猫急性应激模型的建立及诊断标志物的筛选

本研究旨在建立猫急性应激模型,筛选诊断标志物,完善猫急性应激定义标准。选取18只猫随机分为对照组、应激组A和应激组B,每组6只。测量各组猫的生理指标,评估猫应激评分(CSS),采血进行血常规和血生化分析;ELISA法检测血清炎性因子、激素、五羟色胺(5-HT)和热休克蛋白-70(HSP-70)浓度;微量法检测血清氧化应激指标。结果表明,与对照组相比,应激组A的体温、呼吸频率、CSS、尿素氮(BUN)含量、肌酸激酶(CK)活性、IL-1β、TNF-α、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、肾上腺素(EPI)、5-HT浓度显著升高(P<0.05),红细胞(RBC)数目、血红蛋白(HGB)、IL-10浓度、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)活性、总胆固醇(TC)含量显著降低(P<0.05),心率、白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(NEUT)数目、葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CRE)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)含量、淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和HSP-70浓度无显著变化(P>0.05);应激组B的体温、呼吸频率、CSS、WBC、NEUT、RBC数目、GLU、BUN、TG含量、CK、AST、SOD、CAT活性、HGB、IL-1β、TNF-α、CRH、ACTH、EPI、HSP-70、5-HT浓度显著升高(P<0.05),IL-10和COR浓度显著降低(P<0.05),心率、LYM数目、ALT、AMY活性、TP、ALB、CRE、TC、MDA含量无显著变化(P>0.05)。结果提示,本研究设计的复合应激和束缚应激均能成功建立猫急性应激模型,并筛选出CRH、ACTH和CSS可用于完善猫急性应激的定义标准。

长链非编码RNA NEAT1通过Wnt/β-catenin信号通路影响PRRSV复制机制的初步研究

长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 nt的非编码RNA分子,对于调节多种生命活动发挥着重要作用。为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与LncRNA核富集转录体1(NEAT1)相互作用的分子基础,本研究将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞,分别在感染后不同时间(0、1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h、48 h、60 h、72 h)收集细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示:PRRSV感染显著上调Marc-145细胞内NEAT1的转录水平(p<0.001);将不同MOI(0.1、0.5、1、2)PRRSV感染Marc-145细胞48 h后收集细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示,不同MOI的PRRSV对NEAT1的转录水平影响不显著;将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞48 h后,采用RNA荧光原位杂交(RNAscope)方法检测PRRSV感染对NEAT1在Marc-145细胞内分布的影响,结果显示,NEAT1定位于Marc-145细胞核,PRRSV感染诱导核内NEAT1的转录水平上调(p<0.01);将NEAT1-C0、C1、C2、C3、C4、C5和C6分别转染Marc-145细胞12 h后,接种PRRSV(MOI 0.1)24 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1各个片段对PRRSV复制的影响,结果显示,NEAT1各个片段过表达均可抑制PRRSV ORF7 mRNA的转录,其中C4区域的抑制效果最佳(p<0.001);将NEAT1-C4转染Marc-145细胞36 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1-C4对细胞因子分泌的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4上调Marc-145细胞内IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10、细胞性骨髓瘤病病毒癌基因(c-myc)和细胞周期蛋白1(cyclinD1)的转录水平(p<0.001);将TOP、NEAT1-C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞36 h,同时将FOP、C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞作为对照,利用双荧光素酶报告基因方法检测NEAT1-C4对Wnt/β-catenin通路活性的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4显著增加LEF1/TCF转录因子的转录活性(p<0.01),及诱导Wnt/β-catenin通路的活化。上述结果首次证实了LncRNA NEAT1通过C4段区域上调Marc-145细胞内Wnt/β-catenin信号通路的活性从而抑制PRRSV的复制。本研究为探究PRRSV与宿主之间的相互作用及PRRSV致病机制提供参考依据。

基于B646L、EP402R、MGF360/505基因的非洲猪瘟病毒ERA检测方法的建立

【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序列,设计特异性的ERA探针和引物,经过反应条件的优化,建立42℃等温条件下检测ASFV DNA的ERA方法。【结果】ERA-ASFV-B646L、ERA-ASFV-EP402R和ERA-ASFV-MGF3个检测方法分别在16、7和13 min内即可得出检测结果;特异性强,对阳性样品拷贝数的检测下限均为102μL-1;与我国非洲猪瘟诊断技术标准中的方法对比,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的ERA检测方法可以用于ASFV的快速检测,为流行病学调查和现场检测提供了一种快速有效的检测方法。

VCD2.0光盘节目制作的相关知识

现在多媒体技术将视频图像、音频引入了数字化的范畴。目前人们使用最多的数字化视频存储和流通工具就是VCD光盘,它具有容量大,存储时间长,使用方便的特点。人们不但用它观看电影,同时也自己制作VCD,保留照片、录像及声音等具有纪念意义的东西。因此了解VCD及它的制作方法是一种新兴而实用的技术。

实时荧光定量PCR所用仔猪组织内参基因的筛选

为了保证在应用实时荧光定量PCR方法检测仔猪目的基因时,检测结果可以科学地用于多组织间的纵向比较,减少因内参基因在多组织间变化而带来的误差,筛选出能够在多组织间稳定表达的内参基因,对于目标基因的准确校正具有重要意义。本试验以4周龄仔猪不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胰、气管、骨骼肌、肺门淋巴结、大肠、小肠、大脑、小脑)为试验样本,利用qPCR方法分别检测3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、泛素辍合酶(UBC)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白L3(RPL3)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、羟甲基胆素合成酶(HSBM)等7个基因在各组织内的m RNA表达稳定情况。经LinReg PCR和geNorm软件统计分析,结果表明,上述看家基因在所选的13种组织中表达稳定性依次为RPL3>RPL32>UBC>HSBM>HPRT1>GAPDH>LDHA。综上所述,RPL3基因在13种组织中的相对稳定性最高。

一例猫黏液炎性纤维母细胞肉瘤的病理学诊断

笔者针对1例猫脾脏增生病例,采用X射线检查、大体观察、病理组织学诊断等检测方法,结合文献对其进行确诊。结果表明:该增生组织呈结节状生长,局部有黏液样变性,增生细胞体积大、异型性明显,易见核分裂相,最终诊断为疑似黏液炎性纤维母细胞肉瘤。鉴于彻底剥离该肿物难度较大,采取将脾脏整体切除的方法治疗,以降低其对机体的影响。