华支睾吸虫Rap2B样基因的生物信息学分析及其克隆、表达

目的从华支睾吸虫cDNA文库中筛选Rap2B样基因并分析其结构和功能,初步进行克隆和表达纯化,为进一步研究其功能奠定基础。方法利用多种生物信息学分析软件,分析华支睾吸虫Rap2B蛋白的拓扑学结构、生物学和免疫学功能特征。设计引物,从华支睾cDNA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,构建原核重组质粒并初步表达纯化。结果华支睾吸虫Rap2B样基因长度为847bp,其全长编码序列为426bp,编码141个氨基酸,理论分子量是15851.1。重组的原核表达质粒pET-28a(+)-Rap2B经PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒构建成功。该基因在大肠杆菌中能高效表达。经His亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白,Western blotting证实Rap2B重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别。结论华支睾吸虫Rap2B蛋白经生物信息学预测为ras原癌基因家族成员,可能在华支睾吸虫致癌过程中有一定作用。该基因可在原核表达系统中高效表达,并得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究该蛋白的功能以及在致病尤其是可能促发肿瘤的作用方面奠定一定基础。

华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)亚细胞及虫体组织定位

目的真核表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶基因并研究CsLDH的亚细胞及虫体组织定位。方法构建pEGFP-N1-CsLDH真核表达质粒,转染HeLa细胞,通过绿色荧光蛋白标签GFP的示踪来揭示CsLDH在HeLa细胞中的亚细胞定位;免疫组织化学方法进行CsLDH的虫体组织定位。结果双酶切和测序均表明真核表达重组质粒pEGFP-N1-CsLDH构建成功,经RT-PCR鉴定转染正确的HeLa细胞能稳定表达,部分HeLa细胞的细胞膜出现强烈的绿色荧光;免疫组织化学的结果显示CsLDH主要定位成虫的表膜,口、腹吸盘,咽及肠支处。结论华支睾吸虫乳酸脱氢酶为定位于虫体皮层和消化道界面的膜蛋白。

4种驱虫药对重组华支睾乳酸脱氢酶(CsLDH)作用研究

目的检测吡喹酮以及苯并咪唑类药物对重组的华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)酶促功能的影响,探讨其药物作用机制。方法将不同浓度的吡喹酮、阿苯达唑、芬苯达唑和甲苯咪唑加入CsLDH所催化的丙酮酸还原成乳酸(正反应)以及乳酸氧化成丙酮酸(逆反应)的标准反应体系当中,紫外分光光度法测定NADH在A340处吸光度,SPSS16.0统计软件分析试验数据。结果相比于对照组,9mmol/L的吡喹酮对正、逆反应的抑制均可达到94%(P<0.01);0.2 mmol/L的阿苯达唑对正、逆反应的抑制分别为84%(P<0.01)和79%(P<0.01),0.06 mmol/L的芬苯达唑对正、逆反应的抑制分别为92%(P<0.01)和86%(P<0.01),0.1 mmol/L的甲苯咪唑对正、逆反应分别为98%(P<0.01)和87%(P<0.01)。结论吡喹酮、阿苯达唑、芬苯达唑和甲苯咪唑可能以CsLDH为作用靶点杀伤华支睾吸虫而发挥治疗作用。

华支睾吸虫乳酸脱氢酶E_(10-20)及E_(94-102)表位的克隆表达与生物学特性初步研究

【目的】原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102),初步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互关系。【方法】将E10-20及E94-102克隆至pGEX-4T-1载体,表达纯化重组蛋白,用Western Blotting和间接ELISA法检测CsLDH免疫血清对表位重组蛋白的识别,同时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体系,比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影响。【结果】成功构建pGEX-4T-1-E10-20及pGEX-4T-1-E94-102重组质粒,SDS-PAGE鉴定表达的重组蛋白,菌体裂解液经亲和层析纯化,获得与GST融合表达的蛋白E10-20及E94-102。两表位重组蛋白均可被CsLDH免疫血清识别,而对E94-102更易于识别;重组CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清识别,而不能被对照血清识别。E94-102免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸的反应。【结论】表位结构和功能研究深化了对CsLDH结构的理解,并为开辟CsLDH疫苗研究新路径奠定基础。

日本血吸虫SCP/TAPS基因家族的生物信息学分析和克隆表达

目的以黄蜂Vv Vesv5蛋白为检索源检索日本血吸虫EST数据库,对检索出的序列进行生物信息学分析,并挑选出有代表性的基因进行克隆表达,为日本血吸虫SCP/TAPS家族蛋白的功能研究打下一定的基础。方法利用生物信息学软件对检索出的日本血吸虫SCP/TAPS家族蛋白进行生物信息学分析,经PCR确定后,以AAW24579为代表进行进一步的研究,将其命名为SjVAL2。根据SjVAL2的序列设计引物,通过RT-PCR扩增出全长编码区域,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化,免疫印迹实验(Western-blotting)鉴定纯化的重组蛋白。结果日本血吸虫SCP/TAPS家族中至少有17个不同的蛋白成员存在,多序列比对分析发现它们初步可以分为3个不同的亚组。以日本血吸虫成虫cDNA为模板RT-PCR扩增出SjVAL2序列,PCR、双酶切及DNA测序均证实pET-28a(+)-SjVAL2重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌中获得高效表达,重组蛋白能识别日本血吸虫感染的小鼠血清,说明其具有免疫反应性。结论日本血吸虫SCP/TAPS家族中至少有17个不同的蛋白成员存在,其中SjVAL2基因可在原核表达系统中高效表达,为进一步研究该家族蛋白的功能打下基础。

PI3K/AKT信号通路在SjCystatin诱导M2巨噬细胞分化过程中的影响

目的:进一步确定日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)诱导M2巨噬细胞分化的亚型及相关机制。方法:用ELISA、RT-q PCR或Western blot法测定IL-10、IL-12、巨噬细胞亚型表面标志物LIGHT(M2b)及Arg-1(M2a+M2c)的表达;用Western blot法测定AKT的磷酸化水平。结果:Sj Cystatin处理组在6 h、12 h和24h时IL-10表达量持续增加;处理12 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量增加但Arg-1的mRNA和蛋白表达量降低;AKT磷酸化水平增加。PI3K/AKT抑制剂处理组IL-10的释放量在12 h和24 h持续降低;24 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量降低但Arg-1的mRNA和蛋白表达量增加;AKT的磷酸化水平减少。结论:Sj Cystatin促进了活化的M2巨噬细胞分化为M2b亚型巨噬细胞,并且PI3K/AKT信号通路参与了这一过程。

山楂酸对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的研究山楂酸(MA)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症的作用及机制。方法MTT法检测MA对细胞活力的影响。将细胞分为6组:对照组、LPS组、LPS+5μmol/L MA组(LPS+MA5)、LPS+10μmol/L MA组(LPS+MA10)、5μmol/L MA组(MA5)和10μmol/L MA组(MA10)。RT-PCR法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和CC型趋化因子2(CCL2)mRNA水平;采用ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α和CCL2的含量;Western blot法检测p-STAT3、STAT3、p-p65、p65、p-AKT、AKT、p-ERK和ERK的表达。结果0~20μmol/L的MA对细胞活力无明显影响。和LPS处理相比,LPS+MA10处理能够显著降低IL-1β、IL-6、IL-12、CCL2和iNOS的mRNA水平(均P<0.01)以及蛋白水平(IL-1β、IL-6、IL-12、CCL2均P<0.01),并呈浓度依赖性。和LPS组相比,LPS+MA10处理组中的p65、STAT3和AKT的磷酸化水平显著降低(均P<0.05)。结论MA可抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞的炎症反应,其机制与调控NF-κB通路、STAT3通路和AKT通路活性有关。

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼(Ima)在体外对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS(0.1μg/mL)或/和Ima(1μmol/L,5μmol/L)处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用WesternBlot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高(P<0.001)以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高(P<0.001);LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升(P<0.001),细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.01,P<0.001)而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.001),这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。

不同建模方法对链脲霉素诱导1型糖尿病成模率的影响

目的探讨不同建模方法对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导1型糖尿病模型成模率的影响。方法选择8~10周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组注射柠檬酸盐缓冲液,实验组一连续5 d腹腔注射STZ(50 mg/kg,每天1次),实验组二前4 d腹腔注射STZ(50 mg/kg)+第5天腹腔注射STZ(100 mg/kg)、实验组三饥饿12 h后给予腹腔注射STZ(50 mg/kg,每天1次,连续5 d)。末次注射后,每天观察小鼠摄食和饮水情况,每周测定小鼠随机血糖和体质量,连续4周。实验结束后取胰腺应用免疫组化观察胰岛情况。结果和对照组相比,3组小鼠的饮水量和摄食量在STZ注射后都显著增加,且实验组二的饮水量比实验组一和实验组三的显著升高。和对照组相比,3组小鼠的体质量逐渐下降。三组的随机血糖在STZ注射后第1周开始升高,一直维持到第4周,实验组二的血糖升高最为明显。实验组二从第2周开始,成模率91.7%,第4周的成模率为100%;实验组一的成模率第2周为50%,第4周的成模率为83.3%;实验组三第2周的成模率为36.4%,第4周的成模率为63.6%。胰腺免疫组化结果显示3组的胰岛面积均显著减小。结论连续4 d小剂量腹腔注射STZ(50 mg/kg)+第5天大剂量腹腔注射STZ(100 mg/kg)是较理想的建立1型糖尿病模型的方法。

巨噬细胞极化中特异性分子表达的实验研究

目的探讨不同极化方法诱导下,巨噬细胞特异性分子标记的表达模式。方法提取小鼠骨髓原代细胞,利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF,10 ng/mL)诱导7 d后,将细胞分为对照组、脂多糖(LPS,100 ng/mL)+干扰素γ(INF-γ,10 ng/mL)处理组、白细胞介素4(IL-4,20 ng/mL)和IL-13(10 ng/mL)处理组、LPS(100 ng/mL)和免疫复合物(IC,50 ng/mL)处理组、IL-10(10 ng/mL)处理组,通过Q-PCR和ELISA检测相关分子标记的表达情况,利用Western blot和流式细胞技术分别检测相关信号通路和细胞表面特异性分子的表达改变。结果M-CSF诱导后,表达巨噬细胞特征性分子F4/80的细胞占(91.4±5.65)%。和其他组相比,CXC趋化因子9(CXCL9)的mRNA和蛋白水平在LPS联合INF-γ诱导的M1巨噬细胞中显著增高(均P<0.01),CC趋化因子17(CCL17)的mRNA和蛋白水平在IL-4和IL-13诱导的M2a细胞中增加最明显(均P<0.01),CCL1的mRNA和蛋白水平(均P<0.01)和IL-10的mRNA转录水平(P<0.01)在LPS和IC诱导的M2b细胞中表达最高,CXCL13的mRNA和蛋白水平在IL-10刺激的M2c细胞中显著增加(均P<0.01)。流式结果显示,CD38蛋白只在M1中表达,CD206蛋白在M2a、M2b和M2c中均有表达,而LIGHT蛋白只在M2b中表达。LPS联合INF-γ可诱导p65蛋白的磷酸化增加,而LPS和IC处理能够增加ERK蛋白的磷酸化水平。结论CXCL9和CD38可作为M1巨噬细胞的特征性分子,CCL17可作为M2a细胞的特征性分子,CCL1和LIGHT可作为M2b细胞的特征性分子,CXCL13可作为M2c的特征性分子。

中医药治疗2型糖尿病湿热证的用药规律研究

目的探讨中医药治疗2型糖尿病湿热证的用药规律,并通过聚类方分析其临床用药特点。方法以中国知网数据库为数据来源,检索自建库起至2021年9月30日收录的有关中医药治疗2型糖尿病湿热证的文献。经过文献筛选和资料提取之后,应用中医传承辅助平台(V2.5)进行数据录入、统计与分析。结果共纳入89篇文献,91首处方,136味中药。使用频次较多的药物有黄连、黄芩、茯苓、苍术、葛根等;药性以寒性最多;药味以苦为主,兼具甘、辛;药物主归脾经、胃经和肺经;关联规则分析得到使用频率最高的药对为黄连-茯苓,置信度最高的药物组合有“葛根,黄芩→黄连”“丹参→黄连”;通过高频药物聚类分析得到5首新方组合。结论中医药治疗2型糖尿病湿热证具有一定的可循规律,黄连为核心中药,葛根芩连汤为常用基本方,苦寒燥湿清热为用药基本原则。聚类分析得到5首新方,提示2型糖尿病湿热证可能具有中满热盛、湿热内蕴、湿重于热、湿聚成痰和湿热下注等临床特点。

甘露糖对巨噬细胞炎症反应的双向调节作用

【目的】探讨甘露糖(Man)对炎症反应的调控及其机制,为甘露糖在炎症疾病中的应用提供依据。【方法】利用不同浓度的甘露糖处理RAW264.7巨噬细胞24 h或48 h,细胞计数检测增殖情况。低浓度(2 mmol/L)和高浓度(20 mmol/L)Man预处理RAW264.7细胞12 h,然后脂多糖(LPS)处理8 h或24 h,收集mRNA、蛋白质及培养上清,通过Q-PCR、Western blot和ELISA检测炎症相关指标以及甘露糖受体(CD206)的变化。【结果】在5 mmol/L以下,细胞增殖随Man的浓度增加而增加;在5 mmol/L以上,则相反。和LPS处理相比,LPS+甘露糖2 mmol/L(Man2)能够增高IL-1β、IL-12和TNF-α的mRNA水平以及蛋白水平(均P<0.05);LPS+Man20显著抑制IL-1β、IL-12、TNF-α、IL-6和CCL2的mRNA水平和蛋白水平(均P<0.05)。网络药理学预测甘露糖及其代谢产物的潜在作用靶点有包括AKT和STAT3在内的20个蛋白。Man2可协同LPS刺激AKT和STAT3的磷酸化(均P<0.05),而Man20可抑制LPS诱导的AKT、p65和ERK磷酸化水平的增加(均P<0.05)。单独甘露糖处理可抑制AKT、STAT3和p65的磷酸化(均P<0.05)。【结论】不同浓度的甘露糖对炎症反应具有不同的作用。低浓度甘露糖能够促进LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,而高浓度的甘露糖具有抑制LPS诱导的炎症反应,其机制与调控AKT、STAT3、p65和ERK的活性有关。

巨噬细胞极化对心肌成纤维细胞活化的影响

目的观察巨噬细胞极化上清对心肌成纤维细胞活化的影响。方法提取SD大鼠的骨髓细胞和心肌成纤维细胞。利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)处理骨髓细胞后,加入刺激因子:M0(无刺激因子)、M1(100μg/L脂多糖+10μg/L干扰素-γ)、M2(20μg/L白细胞介素-4)诱导巨噬细胞极化。将极化后的不同型别巨噬细胞及其培养上清分别与心肌成纤维细胞共培养,分别设空白对照组、M0组、M1组和M2组,通过细胞免疫荧光检测心肌成纤维细胞中纤维化蛋白的表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞和成纤维细胞特征分子的表达;Western blot检测纤维化相关蛋白及转化生长因子β受体(TGFβR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFRs)信号通路活化情况。结果经M-CSF及相应刺激因子诱导,成功获得M1和M2型巨噬细胞。细胞共培养结果显示,与M0组相比,M1组上清培养的心肌成纤维细胞中胶原蛋白1(Col1a1)和Col3a1的mRNA水平以及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平显著降低(P<0.05),而M2组上清培养的心肌成纤维细胞中Col1a1和Col3a1的mRNA水平以及α-SMA、结缔组织生长因子(CCN2)表达水平显著升高(P<0.05)。M1组上清培养的心肌成纤维细胞中PDGFRβ蛋白磷酸化水平显著低于M0组(P<0.01),而M2组上清培养的心肌成纤维细胞中PDGFRβ蛋白磷酸化水平显著高于M0组(P<0.05)。结论M1型巨噬细胞上清能够抑制心肌成纤维细胞活化,而M2型巨噬细胞上清能够激活心肌成纤维细胞。M1型巨噬细胞抑制纤维化的作用可能与抑制PDGFRβ通路的活化有关。

炎性细胞在心脏纤维化中的作用

心脏纤维化与心肌梗死和心力衰竭密切相关,炎性反应在心脏纤维化发生发展中发挥重要作用,靶向调控炎性细胞可作为防治心脏纤维化的新方向。该文介绍炎性细胞在心脏纤维化中的作用。

华支睾吸虫致胆管癌的研究进展

华支睾吸虫是胆管癌的一个重要的生物性致癌因素，其成虫寄生在宿主的肝胆管内，成虫的机械性刺激、分泌排泄产物的化学刺激和成虫定居所致的慢性炎症等导致了寄生部位胆管的增生、癌变。该文从流行病学、动物实验及分子机制等方面对华支睾吸虫致胆管癌的研究进行了综述。

日本血吸虫生殖相关蛋白SjWD40的虫体免疫定位

目的研究抗重组日本血吸虫生殖相关蛋白WD40(SjWD40)多克隆抗体对天然SjWD40的结合活性,观察SjWD40在虫体内的定位。方法从阳性钉螺体内逸出尾蚴,感染家兔,于感染后42 d剖杀收集成虫和虫卵制备石蜡切片,利用抗重组蛋白SjWD40多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法探讨SjWD40在虫体内的分布。结果SjWD40广泛分布于雌虫的卵黄腺、雄虫的睾丸,虫卵的毛蚴体壁,尾蚴的头腺、钻腺、腺管等部位。结论免疫荧光染色法确定SjWD40蛋白主要分布于血吸虫成虫的生殖腺、毛蚴体壁及尾蚴腺体等组织。

华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。

华支睾吸虫钙调理蛋白的克隆表达、组织定位及功能的初步研究

目的克隆和原核表达华支睾吸虫钙调理蛋白(CsCALP),并初步研究其功能及免疫学意义。方法利用生物信息学相关软件分析CsCALP蛋白的基本理化特征和三维结构;将CsCALP基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达CsCALP蛋白并用镍离子亲和层析柱进行纯化;通过凝胶覆盖(Gel overlay)试验鉴定纯化的CsCALP蛋白与F-Actin的结合能力;使用纯化的CsCALP蛋白免疫SD大鼠,获得抗血清,通过Western blot分析其免疫学特性;应用免疫荧光化学法观察华支睾吸虫CsCALP蛋白在成虫的定位。结果 CsCALP基因编码序列长度为1086bp,编码361个氨基酸,理论分子质量单位为39.7708ku,具有1个calponin homology结构域和5个calponin-like repeat结构域;该基因在大肠埃希菌BL21/DE3中可被表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别;CsCALP蛋白主要定位于虫体富含肌肉组织,包括口、腹吸盘、咽部以及皮下肌层;Gel-overlay试验显示CsCALP蛋白能与F-Ac-tin结合。结论构建的pET-28a(+)-CsCALP能在大肠埃希菌中表达可溶性CsCALP蛋白。该蛋白具有良好的抗原活性,主要分布在华支睾吸虫成虫肌肉组织中,可能为分泌排泄抗原的组分之一。

SjCystatin通过PI3K-Akt通路诱导调节性巨噬细胞产生VEGF-C

搞要:目的探讨一种可诱导抑炎性巨噬细胞分化的虫源性分子(SjCystatin)对巨噬细胞内血管内皮生长因子C(VEGF-C)产生的影响机制。方法将巨噬细胞分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、LPS+免疫复合物(LPS+IC)处理组、白细胞介素-4(IL-4)/10处理组、SjCystatin处理组和通路抑制剂处理组,每组10只BALB/C小鼠。应用荧光定量PCR的方法检测各组巨噬细胞分化标志性分子和VEGF-C mRNA水平的变化,应用Western blot和ELISA方法检测各处理组VEGF-C产生的变化。结果 SjCystatin处理组巨噬细胞内LIGHT、IL-10等调节性巨噬细胞标志分子较LPS处理组分别升高2.1倍和5倍,差异有统计学意义(P<0.05);而CCL-17、CXCL-13等M2型巨噬细胞标志分子低于IL-4/10处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。SjCystatin处理组巨噬细胞上清、细胞内VEGF-C表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。SjCystatin处理组巨噬细胞内p-Akt水平显著高于LPS处理组,当PI3K-Akt通路抑制剂加入后可显著降低VEGF-C的产生。结论调节性巨噬细胞产生VEGF-C亚型,PI3K-Akt信号通路在巨噬细胞产生VEGF-C的过程中发挥重要作用。