天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定

为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达。用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DNA片段,首先将其拼接成融合肽的完整基因,然后通过前后接头将融合肽基因连接成两侧具有EcoRI和SalI酶切位点的同向串连的多拷贝基因。将5份拷贝的基因克隆至pBV220表达载体,转化E.coliDH5α,温度诱导得到表达量为35%的融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式存在,将包涵体溶解,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得纯化的融合蛋白。融合蛋白再经CNBr切割和阳离子交换层析,得到纯化的抗菌肽,经蛋白质N端测序确认序列正确。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。

聚乳酸表面处理的AFM观察及对细胞粘附性的影响

利用N aOH对溶液浇铸法制备的聚L-乳酸膜(PLLA)进行不同时间的表面处理,采用接触角仪和原子力显微镜(AFM)对处理前、后的材料表面进行亲水性和形貌表征,并初步研究了表面处理的材料对细胞粘附性的影响。结果表明,N aOH处理后的PLLA膜的亲水性明显改善,并且其表面平均粗糙度(Ra)由20 nm增加到40 nm^150 nm。成纤维细胞在改性后的材料表面的粘附和生长较改性前有了很大提高。

抗菌肽magaininⅡ对E.coli杀伤作用的AFM观察

利用原子力显微镜(AFM)观察了不同浓度magaininⅡ对E.coli的作用效果。分别用低于MIC和高于MIC浓度的magaininⅡ作用E.coliD31,结果发现当magaininⅡ浓度低于最低抑制浓度MIC时,细菌外膜的粘弹性增大,膜表面产生数量、大小不等的囊泡结构。当magaininⅡ高于MIC时,细胞很快破损,胞浆内容物外泄,菌体破裂导致死亡。推测magaininⅡ分子可能以“地毯”模式迅速集结于细胞膜上,环绕菌体切断细胞膜。这些结果都说明微生物的细胞膜结构是抗菌肽攻击的首要靶点。

人红细胞老化过程中膜表面唾液酸变化的免疫AFM研究

分离人外周血的轻龄和老龄红细胞,采用麦胚凝集素和胶体金对红细胞表面的唾液酸残基进行细胞化学标记,然后在AFM下成像并进行数据分析。结果显示,老龄红细胞膜表面胶体金标记的颗粒数量明显低于轻龄红细胞表面,两者之间有显著差异。推测红细胞老化过程中细胞膜表面唾液酸含量的变化可能与老化细胞的处理机制有关。免疫胶体金标记结合原子力显微镜可在纳米尺度对膜受体蛋白进行定位和定量研究,拓展了原子力显微镜在生命科学领域的应用。

原子力显微镜在DNA和蛋白质相互作用方面的研究进展

评述了原子力显微镜在研究DNA和蛋白质相互作用领域的应用进展。AFM可在空气和液体中对静态的DNA-protein复合体进行成像,也可在液体中实时观察DNA和protein的反应过程。而且,力模式AFM还可获得DNA和protein分子间作用力的信息。AFM已揭示了许多基因调控的机制,也必将在生命科学的研究中起到越来越重要的作用。

人外周血淋巴细胞体外刺激活化的原子力显微镜研究

本文利用原子力显微镜,对分离的人外周血淋巴细胞和经多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激活化的淋巴细胞形态和膜表面超微结构的形态学变化进行了研究。结果表明:淋巴细胞在受刺激后形貌发生明显变化,尺寸变大,同时细胞表面超微结构也趋复杂,出现免疫突触。这些形态变化是与淋巴细胞的功能相适应的,AFM是研究淋巴细胞形态学变化和细胞结构功能之间关系的有力工具。

原子力显微镜在多糖分子结构研究中的应用

评述原子力显微镜在多糖分子结构和功能研究的进展,AFM不仅可以在空气和液体中对多糖分子单分子和聚集体成像,得到单分子的直径、长度等量化信息和分子聚集体形貌特征。近年来AFM还用于在液体池中操纵单个多糖分子,获取单分子力学谱研究分子的弹性与构型转变的关系,在单分子水平上对多糖进行鉴定,用于细胞表面大分子黏附作用和细胞识别的研究等。AFM新技术的不断出现,必将在高分子科学的研究中起到越来越重要的作用。

溶菌酶活性的AFM研究

以溶壁微球菌为底物,用原子力显微镜(Atomic forcemicroscope,AFM)观察到了不同浓度的溶菌酶与溶壁微球菌相反应的作用过程。结果发现,在溶菌酶浓度为0.01mg/mL的情况下,反应菌液逐渐变澄清,溶壁微球菌的裂解程度随着反应时间的延长而逐渐加剧;而在酶浓度增大为1mg/mL时,反应菌液反而不再变清,AFM观察到溶壁微球菌仅发生变形,但未裂解。AFM是观测酶活生理过程的有力工具,同时还为酶活测定开辟了新思路,是传统酶活测定方法的有力补充。

生物素与链霉亲合素偶联法制备量子点-透明质酸复合膜

首先利用一种阳离子型聚电解质(多聚赖氨酸)修饰玻璃基底,并与阴离子型聚电解质(生物素化透明质酸)在静电引力下自组装,然后以生物素化透明质酸和链霉亲合素化量子点为材料,通过生物素和链霉亲合素之间的特异性结合力,层层自组装法制备了量子点一、二、三层膜。用紫外可见吸收光谱和荧光光谱对其光学性质进行表征;原子力显微镜成像表明三种膜表面均一、平整,每层的量子点都分散均匀,没有严重的聚集情况。

TRPM7生理病理学功能及其小分子调节剂的发现

TRPM7(transient receptor potential melastatin 7)通道属于TRPM亚家族,是一种具有离子通道结构域和激酶结构域的双功能跨膜蛋白。作为非选择性阳离子通道,TRPM7可通透Ca^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、Na+、K+等和其他微量金属离子。TRPM7在人体各组织广泛表达,参与Mg^(2+)的稳态调控、细胞增殖、分化、黏附和迁移等生理过程。临床上,TRPM7功能紊乱与神经退行性疾病、中风、癌症等多种疾病关系密切。本文主要综述TRPM7通道在生理、病理及小分子调节剂方面的研究进展,为相关疾病的药物开发提供新的思路。

对提高中职语文课堂教学有效性的思考

语文课是中职生学习专业课的基础，也是将来完成各项工作的基础。学好语文，对学生将来的工作和发展都具有重要意义。目前，中职学校语文课堂教学仍然采用传统的教学模式，并没有体现出职业教育应有的特色，下面是笔者根据自己日常教学实践，对提高中职语文课堂教学有效性进行的一些思索。

烽火中的六朝古都——近代南京易攻难守的历史性探究

南京作为六朝古都、长江中下游水运枢纽,对于中国的重要性不言而喻:其得失也与中国的经济、政治形势有着千丝万缕的联系。从近代史的角度探究,可以发现南京城的易攻难守不仅仅是地理、经济或是政治其中一方面所造成的影响,而是三者相互结合、相互影响所造成的结果。

石油钻井工程定向井技术的现状与发展

为了能够满足现代油田勘探开发的技术发展需求,不断研究应用新型石油钻探工艺,提高钻井的效率和质量,本文就目前石油钻井定向井技术发展现状进行分析探索,预测定向井技术的发展趋势,以提升石油钻井定向井技术工艺,保证石油钻井工程施工建设的质量,为我国石油钻井工程事业发展贡献力量。

艰难的第一步——对1842~1894年苏南地区经济结构转型的探究

自1842年鸦片战争后,中国在鸦片战争失败的背景下被迫打开了紧锁的国门,新的经济因素便开始缓慢楔入中国传统的经济社会。而随后爆发的农民起义,又造成了人口的锐减与大规模流动。加之随后紧锣密鼓开展的洋务运动,商品经济原本就较为发达的苏南地区,逐渐在外界与内部的共同作用下发生改变,呈现出不同于先代的发展特点。