中药提取物对诺如病毒灭活的研究

目的探究中药材提取物对诺如病毒的灭活作用及其机理,为预防食源性诺如病毒的爆发提供新的思路及依据。方法制备蜂胶醇提物、鱼腥草水提物,用逆转录实时定量PCR法检测病毒的含量研究各提取物对诺如病毒的灭活的量效和时效关系,比较其与紫外线、二氧化氯、双氧水的灭活效果;用酶联免疫吸附测定病毒完整衣壳蛋白的含量以分析提取物对其破坏作用;PCR扩增特异性片段并进行测序分析研究提取物对病毒核酸的破坏,以进一步阐述灭活机理。结果蜂胶醇提物和鱼腥草水提物对诺如病毒有灭活作用,在50mg·mL^-1作用30 min灭活率可达97.03%和97.88%,10 mg·mL^-1二氧化氯作用30 min灭活率85.13%、9 000μW·cm^-2的紫外作用30 min后灭活率96.7%、5%双氧水作用30 min后灭活率81.09%;与对照组相比,鱼腥草水提物、紫外线、二氧化氯和双氧水处理后病毒外壳蛋白表含量明显下降,但是蜂胶醇提物对诺如病毒颗粒的破坏作用不显著。5种方法对病毒核酸均有破坏作用,3个特异性片段鱼腥草组和双氧水组均未能扩增成功,蜂胶组、紫外组仅扩增1个片段,二氧化氯组扩出了2个片段;序列分析显示,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)ORF2和ORF3均未被扩出,蜂胶醇提物与紫外线对诺如病毒核酸突变主要作用于ORF1中VPg、Pro及RdRp蛋白位点;而鱼腥草水提物与双氧水对诺如病毒ORF1核酸无突变效应。结论蜂胶醇提物、鱼腥草水提物对诺如病毒均有较高的灭活率,两者对病毒核酸均有明显的破坏作用,鱼腥草水提物尚能破坏病毒外壳蛋白的结构。

生菜共生菌对诺如病毒灭活的影响

目的了解生菜共生菌对诺如病毒灭活的影响及机理。方法从农田和超市采集生菜样品,分离鉴定共生菌;加共生菌的诺如病毒液为实验组,不加共生菌为对照组。采用高温、紫外线、含氯消毒剂灭活,分析实验组与对照组病毒量比值,评价共生菌对诺如病毒抗灭活能力的影响;通过检测共生菌对紫外线破坏病毒衣壳蛋白的影响和对病毒吸附能力的影响研究共生菌作用机理。结果共鉴定11株生菜共生菌,均为杆菌,以假单胞菌属为主。10株生菜共生菌能提高诺如病毒抗高温灭活能力,其中稻田叶螨微杆菌、台湾贪铜菌(SC061204)、古川假单胞菌、烟粉虱肠杆菌和食树脂假单胞菌(SC061211)较为显著;11株菌均能提高诺如病毒抗紫外线灭活能力,其中恶臭假单胞菌、稻田叶螨微杆菌和烟粉虱肠杆菌较为显著;恶臭假单胞菌能提高诺如病毒抗二氧化氯灭活能力,危害等级为Ⅰ级。恶臭假单胞菌、稻田叶螨微杆菌、烟粉虱肠杆菌能显著降低紫外线对诺如病毒衣壳蛋白的破坏作用。9株共生菌促进诺如病毒吸附,吸附促进率为1.04%~46.73%;恶臭假单胞菌和食树脂假单胞菌(SC061211)抑制诺如病毒吸附,吸附促进率分别为-6.50%和-19.85%。结论生菜共生菌可能通过保护诺如病毒衣壳蛋白和促进病毒吸附来提高诺如病毒抗灭活能力,在灭活诺如病毒的过程中应控制共生菌的存在。

诺如病毒感染与致病机制研究进展

诺如病毒(norovirus,NV)是引起人非细菌性急性胃肠炎疫情暴发和婴幼儿急性腹泻的主要病原体,特别是引起病毒性腹泻暴发的重要病因。诺如病毒可分为7个基因组(GⅠ-GⅦ组),40个基因型。GⅠ、GⅡ、GⅣ组主要引起人类感染,其中GⅠ组有9个基因型,GⅡ有22个基因型,而GⅣ仅有2个基因型。从20世纪90年代至今,GⅡ.4 NV已经逐渐成为了世界范围内的优势流行株,并且造成了至少4次全球性的疾病流行。