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盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定
被引量:
5
1
作者
李颖波
宗营杰
+5 位作者
刘成洪
陆瑞菊
黄剑华
杜志钊
许建华
王亦菲
《上海农业学报》
2019年第6期1-5,共5页
为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,...
为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建成酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7×107CFU/mL,平均插入cDNA片段长度大于1000bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。
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关键词
盐胁迫
大麦
酵母双杂交
CDNA文库
下载PDF
职称材料
题名
盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定
被引量:
5
1
作者
李颖波
宗营杰
刘成洪
陆瑞菊
黄剑华
杜志钊
许建华
王亦菲
机构
上海市农业科学院生物技术研究所
上海市农业科技服务中心
光明种业有限公司
出处
《上海农业学报》
2019年第6期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金(31601295)
上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字2016第6-1-2号)
+1 种基金
上海市科学技术委员会科研计划项目(16391900600)
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-05-01A-02)
文摘
为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建成酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7×107CFU/mL,平均插入cDNA片段长度大于1000bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。
关键词
盐胁迫
大麦
酵母双杂交
CDNA文库
Keywords
Salinitystress
Barley
Yeasttwo hybrid
cDNAlibrary
分类号
S512.3 [农业科学—作物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定
李颖波
宗营杰
刘成洪
陆瑞菊
黄剑华
杜志钊
许建华
王亦菲
《上海农业学报》
2019
5
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