全身骨显像图像质量常见影响因素分析

目的:探讨全身骨显像操作技术中常见的影响因素及其质量控制,以期获得优质的骨显像图像。方法:对我科2012年11月-2012年12月526例患者全身骨显像资料进行回顾性分析。结果:526例全身骨显像图像中,447例图像质量良好,占85%,79例图像质量较差,占15%。影响全身骨显像图像质量的主要因素有:放射性药物的标记技术;患者的准备;操作技术。结论:影响全身骨显像质量的环节和因素很多,尤以患者显像前的准备和医务人员操作技术等人为因素为主。

床位变化对SPECT/CT同机图像配准的影响

目的探讨检查床在有、无负重,不同负重状态下,硬件配准误差对单光子发射计算机断层成像技术/计算机体层摄影(SPECT/CT)同机融合图像质量的影响。材料与方法制作放射线源模型,在检查床有、无负重,负重不同状态下分别进行SPECT/CT图像采集,进行同机图像融合后用图像软件分析并测量SPECT与CT融合图像偏差程度。结果检查床上0负荷时同机图像融合配准较准确,两种图像中心偏移平均2mm。加载50kg与100kg重量后,床位移动过程中Y轴会出现偏差,最大偏差为4.3mm,平均偏差为2.3mm,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在负重状态下床位变化导致SPECT/CT同机图像融合配准有细微偏差,但不会影响图像融合质量。

生化标本检验前质量控制

完整的实验室质量控制包括检验前质量控制、检验中质量控制、检验后质量控制。然而,长期以来,大多数实验室只重视检验过程中的质量控制,而忽视检验前质量控制。

腺苷负荷心肌灌注显像在冠心病诊断中的应用

目的:评价腺苷负荷心肌灌注显像试验对冠心病的诊断价值。方法:60例住院患者均行腺苷负荷心肌灌注显像和冠状动脉造影(CAG),腺苷以0.14mg/(kg.min)的速度外周静脉输入,第3分钟时,静脉注射放射性核素99mTc-MIBI740MBq,1.5h后进行心肌断层显像,若异常,次日行静息心肌显像,分析腺苷负荷试验心肌核素显像对于冠心病诊断的敏感性、特异性及其特点。结果:CAG阳性42例中,心肌核素显像阳性37例(敏感性88%)。18例CAG无明显狭窄,其中13例心肌核素显像阴性(特异性为72%)。前降支病变36例,心肌核素前壁区域低灌注20例,回旋支病变22例,侧壁区域低灌注14例,右冠脉病变28例,下壁区域低灌注27例,右冠脉病变较前降支或回旋支病变的心肌核素显像阳性率高(P<0.05)。在应用过程中,腺苷未出现明显不良反应。结论:腺苷负荷试验心肌核素灌注显像对于冠心病诊断的敏感性、特异性较高,对诊断冠心病具有重要意义。

^(99m)Tc-MDP骨闪烁显像骨外放射性异常浓聚原因分析

目的:分析99mTc-MDP全身骨闪烁显像(WBS)骨外放射性异常浓聚常见的原因。方法:对本院2006年10月至2007年3月1096例常规全身骨闪烁显像病例进行回顾性分析。仪器为美国GE公司Millen-nium(HawkeyeVG5.0)双探头SPECT。结果:1096例骨显像中骨外放射性异常浓聚有164例,占15%。其中在软组织和脏器的异常浓聚78例,占总异常例数的47.5%;患者皮肤、衣物污染50例,占总异常例数的30.5%;技术伪影36例,占总异常例数的22.0%。结论:骨显像时骨外放射性异常浓聚较常见,了解其原因,以减少假阳性图像有助于提高图像质量,正确分析图像,降低误诊率。

放射性PDGFR-β反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究32P标记血小板衍化生长因子β受体(PDGFR-β)的反义寡核苷酸(AON)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,为抑制血管术后再狭窄的形成提供可能的干预。方法体外进行大鼠VSMC的培养,以5~10代细胞为实验对象,人工合成PDGFR-βAON,并进行32P标记,按实验目的分组。MTT法分析细胞增殖活力,以流式细胞仪测定细胞周期,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果32P标记PDGFR-βAON作用后,VSMC的增殖强度明显弱于空白对照组(P<0.01),而处于DNA合成前期(G0/G1)细胞百分比高于空白对照组(P<0.01);32P标记AON组细胞凋亡率明显高于空白组(P<0.01)。结论32P-PDGFR-βAON可以诱导VSMC凋亡,抑制其增殖。

生物医学工程专业医学生毕业设计的若干思考

毕业设计是大学教育过程中最后的也是重要的一个教学环节,怎样提高生物医学工程专业学员毕业设计的质量和效率,是一个值得探讨和思考的问题。作者结合所在医院科室对毕业设计的指导过程和经验,从选题、实施等方面进行探讨,以期提高我校生物医学工程专业毕业设计质量。

小鼠内皮祖细胞的分离、培养与定向诱导分化

目的建立一种稳定、高效,从小鼠骨髓中分离培养与定向诱导分化内皮祖细胞(EPCs)的方法。方法从小鼠骨髓中密度梯度离心法分离单个核细胞,经差速贴壁结合特殊培养基扩增并向内皮细胞定向诱导分化EPCs。应用免疫荧光和流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133。并通过检测其对FITC标记的UEA-1的吸附和内吞DiI-ac-LDL来进行细胞功能学的鉴定。对分化细胞行vWF、CD31免疫组化染色鉴定,并与血管内皮细胞合成前列腺素能力进行比较。结果经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、Flk-1,部分表达CD133。分离所得细胞经EBM-2专用培养基培养后,第4天可见集落形成,培养第9天流式细胞仪检测其CD34、CD133、CD31、Flk-1阳性率分别为(44±4)%、(18±3)%、(49±4)%和(79±6)%,细胞能特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞DiI-ac-LDL,约3周左右可融合近80%,形成铺路石样内皮细胞特有形态。传代后vWF、CD31免疫组化染色阳性率分别为(66±5)%和(56±5)%。诱导后的内皮祖细胞的合成前列腺素能力与血管内皮细胞之间无显著差异。结论从小鼠骨髓中分离培养与定向诱导分化EPCs的方法,效率高,稳定性和重复性好。

^(131)I标记抗肝癌单克隆抗体片段的内照射吸收剂量估算

目的对给予^(131)I 标记抗肝癌单克隆抗体(简称单抗)片段[HAb18F(ab)_2]的志愿者进行脏器内照射吸收剂量估算。方法 2例志愿者静脉注射^(131)I-HAb18F(ab)_2后,分别于5、30 min和2、4、8、24 h 及2、3、4、6、10 d 共11个时间点收集血样,并分别于治疗后3、24 h 和2、4、8、16 d 进行SPECT 全身显像;对血样进行放射性测量,测定全身平面图像感兴趣区(ROI)计数;应用 SPSS 13.0软件对获得的数据进行曲线拟合;计算药物在各脏器的有效半衰期;估算各脏器的吸收剂量。结果^(131)I-HAb18F(ab)_2在人体各脏器内的有效半衰期为1.8～6.4 d,甲状腺的吸收剂量最大为28.5 Gy,其余脏器不超过3 Gy。结论该计算方法简便易行,可应用于内照射吸收剂量的估算。

内镜下与常规切开法采集大隐静脉在冠状动脉旁路移植术中应用的比较

目的 探讨内镜下采集大隐静脉应用于冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass grafting, CABG）中的早期临床效果. 方法 2004年4月～2005年5月,对89例采用内镜下取大隐静脉行CABG（内镜组）,在膝关节中部做2 cm切口,应用VasoView 5内镜血管采集系统游离获取大隐静脉,并与2003年4月～2005年3月38例采用传统切开法取大隐静脉行CABG（常规组）进行比较,比较2组术后下肢切口并发症、恢复行走时间、患肢疼痛麻木感及肿胀、术后6个月通畅率.结果 内镜组取大隐静脉2～3支,平均2.6支;内镜组下肢并发症（6例）与常规组（8例）相比明显减少（χ^2=4.197,P＝0.040）;内镜组患肢疼痛、麻木感7例及肿胀9例与常规组（分别为36、30例）相比明显减少（χ^2=89.740,P＝0.000;χ^2=59.299;P＝0.000）;内镜组恢复行走时间（2.3±0.9） d比常规组（3.4±1.6） d明显缩短（t=-4.952,P=0.000）;内镜组术后6个月通畅率96.0%（48/50）与常规组95.3%（19/20）相比无明显差别（χ2=0.000,P=1.000）. 结论 CABG中应用内镜下采集大隐静脉能够减少创伤,明显降低术后下肢并发症,减轻术后下肢切口疼痛.

乳腺癌^(99)Tc^m-HL91乏氧显像与^(18)F-FDG符合显像的对比研究

目的对比研究99Tcm-HL91显像和18F-FDG显像诊断乳腺癌的临床价值。方法31例乳腺癌患者行99Tcm-HL91和18F-FDG显像,利用计算机感兴趣区(ROI)技术计算T/NT值(病灶计数/对侧计数),定性和半定量法计算诊断灵敏度。结果病灶摄取18F-FDG和99Tcm-HL91的T/NT值为(3.16±0.57)、(2.14±0.36)(P<0.01);浸润性导管癌和浸润性小叶癌摄取18F-FDG T/NT值为(3.14±0.43)、(3.19±0.27)(P>0.05),摄取99Tcm-HL91 T/NT值为(2.16±0.38)、(2.10±0.32)(P>0.05);病灶T/NT值分布18F-FDG为1.56~9.43(中位值3.15),99Tcm-HL91为1.36~6.28(中位值2.95),两者呈正相关(P<0.01);定性法18F-FDG诊断灵敏度为90%,而99Tcm-HL91为84%;半定量以T/NT值2.0为标准,18F-FDG灵敏度为97%,以T/NT值1.5为标准,99Tcm-HL91灵敏度为90%。结论乳腺癌组织对18F-FDG和99Tcm-HL91均有明显的摄取,呈显著正相关;99Tcm-HL91诊断乳腺癌有较高灵敏度,具有一定临床价值。

犬骨髓间充质干细胞可诱导分化为组织工程瓣间质种子细胞

目的诱导分化骨髓间充质干细胞(BMSC),探讨BMSC作为组织工程瓣膜的间质种子细胞的可行性。方法分离扩增犬BMSC,定向诱导分化为成纤维细胞,以隐静脉间质细胞为对照,比较两种细胞在形态学、增殖能力、胶原合成,以及两种细胞冻存和复苏率。结果光镜下,两种细胞均为贴壁生长细胞,形态为梭形或多角型,血管间质细胞和第2代诱导BMSCs的倍增时间分别为38 h和36 h,诱导后的BMSC的冻存和复苏率、合成胶原能力与血管间质细胞之间无显著差异;电镜示两种细胞均能够种植在去细胞猪主动脉瓣上。免疫组织化学结果显示种植后瓣膜上有间质细胞生长。结论BMSC诱导后可分化为成纤维细胞与静脉来源的间质细胞无显著差别,是合适的组织工程瓣膜间质种子细胞。

诱导分化羊骨髓间充质干细胞作为组织工程瓣膜间质种子细胞的可行性

目的:对羊骨髓间充质干细胞加以诱导分化,并与大隐静脉来源的血管间质细胞进行比较,探讨其作为组织工程瓣膜种子细胞的可行性。方法:实验于2006-02/08在西京医院心血管病研究所完成。①家猪10只,屠宰后取主动脉瓣膜,尽量剔去血管外膜,浸入Hank’s液中洗涤,制备去细胞主动脉瓣,苏木精-伊红染色比较脱细胞前后的组织特点。②成年杂种绵羊10只,麻醉后分别于股骨大转子穿刺抽取肝素化骨髓10mL,稀释,离心,弃上清及脂肪层,余细胞用LG-DMEM无血清培养基重悬,铺于等体积的Percoll淋巴细胞分离液上,离心收集单个核细胞,消化传代培养。取第二、三代骨髓间充质干细胞,加入LG-DMEM条件培养基进行体外定向诱导分化。对诱导后细胞进行形态观察、免疫组化鉴定并绘制生长曲线。③上述10只绵羊抽取骨髓后,无菌条件下取大隐静脉,剥去静脉外膜,剪成1mm3,贴壁法培养,消化传代。④取第3代骨髓间充质干细胞与血管间质细胞,分别以5×104L-1密度接种于24孔培养板,常规孵育96h。每孔各吸取培养基0.5mL,测定两种细胞上清液中的羟脯氨酸含量。完毕后用胰蛋白酶消化处于对数生长期的细胞,加入冻存液,调整细胞密度为7×109L-1,置于液氮中,1周后复苏,计算两种细胞的存活率。⑤将去细胞猪主动脉瓣修剪成0.5cm×0.5cm×0.1cm大小,骨髓间充质干细胞、血管间质细胞均按105/cm2密度接种,置入37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中。反复种植3次,每次间隔24h,第4天各组均取出2份样本,扫描电镜观察。第7天向其余标本中加入四唑盐,采用酶联免疫检测仪490nm处骨髓间充质干细胞组、血管间质细胞组的吸光度值,比较两种细胞在去细胞主动脉瓣上的生长能力。结果:①新鲜的猪瓣叶中含有大量的成纤维细胞及内皮细胞。去细胞后,主动脉瓣中未见任何细胞及其碎片成分,纤维网架结构保持完整。②传代培养后的骨髓间充质干细胞和血管间质细胞形态相似,呈梭形或多角型,均于24h内贴壁,3～4d铺满瓶底;两种细胞对平滑肌肌动蛋白α、波形蛋白均呈部分阳性表达;且生长曲线相似,倍增时间分别为38h和36h(P>0.05)。③诱导分化后的骨髓间充质干细胞与血管间质细胞上清液羟脯氨酸含量基本相似[(1.52±0.21),(1.43±0.20)mg/L,P>0.05]。冻存复苏后,两种细胞的存活率亦基本相似[(85±3)%,(87±4)%,P>0.05]。④诱导分化后的骨髓间充质干细胞与血管间质细胞均能够种植在去细胞猪主动脉瓣上,两种细胞的吸光度值基本相似(0.50±0.04,0.48±0.03,P>0.05)。结论:诱导分化的骨髓间充质干细胞能够黏附在去细胞猪主动脉瓣膜支架上贴壁生长,与静脉来源的血管间质细胞在存活率、复苏后生长增殖情况、合成胶原功能等方面无明显差别,是合适的组织工程瓣膜间质种子细胞。

不同试剂脱除猪胸主动脉壁细胞的对比研究

目的:用不同方法去除猪胸主动脉壁细胞,并比较去细胞效果,为组织工程瓣膜或带瓣管道提供良好的实验材料。方法:采用十二烷基硫酸钠、胆脂酸钠、曲拉通(TritonX100)制备猪胸主动脉脱细胞基质。将实验分为十二烷基硫酸钠组、胆脂酸钠、曲拉通组和空白对照组。标本进行大体、光镜、电镜观察,力学性能的检测并做比较。结果:胆脂酸钠无法完全脱除主动脉壁内细胞,十二烷基硫酸钠和曲拉通都能完全脱除猪胸主动脉细胞,曲拉通较好地保持了胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布,并有较好的力学性能。后两者脱细胞时间无显著差别。结论:曲拉通可以成功用于制备大血管脱细胞基质,为组织工程瓣膜或带瓣管道的研究提供材料。

体外循环对血管内皮细胞的急性损伤

目的观察体外循环(CPB)对全身血管内皮的急性损伤/活化。方法实验分组:Ⅰ组:60例先天性心脏病心内畸形矫治术患者;Ⅱ组:60例瓣膜病患者。于术中CPB前、CPB 30 min、CPB后0、4、24、48、72 h共7个时点采集静脉血,动态观察患者血浆中血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)、血管性假血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的变化。结果与CPB前相比,Ⅰ、Ⅱ组患者TM、vWF在CPB 30 min显著升高,CPB结束时升至最高点[TM:(5.7±1.3)μg/Lvs(6.6±1.0)μg/L;vWF:(18±3)μkat/Lvs(23±4)μkat/L,均P<0.01],而后下降,但CPB后72 h仍未恢复到CPB前水平(P<0.05)。ET-1在整个过程中先降后升,与CPB前相比[Ⅰ组:(92±5)ng/L,Ⅱ组:(106±6)ng/L],CPB后4h降至最低[Ⅰ组:(70±5)ng/L,Ⅱ组:(78±3)ng/L,均P<0.01],而后逐渐上升,CPB后72 h明显高于CPB前[Ⅰ组:(101±7)ng/L,Ⅱ组:(122±7)ng/L,均P<0.01]。NO含量在CPB后4 h降至最低水平[Ⅰ组:(42±6)μmol/L,Ⅱ组:(43±5)μmol/L],CPB后72h NO含量[Ⅰ组:(58±6)μmol/L,Ⅱ组:(62±10)μmol/L]恢复至CPB前水平[Ⅰ组:(57±6)μmol/L,Ⅱ组:(63±7)μmol/L]。结论CPB可导致血管内皮细胞的广泛损伤/活化,这种损伤大约72h恢复。

梗死心肌组织裂解液对鼠骨髓间充质干细胞诱导分化作用的体外研究

目的探讨梗死心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的诱导作用。方法取SD大鼠梗死区心肌组织及其周围区域正常心肌组织分别制备梗死心肌组织裂解液和正常心肌组织裂解液;用Balb/c小鼠骨髓细胞进行MSC培养,取生长较好的第2代MSC制备MSC贴片,分别用DMEM培养基(空白对照组)、加入正常心肌组织裂解液的DMEM培养基(正常心肌组织裂解液组)和加入梗死心肌组织裂解液的DMEM培养基(梗死心肌组织裂解液组)培养。取各组培养14d的MSC,透射电镜下观察细胞超微结构;并进行免疫细胞化学染色,观察α-肌动蛋白(actin)、心肌特异性转录因子4(GATA-4)、心肌特异性肌球蛋白重链(MHC)、心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)、心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)、心肌增强因子2(MEF-2)、连接蛋白(Cx)43和Cx45的表达情况。结果超微结构观察显示空白对照组细胞器结构正常;正常心肌组织裂解液组细胞内未见明显的肌丝样结构;而梗死心肌组织裂解液组部分细胞内可见细小的肌丝样结构。免疫细胞化学染色分析显示,空白对照组MSC不表达心肌细胞特异性蛋白;正常心肌组织裂解液组MSC仅表达α-actin;而梗死心肌组织裂解液组MSC表达α-actin、GATA-4、MHC、cTnT、cTnI和MEF-2等心肌特异性标志蛋白,但不表达Cx43和Cx45。结论梗死心肌组织裂解液可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。

^(99m)Tc-MDP骨三相扫描在骨肉瘤诊断中的临床价值

目的:探讨99mTc-MDP骨三相扫描在骨肉瘤病人中的显像特点和应用价值。方法:回顾了我院2006年4月-2007年1月经穿刺活检及手术病理诊断为骨肉瘤的24例患者,男12例,女12例,最小年龄11岁,最大50岁,平均年龄20.6岁,所有患者都使用GE公司的Hawkeye SPECT进行99mTc-MDP骨三相扫描,图像经Entegra工作站处理。在血流灌注相,利用感应区技术(ROI),就肿瘤血流灌注开始时间、最高计数率、计数率达高峰时间、快速灌注持续时间、计数率-时间曲线斜率、曲线下面积与健侧进行比较,行两样本均数比较t检验。并计算计数率-时间曲线斜率比值、曲线下面积比值。另外计算血池相计数与对侧比值、延迟相计数与对侧比值(T/NT)及两样本均数比较配对t检验。观察结果延迟相的显像特点。结果:58.3%发生在股骨的(14/24),其中股骨下9例;37.5%发生在胫骨(9/24),其中胫骨上7例;发生在腓骨仅1例;累及2块骨头以上为5例。未发现远处部位转移。肿瘤血流灌注平均开始时间、计数率达高峰时间、快速灌注持续时间、最高计数率、计数率-时间曲线斜率、曲线下面积分别为(3.04±1.94)s,(13.43±3.98)s,(10.52±3.06)s,(958.26±469.24)counts/s,99.15±61.02,(49797±25157.24)counts,健侧分别为(4.70±3.25)s,(18.26±5.69)s,(13.57±4.57)s,(270±160.51)counts/s,23.22±19.20,(13403±8821.95)counts,两者相比均有统计学意义(P(0.05),两者斜率比值为6.03±4.68,曲线下面积比值为4.99±3.62。血池相计数与对侧比值、延迟相计数与对侧比值分别为3.34±1.53,6.02±3.12,两者相比具有统计学意义(P(0.05)。延迟显像,放射性异常高度浓聚,核素分布均匀41.7%,不均匀者58.3%,病变内出现放射性稀疏、缺损者占54.2%,另外软组织可见侵犯并有不均匀放射性浓聚。结论:99mTc-MDP骨三相扫描为骨肉瘤的诊断提供了丰富的信息,具有较高的临床价值。

异氟醚预处理对婴幼儿体外循环后心肌的保护作用

目的观察异氟醚预处理对体外循环下婴幼儿心内直视手术心肌的保护作用。方法将100例先天性心脏病患儿,随机分为预处理组和对照组,观察两组转机时间、主动脉阻断时间、心脏复跳情况、循环情况。分别于麻醉后、体外循环主动脉开放后15min、4h、24h时间点取血样,检测血清降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)、心房钠尿肽(ANP)、心肌钙蛋白(cTnI)的变化。结果两组转机时间、主动脉阻断时间、开放至复跳时间无显著差异,预处理组的自动复跳率、复跳后低血压发生率及术后24h低血压发生率均优于对照组(P<0.05)。主动脉开放15min后,CGRP和ANP在两组患者均显著增高(P<0.01),但预处理组明显高于对照组(P<0.05);ET和cTnI在主动脉开放后也显著上升(P<0.01),但预处理组上升幅度明显低于对照组(P<0.05)。结论异氟醚预处理能减少心肌的缺血/再灌注损伤,促进体外循环后心功能恢复。

^(99)Tc^m-HYNIC-Octreotide的标记及其在脑膜瘤诊断中的初步应用

目的:建立99Tcm标记HYNIC-Octreotide的最佳方法,评价该显像剂用于临床的可能性。方法:以SnCl2为还原剂,按间接法标记99Tcm-HYNIC-Octreotide。观察标记物的体内、体外稳定性。对6只实验用大耳白兔、3名健康志愿者及3名后来经病理证实的脑膜瘤患者初步进行了生长抑素受体显像。结果:99Tcm-HYNIC-Octreotide的标记率为97.8%±0.55%。99Tcm-HYNIC-Octreotide的体内、体外稳定性:①静置稳定性:静置4h标记率仍达90%以上。②半胱氨酸置换试验:游离99Tcm随半胱氨酸的增加而缓慢上升,当半胱氨酸达200mmol/L时,99Tcm-HYNIC-Octreotide分子中约23%的99Tcm的被置换出。③血清结合试验:24h99Tcm-HYNIC-Octreotide与蛋白结合率为17.04%±0.01%。99Tcm-HYNIC-Octreotide显像结果:①正常兔及正常人99Tcm-HYNIC-Octreotide体内分布特点:膀胱和肾脏最浓,其次是肝脏,鼻黏膜轻度浓聚,颅脑、双肺、肠道内未见明显核素浓聚。②3名脑膜瘤患者放射性核素明显浓聚,注射显像剂4h后肿瘤放射性计数与本底放射性计数的比值(T/NT)为5.36。结论:99Tcm标记HYNIC-Octreotide方法可行,标记率和放化纯高,稳定性好。初步临床显像证明99Tcm-HYNIC-Octreotide是一种具有潜力的诊断脑膜瘤的生长抑素受体显像剂。

大鼠内皮祖细胞的分离、培养与定向诱导分化

目的探讨建立一种从大鼠骨髓中分离培养与定向诱导分化内皮祖细胞(EPCs)的稳定、高效方法。方法密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁结合特殊培养基扩增并向内皮细胞定向诱导分化EPCs。应用免疫荧光和流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133。并通过检测其对FITC标记的UEA-1的吸附和内吞DiI-ac-LDL来进行细胞功能学的鉴定。对分化细胞行vWF、CD31免疫组化染色鉴定,并与血管内皮细胞合成前列腺素能力进行比较。结果梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、Flk-1,部分表达CD133。分离所得细胞经EBM-2专用培养基培养后,第5天可见集落形成,培养第9天CD133阳染细胞减少,CD31阳染细胞增加,细胞可特异性吸附FITC标记的荆豆凝集素并内吞DiI-ac-LDL,约3周左右形成铺路石样内皮细胞特有形态。诱导后的内皮祖细胞的前列腺素合成能力与血管内皮细胞之间无统计学差异(P>0.05)。结论该方法可以同时培养扩增和定向诱导分化内皮祖细胞,效率高,稳定性和重复性好。