KIAA1456靶向调控Runx1抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭

目的 探讨KIAA1456靶向调控Runx1对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法 采用免疫组织化学法检测91例肺癌及癌旁组织中KIAA1456表达情况,分析KIAA1456与肺癌患者临床病理特征的相关性,并进行Kaplan-Meier生存分析。用Lipofectamine法将miR-NC KIAA1456 RNAi和pCDNA3.0-HA-KIAA1456质粒转染A549细胞,MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭能力,Western blotting法检测细胞KIAA1456、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达。结果 KIAA1456在肺癌组织中的高表达率明显低于癌旁组织(P<0.05);KIAA1456在不同淋巴结转移、TNM分期分层间表达有差异(P<0.05)。KIAA1456高表达肺癌患者5年总生存率高于KIAA1456低表达者(P<0.05)。与阴性对照组比较,KIAA1456 RNAi组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达均增加,KIAA1456表达降低;KIAA1456质粒组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1和MMP-9表达均降低,KIAA1456和Runx1表达增加(P<0.05)。结论 KIAA1456可作为肺癌的抑癌基因,通过靶向调控Runx1表达,抑制A549细胞增殖和侵袭。

miR-20a调控P-gp对非小细胞肺癌细胞A549顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨miR-20a调控P-gp对非小细胞肺癌细胞A549顺铂(DDP)化疗敏感性的影响。方法体外培养A549细胞并诱导产生A549/DDP细胞,RT-PCR方法检测miR-20a和P-gp mRNA表达情况。通过生物信息学网站预测miR-20a与P-gp是否有潜在的结合位点,通过荧光素酶报告基因实验进行验证。按Lipofectamine2000说明书方法分别将miR-NC和miR-20a mimic转染到A549/DDP细胞,检测不同浓度DDP对细胞增殖率的影响,确定半数抑制浓度,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot方法检测细胞中P-gp、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达情况。结果A549/DDP细胞中miR-20a表达水平降低,P-gp mRNA表达水平增加(P<0.05),P-gp是miR-20a的靶点。随着DDP浓度增加,细胞增殖率降低(P<0.05);相同DDP浓度下,miR-20a mimic组细胞增殖率显著降低(P<0.05)。用DDP浓度为40.00μmol/L作为干预浓度进行后续检测,与miR-NC组相比,miR-20a mimic组细胞凋亡率、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达增加,P-gp蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-20a通过靶向抑制P-gp促进A549/DDP细胞凋亡,增加耐药A549细胞DDP化疗敏感性。