羊口疮与绵羊痘二联重组DNA疫苗的构建及其免疫应答

羊口疮(Orf)和绵羊痘(SPP)是发生于羊群的高度接触性传染病,两者在临床上经常呈现混合感染,给养羊业带来严重的经济损失,因此,开发安全有效、可同时抵抗2种疫病的二联疫苗具有重要临床意义。本研究将羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因及绵羊痘病毒(SPPV)的P32基因以P2A肽序列串联,获得pcDNA3.1-B2L-P2A-P32质粒,作为候选重组DNA疫苗。将质粒转染细胞,检测抗原蛋白的胞内表达及切割;将其免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法检测特异性抗体、中和抗体效价和细胞因子的分泌水平。结果表明:该重组DNA疫苗能在真核细胞中独立表达B2L及P32抗原蛋白,同时能诱导机体产生特异性免疫应答,具有较好的免疫效果。该研究为在羊群中开展更广泛的临床研究提供了试验依据,有望成为候选疫苗。

宿主Ncor1基因沉默对VSV复制的影响

核受体共抑制因子1(NCOR1)组织分布广泛,可调节基因转录。前期研究表明,与NCOR1功能密切相关的转导蛋白(β)样1X连接受体1(TBL1XR1)在水疱性口炎病毒(VSV)复制进程中发挥促进功能。为明确NCOR1因子在VSV复制增殖过程中的作用及机制,首先设计并构建靶向Ncor1的shRNA过表达质粒shNcor1。将shNcor1质粒与骨架质粒共转染293T细胞,获得表达shNcor1的慢病毒颗粒。用慢病毒感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7)并构建Ncor1基因沉默细胞系。VSV分别感染Ncor1沉默与对照细胞系后,通过Q-PCR和TCID检测VSV的转录、复制水平。结果表明,Ncor1基因沉默能抑制VSV的转录及复制。此外,当Ncor1基因沉默时,经VSV诱导的干扰素相关基因Ifit1及Ifit2的转录水平显著升高,提示NCOR1对病毒复制的调控与干扰素信号的激活相关。本研究从宿主细胞出发为阐明VSV的致病机制提供了新的思路。

宿主基因TBL1XR1沉默对水疱性口炎病毒复制的影响

为揭示转导蛋白(β)样1X连接受体1(TBL1XR1)对水疱性口炎病毒(VSV)复制的影响,首先设计并构建沉默TBL1XR1的shRNA表达载体,并以其作为包装慢病毒的穿梭质粒,同骨架质粒共转染239T细胞后,成功包装出表达shTBL1XR1的慢病毒颗粒。以慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7并建立TBL1XR1表达沉默的细胞系,同时构建不靶向任何基因的对照细胞系。最后,用VSV感染TBL1XR1沉默细胞系,并通过荧光定量PCR方法检测VSV的复制能力。结果发现,对TBL1XR1进行沉默能显著抑制VSV的复制,推测TBL1XR1及其相关复合物在VSV侵染过程中起到了一定的辅助作用。研究结果不仅为揭示VSV的致病机理奠定基础,也对VSV的疫病防控起到一定的指导作用。