腺病毒介导MDA-7/IL-24选择性杀伤肝癌细胞HepG2的研究

目的观察MDA-7/IL-24基因对肝癌的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2;用RT-PCR法观察MDA-7/IL-24基因的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度;4甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用;Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测2种细胞的凋亡;用流式细胞仪检测细胞周期。结果复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2和正常细胞L02中的高效表达;细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白的表达;MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞生长并可促进肝癌细胞的凋亡;MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞于G2/M期,能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无阻滞作用和毒性作用。结论复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,促使细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2,而对正常肝细胞L02无任何毒性作用。

151例复发性甲状腺癌的临床分析

目的 了解影响甲状腺癌复发的因素。方法 对 15 1例复发性甲状腺癌的临床资料进行回顾分析 ,观察可能影响复发的因素。结果 性别、年龄对甲状腺癌的复发无明显的影响 (P>0 .0 5 )。而肿瘤大小 ,病理分型 ,淋巴转移 ,手术方式及术后服药对复发均有影响 (P <0 .0 5 )。是否行颈部淋巴结清扫对复发无影响。结论 对于可能复发的甲状腺癌 ,应采取相应措施尽量减少复发 ,同时也不应盲目扩大手术范围。

甲状腺乳头状腺癌术后复发因素分析

对107例术后复发甲状腺乳头状腺癌患者的临床资料进行回顾性分析。发现肿瘤大小、淋巴结转移、手术方式及术后甲状腺素的应用对术后复发均有影响(P<0.05)。对于可能复发的甲状腺乳头状腺癌,应采取相应预防措施。

HIF-1α和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达

背景与目的:缺氧诱导因子2α(hypoxia induc ib le factor-2 alpha,H IF-2α)与缺氧诱导因子1α结构功能相似却不可相互替代;两者在缺氧过程中的表达不一致。本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中H IF-2α和H IF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义。方法:以1%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,检测人肝癌SMMC-7721细胞中H IF-1α和H IF-2αmRNA量和蛋白量,以及反义H IF-1α(natural antisense hypoxia induc ib lefactor-1,αaH IF)的mRNA量。同时应用氯化钴(CoC l2)和转录抑制剂5,6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷(5,6-d ichlorobenzim ida-zole-1-beta-d-ribo furanoside,DRB)检测H IF-1α和H IF-2αmRNA的半衰期,评价H IF-1α和H IF-2αmRNA的稳定性。结果:急性缺氧迅速诱导H IF-1α和H IF-2α蛋白在细胞内堆积。随着缺氧时间延长H IF-1αmRNA的稳定性下降,其蛋白表达降低,而H IF-2α和aH IF蛋白表达持续增高。结论:H IF-2α可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用。aH IF参与了H IF-1αmRNA的调节。

去唾液酸糖蛋白受体特异性单链抗体的优化表达及亲和常数的测定

目的:表达及纯化抗去唾液酸糖蛋白受体(ASG-PR)的单链抗体的可溶性,并测定其亲和常数。方法:用噬菌体C1克隆感染E.coliHB2151,挑取单个菌落接种于2×TY培养基中,于37℃震荡培养过夜。将培养物作1∶100稀释并转种后,用终浓度为0.25、0.5、1.0mmol/L的IPTG,分别在37℃、25℃和20℃下诱导表达过夜。取其培养上清,用饱和硫酸铵沉淀后,以120g/LSDS-PAGE分析。另外,将饱和硫酸铵沉淀物用30mLPBS重新溶解、透析除盐后,用Ni2+螯合柱进行纯化,再以120g/LSDS-PAGE鉴定纯化scFvC1的纯度。用非竞争酶免疫法测定scFv的亲和常数。结果:用0.5mmol/LIPTG在25℃诱导过夜,表达的scFvC1的量较多,其相对分子质量(Mr)约为28000,以可溶性的形式存在于培养基中。通过Ni2+亲和柱纯化后scFvC1的纯度在95%以上,产量约为0.8mg/L。scFv的亲和常数为(2.31±0.36)×10-7mol/L。结论:以筛选的C1噬菌体感染E.coliHB2151后可表达低亲和力的可溶性scFv,对肝癌的基因治疗具有潜在的应用价值。

甲酸等物质能起银镜反应吗

甲酸等物质能起银镜反应吗吉林省敦化林业局二中（１３３７１４）王从俊，梁柏青翻开任何一本化学教材或是化学参考书，几乎没有例外地要作如下论述：只要分子结构中有醛基存在，就能发生银镜反应．甲酸等物质分子中有醛基，所以甲酸等物质都能起银镜反应．然而，就是这样...

β-连环素在肝癌中的表达及其与cyclin D1表达的关系

目的:探讨β-连环素(β-catenin)在肝癌中的表达及其对cyclinD1表达的影响.方法:采用免疫组织化学SP染色法检测38例肝细胞癌,8例肝硬化以及5例正常肝组织中β-catenin和cyclinD1蛋白的表达水平.结果:β-catenin在正常肝组织和肝硬化组织中呈微弱的膜表达.55.2%(21/38)的肝细胞癌组织β-catenin呈异常表达,异常表达的β-catenin主要位于癌细胞胞质.低分化、有转移的肝癌其β-catenin异常表达率明显高于高分化、无转移的肝癌.β-catenin异常表达与cyclinD1过表达显著相关(P=0.017).38例肝癌中13例(34%)显示β-catenin异常表达伴cyclinD1阳性染色,15例(39%)显示β-catenin正常表达伴cyclinD1阴性染色.结论:β-catenin的异常表达与肝癌的进展和转移有关.其机制可能是通过激活cyclinD1基因的表达,促使肝细胞增殖和恶性转化而实现.

腺病毒介导的mda-7／IL-24抑制肝癌VEGF和MMP-9的表达

目的 观察mda-7/IL-24基因对高转移性人肝癌细胞HCCLM6中VEGF和MMP-9的作用,从而探讨mda-7/IL-24基因在抑制肿瘤转移方面的作用.方法 构建Ad.Mda-7并转染至HCCLM6;transwell实验检测侵袭能力的变化;通过RT-PCR和Western Blot分别检测转染mda-7/IL-24基因前后VEGF和MMP-9表达mRNA和蛋白的变化;构建HCCLM6高转移型裸鼠模型,采用Ad.Mda-7肿瘤内注射法干预,观察mda-7/IL-24对裸鼠生存状况的影响和肿瘤内VEGF和MMP-9 的变化.结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因mda-7/IL-24在肝癌细胞中高效表达;mda-7/IL-24能显著下调肝癌细胞中VEGF和MMP-9的表达.Ad.mda-7能延长裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长,瘤体内VEGF和MMP-9表达明显降低（P〈0.05）.结论 mda-7/IL-24基因能明显抑制肝癌细胞的侵袭力,其机制可能与下调VEGF和MMP-9的表达有关.

CO_2气腹对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和转移能力的影响

目的探讨CO_2气腹与胃癌细胞在裸鼠腹腔增殖、转移及其机理。方法胃癌细胞株SGC-7901注射到30只裸鼠腹腔建立腹腔胃癌脱落细胞模型,随机分为麻醉组、开腹组、CO_2气腹0.5 h组和CO_2气腹1.0 h组。8周后观察肿瘤生长情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-Blot检测各瘤体组织中血管内皮生长因子(VEGF)、大鼠缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、BCL-2的mRNA及蛋白表达水平。结果 CO_2组肿瘤重量明显高于麻醉组及开腹组,CO_2气腹1 h组高于CO_2气腹0.5 h组,开腹组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,VEGF,HIF-1a,BCL-2在气腹组中的表达高于对照组及开腹组(P<0.05),1 h组表达高于0.5 h组(P<0.05),开腹组大于对照组(P<0.05),气腹组Caspase-3表达低于对照组及开腹组(P<0.05),1 h组表达高于0.5 h组(P>0.05),开腹组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);结论 CO_2气腹能增强并随着时间增加腹腔脱落胃癌细胞黏附、生长、增殖的能力。

腺病毒介导mda-7基因联合阿霉素治疗裸鼠移植肝癌的作用

目的将重组腺病毒介导的黑色素瘤分化相关基因-7(melanomadifferentiation-associatedgene-7,mda-7)/IL-24与阿霉素(adriamycin,ADM)联合治疗裸鼠肝癌,探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法构建携带人mda-7/IL-24的重组腺病毒载体(Ad.mda-7),单独使用该载体或ADM以及两者联合使用对实验性肝癌裸鼠进行治疗(分别为Ad.mda-7组、ADM组及Ad.mda-7+ADM组,并设立对照组),观察抗肿瘤效果。用免疫组化方法检测各组肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)与转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果成功构建重组腺病毒并实现体内表达,Ad.mda-7+ADM组裸鼠平均生存时间为(83.8±4.82)d,较其他3组〔对照组为(43.4±1.67)d,ADM组为(64.2±4.14)d,Ad.mda-7组为(61.4±1.67)d〕生存时间明显延长(P<0.01)。Ad.mda-7+ADM组裸鼠平均肿瘤大小与单独使用ADM或Ad.mda-7相比明显缩小(P<0.01)。Ad.mda-7组肿瘤组织VEGF和TGF-β1的表达分别为(56.2±7.7)%和(35.2±4.5)%,抑制作用明显优于ADM组〔(70.7±6.5)%,P<0.05;(52.6±7.4)%,P<0.01〕;Ad.mda-7+ADM组肿瘤组织VEGF的表达为(37.3±5.0)%,较其余各组显著下降(P<0.01);Ad.mda-7+ADM组肿瘤组织TGF-β1的表达为(31.2±3.1)%,仍明显低于对照组和ADM组(P<0.01),而与Ad.mda-7组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组腺病毒介导mda-7/IL-24联合ADM对裸鼠人肝癌转移模型有明显的抗肿瘤作用及协同效应,其机理可能与抗肿瘤侵袭、转移有关。

结缔组织生长因子在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞中的表达及意义

目的:动态观察结缔组织生长因子(CTGF)蛋白在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达水平的时相变化,探讨其与肝窦内皮细胞下基底膜形成的关系。方法:采用腹部敷贴法建立血吸虫病肝纤维化模型,HE、Masson染色和透射电镜观察其病理变化;免疫组化技术检测CTGF、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和层粘连蛋白(LN)在小鼠肝脏组织中的表达和分布;并应用彩色图像分析仪进行定量分析。结果:与正常对照组比较,模型组鼠肝窦内皮细胞表达CTGF蛋白阳性或强阳性,肝窦壁LN、ColⅣ表达水平增高,且随着肝纤维化的发展,CTGF和LN、ColⅣ表达逐渐增强,肝窦内皮下基底膜逐渐增厚。图像定量分析两组平均吸光度值、平均灰度值和阳性面积比具有统计学差异;CTGF蛋白与LN、ColⅣ水平呈正相关。结论:血吸虫病肝纤维化时小鼠肝窦内皮细胞通过CTGF蛋白表达上调,调控细胞外基质产生,导致ColⅣ、LN分泌增加,参与肝窦内皮下基底膜形成,从而引起肝内微循环障碍。

腹腔镜下吸引器钝性分离在急性重症胆囊炎治疗中的应用

目的探讨急性胆囊炎腹腔镜切除手术中应用吸引器钝性分离法的安全性及可行性。方法急诊行腹腔镜胆囊切除术的急性胆囊炎病人115例,锐性组43例,按常规单极电凝锐性分离法,钝性组72例,行吸引器钝性分离法。比较二组的手术时间、术中出血量、术后引流管引流量、术后病人肠道功能恢复时间、平均住院时间及术后并发症发生率。结果钝性组病人手术时间为(47.1±18.2)分钟,术中出血量为(73.1±25.3)ml,术后病人肠道功能恢复时间为(26.2±5.3)小时,平均住院时间为(3.4±2.1)天,无胆道损伤;锐性组分别为(58.3±20.1)分钟,术中出血量为(89.2±37.1)ml,术后病人肠道功能恢复时间为(41.4±7.1)小时,平均住院时间为(6.1±3.3)天,3例胆道损伤。两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在急性胆囊炎腹腔镜手术中吸引器钝性分离法较传统方法能有效降低胆管损伤及相关并发症发生率,病程缩短。

Rh阴性患者临床输血的相关问题

Rh血型是目前国际输血协会(The International Society of Blood Transfusion,ISBT)所认可的30种主要人类血型系统之一,它的临床重要性仅次于ABO血型系统,也是最复杂的人类血型系统。我国Rh阴性的献血者较为稀缺,采供血机构的Rh阴性血库存量较低,缓冲能力相对较弱,在出现临床Rh阴性患者用血较为集中或用量较大时就可能出现Rh阴性血供应紧张的状况,也常引起媒体及公众的高度关注。因此,Rh血型相关的输血基础理论与循证医学研究对于Rh阴性患者临床用血的保障与安全有着重要意义。

Rh阴性患者临床输血的相关问题

我国Rh阴性的献血者较为稀缺，采供血机构的Rh阴性血库存量较低，缓冲能力相对较弱，在出现临床Rh阴性患者用血较为集中或用量较大时就可能出现Rh阴性血供应紧张的状况，也常常引起媒体及公众的高度关注。因此，Rh血型相关的输血基础理论与循证医学研究对于Rh阴性患者临床用血的保障与安全有着重要意义。

Menin蛋白和TGF-β在甲状旁腺肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨Menin蛋白与转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)在甲状旁腺肿瘤发生中的作用及相互关系。方法62例标本包括正常甲状旁腺组织7例,甲状旁腺增生组织12例,甲状旁腺腺瘤组织43例。通过免疫组化法检测它们中Menin蛋白和TGF-β的表达,并进行分组比较。结果Menin蛋白的表达,正常组、增生组同腺瘤组比较差异均有统计学意义(P<0.05),正常组同增生组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β的表达,正常组、增生组和腺瘤组三者之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。但Menin蛋白和TGF-β在腺瘤中的表达存在显著相关(P<0.05)。结论Menin蛋白的失活在甲状旁腺肿瘤的发生中起重要作用;Menin是TGF-β信号传递途径中的一种关键蛋白。

分化型甲状腺癌复发因素分析

目的了解有关影响分化型甲状腺癌复发的因素。方法通过对140例复发的分化型甲状腺癌患者的回顾性分析,比较各种发病因素,采用统计学方法对比可能影响复发的因素。结果性别、年龄对甲状腺癌的复发无明显影响(P>0.05)。肿瘤大小、病理分型、淋巴转移、手术方式及术后服药等因素对复发均有影响(P>0.05),其中是否行颈部淋巴结清扫对复发无影响。结论对于可能复发的分化型甲状腺癌,应采取相应措施尽量减少复发,同时也不应盲目扩大手术范围。

甲状旁腺组织中细胞周期素D1过度表达与Rb肿瘤抑制基因的表达和临床意义

目的探讨甲状旁腺组织中细胞周期素D1(cyclin-D1)及视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)的表达及临床意义。方法应用免疫组化技术对36例甲状旁腺腺瘤,10例正常甲状旁腺组织及10例甲状旁腺增生中cyclin-D1及Rb肿瘤抑制基因的表达进行检测。结果腺瘤组cyclin-D1的表达明显高于正常组及增生组(P<0.05),正常组同增生组比较差异无显著性(P>0.05)。Rb的表达正常组、增生组和腺瘤组三者之间比较差异均无显著性(P>0.05)。cyclin-D1过度表达和Rb表达与肿瘤大小、血清钙水平及甲状旁腺素(PTH)水平无关。结论cyclin-D1的过度表达在甲状旁腺腺瘤发生中起重要作用。cyclin-D1过度表达导致Rb磷酸化或表达下调而失去细胞抑制效应可能为甲状旁腺腺瘤发生的机制之一。

Bcl-2家族蛋白在Ad.mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化

目的观察Bcl-2家族蛋白在Ad.mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化,初步探讨Ad.mda-7介导肝癌细胞的凋亡机制。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒转染HepG2和L02,通过四甲基偶氮哩蓝染色法(MTT)及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞HepG2和正常肝胚细胞L02的生长抑制和杀伤作用。Annexin V和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2家族蛋白的变化。结果Ad.mda-7能明显抑制肝癌细胞HepG2的生长,但对正常肝胚细胞L02没有明显抑制增殖作用。Hoechst染色和流式细胞仪提示Ad.mda-7能明显诱导肝癌细胞HepG2细胞的凋亡,但对正常肝胚细胞L02没有明显毒副作用。Western blot说明抑制凋亡的蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达在HepG2明显下降,在L02中则没有变化;而促凋亡蛋白Bax在HepG2和L02都升高。结论Ad.mda-7转染HepG2后,促凋亡(Bax)与抑凋亡蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)的比率发生改变,进而发生凋亡。

Mammotome联合开放手术治疗多发性乳腺肿块的研究

目的探讨超声引导下曼默通（Mammotome，MMT）联合开放手术对多发性乳腺肿块的临床治疗价值。方法118例多发性乳腺肿块患者，分为MMT联合开放手术组（联合组）及传统开放手术组（对照组），联合组中肿块直径〉2．5cm者、位于乳晕和乳房边缘者选用开放手术，其余选用MMT。术后随访3个月至1年，比较两组手术情况、术后并发症、美容效果和心理满意度。结果联合组手术时间短，术后疼痛少，皮下血肿少，切口数量少，患者满意度高，较开放组优势明显。结论超声引导MMT联合开放手术治疗多发性乳腺肿块，是一种微创、安全、美容效果好的手术方法，值得推广。

腹部外伤伴会阴部严重损伤的临床救治

目的探讨腹部外伤伴会阴部严重损伤的救治。方法收集同济大学附属东方医院急诊创伤外科2010年1月至2011年5月收治的腹部外伤伴会阴部严重损伤病人10例，其中合并骨盆骨折9例，年龄17-56岁，平均37岁。通过运用损伤控制，在救治腹部外伤的同时积极抗休克治疗，合理、及时地清创，加强生命支持等，预防阻断多器官功能不全综合征（MODS）的发生。结果10例中死亡3例，死亡原因为失血性休克，感染扩散，激发MODS致死亡；余7例恢复可，功能恢复良好，生活质量佳。结论伴有会阴部开放性损伤的腹部创伤病人一般同时伴有骨盆骨折，治疗的关键在于病情的明确诊断及预估，早期积极抗休克治疗，运用损伤控制原理进行必要的急诊手术，避免二次打击的发生。早期合理、彻底地清创。及时控制减轻全身炎症反应综合征，阻断MODS的发生。