 9个(CXSP) ,用PCR方法扩增mtDNA控制区 ,扩增产物纯化后直接用ABI 310全自动遗传分析仪荧光标记测序 ,得到其中 39个个体的mtDNA控制区 5′端 46 2bp的序列。经比对发现 ,39个个体间的 5′端mtDNA控制区没有任何变异位点 ,共享一种单元型 ,提示扬子鳄饲养种群的遗传多样性非常贫乏 ,造成这一结果的主要原因是近 5 0年来 ,扬子鳄种群衰退和数量迅速减少导致的遗传多样性丢失 ,其次是人工繁殖的群体同时受到始创者数量较少产生的瓶颈效应影响。针对扬子鳄遗传多样性的现状 ,作者最后就这一濒危动物遗传多样性的保护对策提出 3点建议。

文昌鱼的实验室繁育及子二代获得

文昌鱼特殊的进化地位、简单的器官系统和终生透明的躯体等特征,使其很有希望成为一个新型实验室模式动物。要实现文昌鱼的模式动物化,实验室内全人工条件下繁殖是关键的第一步。为此,我们于2003年9月和2004年4月两次采集产于厦门海域的2种文昌鱼,开展实验室内养殖研究。经过3年多的持续实验室养殖,继2005年夏季于实验室内繁殖出子一代文昌鱼后,又在2006年夏季成功获得了这两种文昌鱼的子二代,初步实现文昌鱼在实验室内的全人工养殖。对子代文昌鱼养殖的初步观察发现,不同水温对生长发育速度有一定影响,提示有可能通过水温控制实现文昌鱼一年多次产卵的目的。目前这两种文昌鱼子二代幼体已完成变态,进入亚成体生长发育阶段,其体长分别已达14.6mm(日本文昌鱼Branchiostomajaponicum)和6.5mm(白氏文昌鱼B.belcheri)。

蛇类药材分子遗传标记鉴别的初步研究

蛇类药材分子遗传标记鉴别的初步研究王义权周开亚（南京师范大学生物系，南京２１００９７）蛇类药材的鉴别，目前主要是根据其外部形态特征［１，２］和骨骼、鳞片的形态特征［３～５］。随机扩增多态ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈ...

DNA分子遗传标记鉴别在生药鉴定中的应用前景

概述了ＤＮＡ分子遗传标记技术在生药鉴别中的理论依据，并综述了该技术在生药鉴定中的应用情况和实际应用中需注意的问题，展望了ＤＮＡ分子遗传标记鉴别在生药鉴定中的前景。

中药材品种高特异性PCR鉴别原理及其应用前景

中药材品种高特异性ＰＣＲ鉴别是新近报道的一种具有实用价值的中药材品种分子遗传标记鉴别方法。概述了中药材品种高特异性ＰＣＲ鉴别的原理，归纳了鉴别引物的设计原则，展望了该方法在中药材品种鉴定中良好的应用前景。

蛇类药材的商品调查及鉴定

1993年对全国10个省区的蛇类药材商品进行了调查,共收集蛇类药材263件,鉴定出商品乌梢蛇药材原动物6种,商品金钱白花蛇药材原动物4种(其中广西产白花蛇1种),商品蕲蛇药材原动物4种。商品药材中金钱白花蛇伪品数量最多,乌梢蛇也时有混淆品可见,蕲蛇的混淆品较少。鉴于商品“白花蛇”一名十分混乱,建议将白花蛇名称规范化。

16种蛇鳞的微皮纹分析

对16种蛇鳞的扫描电镜观察表明，蛇类鳞片微皮纹的基本结构是由d约05μm横行排列的小孔和介于小孔间向后延伸的指状突构成背鳞的微皮纹结构有种的特异性同一种蛇的原动物、蛇蜕和药材标本相同部位的鳞片具有相同的微皮纹特征因此蛇鳞的微皮纹特征亦可作为蛇类药材的鉴别依据之一，并以背鳞的微皮纹特征为依据，编制了16种蛇背鳞微皮纹特征检索表。

SARS冠状病毒基因片段变异分析

采用基因序列和生物信息分析法,研究了SARS CoV复制酶基因中4个片段.结果发现,片段I与已报道的SARS冠状病毒ZJ01有2个位点不同,片段III与CUHK W1、CUHK Su10、HKU 39849和Hong Kong各有1个位点的差别;片段IV与GZ01间有1个位点的变化.同时对已公布的17个全基因组序列进行比对分析,可找到共137个变异位点,其中仅出现1次的变异位点119个,间约信息位点18个.

文昌鱼分类学研究及展望

文昌鱼是最接近脊椎动物直接祖先的现生动物,在脊椎动物起源与演化研究中占有极其重要的位置。近年来,对文昌鱼的研究已引起越来越多的科学家的兴趣,然而作为生命科学研究的重要基础,这类动物的分类学研究相对滞后。依据已有的中国文昌鱼资源调查资料,中国沿海文昌鱼的分布应当十分广泛,即只要有适合文昌鱼栖息的沙滩,均有文昌鱼分布的可能。根据目前的分类学研究成果和动物命名法中的优先权原则,建议将产于青岛等地的文昌鱼种名Brnachiostoma belcheri tsingtauense订正为B.japonicus,南方的文昌鱼保留其原种名B.belcheri。由此,目前分布在中国沿海的鳃口文昌鱼属(Branchiostoma)至少有2种,侧殖文昌鱼属(Epigonichthys)有1～3种,漂浮文昌鱼(Amphioxides pelagicus)1种。DNA分子标记技术在文昌鱼分类学研究中将会发挥更大的作用。

金钱白花蛇及其伪品的DNA分子诊断鉴别

为建立金钱白花蛇品种的DNA分子标记鉴定方法，本文通过提取金钱白花蛇及其伪品药材和原动物样品的模板DNA，用通用引物扩增样品的Cyt b基因片断。PCR扩增所得产物纯化后直接测序，所得序列经对位排列和比较金钱白花蛇及其伪品的DNA序列，发现Cyt b基因片段的种间差异显著大于种内个体间变异，因此该基因片段是蛇类药材鉴定中一个很好的分子标记。基于所得DNA序列数据，设计了一对高度特异性的鉴别引物用于金钱白花蛇的PCR鉴定。用该对引物对金钱白花蛇进行PCR鉴定。在60℃－65℃的复性温度条件下，样品的误检和漏检率为0，能100％地正确区分出正品与伪品药材，此外该方法还能检测出混合粉末中是否含有正品金钱白花蛇成分。研究结果表明用本鉴定引物对金钱白花蛇的PCR鉴定方法简便、有效，实用性强，该方法还有可能成为中成药复方组分鉴别的一种新手段。

建议开展扬子鳄保护遗传学和开发利用研究

扬子鳄是一种人工饲养繁殖成功的濒危野生动物。 1992年获CITES成员大会批准 ,允许子二代鳄的商业性开发利用。作者分析了我国扬子鳄保护、养殖现状和扬子鳄群体的遗传特征 ,认为一方面扬子鳄野生资源仍受到威胁 ,另一方面随着饲养种群数量的增加 ,养殖费用不断增长 ,扬子鳄的潜在经济价值也未能实现。鉴于此 。

蛇类药材的本草考证

本草考证认为古代本草所载乌蛇的原动物为游蛇科的乌梢蛇(Zaocys dhumnades),白花蛇的原动物为(?)科的尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus),二者均始载于《雷公炮炙论》.金钱白花蛇的原动物为眼镜蛇科的银环蛇(Bungarus multicinctus),在古代本草未见收载.