肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的 探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用。方法 应用MTT比色法检测类胰蛋白酶对成纤维细胞的增生,RT PCR检测I型胶原mRNA的表达。结果 肥大细胞类胰蛋白酶可促进肾间质成纤维细胞增生和I型胶原mRNA的表达,且依赖于肝素的存在。蛋白水解酶抑制剂苯甲脒能抑制类胰蛋白酶的上述效应。结论 肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于肾间质成纤维细胞,参与肾间质纤维化过程。

肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞MCP-1和PAR-2表达的影响

目的进一步探讨肥大细胞类胰蛋白酶在慢性肾组织纤维化中的作用。方法采用胶原酶消化法从肾肿瘤患者切除的肾标本获取肾组织(经光镜检查,无肿瘤细胞浸润)分离、培养人肾间质成纤维细胞。应用细胞形态学、免疫细胞化学鉴定培养的细胞为人肾成纤维细胞后,分组进行下一步实验。应用RT PCR检测单核细胞趋化因子1(MCP1)和蛋白水解酶激活受体2(PAR2)mRNA的表达。结果成功培养了人肾成纤维细胞,肥大细胞类胰蛋白酶(10～500ng/ml)可促进肾间质成纤维细胞PAR2和MCP1mRNA的表达,且依赖于肝素的存在。蛋白水解酶抑制剂苯甲脒(200μmol/L)能抑制类胰蛋白酶的上述效应。TGFβ中和抗体不影响上述效应。结论肥大细胞类胰蛋白酶可能通过PAR2直接作用于肾间质成纤维细胞,促进人肾成纤维细胞表达MCP1,参与肾间质纤维化过程。

内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响

目的探讨骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响。方法应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,内皮祖细胞选择性培养液培养后移植到单侧输尿管梗阻大鼠。应用免疫组织化学半定量单侧输尿管梗阻大鼠肾间质微血管密度的改变。应用Westernblot检测血管生成素-1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果单侧输尿管结扎模型(UUO)组在术后14、21d肾小管周毛细血管指数较假手术组明显下降(P<0.05),毛细血管变形表现为明显的扭曲、萎缩或扩张。移植组在14、21d肾小管周毛细血管指数(PCI)显著低于假手术组(P<0.05),但高于同期较UUO组(P<0.05)。与假手术组比较,UUO组、移植组Ang-1、VEGF表达第7天显著增加,随后迅速下降,而移植组各时相点均高于同期UUO组(P<0.05)。结论内皮祖细胞移植以旁分泌、自分泌机制参与单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建。

大鼠骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏损伤的修复

目的探讨大鼠骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的修复作用。方法应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,内皮祖细胞选择性培养液培养后移植到单侧输尿管梗阻大鼠。应用PAS、HE、Masson染色方法判断梗阻大鼠损伤和修复情况,应用免疫组织化学检测-αSMA和HIF-1α表达,应用Western blot检测HIF表达。结果各组间肝功能、肾功能无显著性差异;与假手术组比,UUO组肾脏病理积分显著增加,移植组肾脏病理积分显著低于UUO组(P<0.05);UUO组α-SMA在14、21d显著高于假手术组(P<0.05),移植组-αSMA在14、21d显著低于UUO组(P<0.05);假手术组仅有少量HIF表达,且主要表达在胞质,UUO组HIF表达随病程进展逐渐增加(P<0.05),移植组HIF表达显著低于UUO组(P<0.05)。结论EPCs移植改善了UUO大鼠梗阻肾脏的损伤、纤维化和低氧状况。

BMP-7对高糖诱导近端肾小管上皮细胞外基质及NF-κΒ表达的影响

目的探讨骨形态发生蛋白7(BMP-7)对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HKc)表达细胞外基质及核转录因子-κΒ(NF-κΒ)的干预作用。方法采用人近端肾小管HKc细胞株,将细胞分为正常对照组(NG,5·5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,25mmol/L葡萄糖)、HG+100ng/mlBMP-7组、NG+100ng/mlBMP-7组、高渗组(HM,25mmol/L甘露醇)。应用免疫细胞化学和ELISA技术检测细胞Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)表达,用凝胶电泳迁移率竞争试验(EMSA)检测NF-κΒ的表达。结果高糖作用下NF-κΒ活性和Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白表达显著增高,加入100ng/mlBMP-7后可显著抑制NF-κΒ活性及Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的表达。结论BMP-7可能通过抑制NF-κΒ活性而从转录水平抑制高糖诱导的近端小管细胞细胞外基质的过度表达。

浅谈企业组织资本

交易费用理论的存在是企业存在的最根本的存在理由，与交易费用对应的组织资本为企业提供了另一个存在的理由。如同任何企业都有交易费用一样，任何组织都具有组织资本，组织资本的正负决定了组织的生死，组织资本的大小决定了组织成长或者衰退的快慢与规模。

税务统计的任务及误差原因分析

税务统计分析就是根据党和国家的方针、经济政策和税收政策，对调查搜集来的大量详细的国民经济和社会发展情况，税源、税收和税政情况的统计资料，按照科学的理论和统计分析方法加工整理，进行定量、定性的系统分析研究。税务统计包括税收统计、税源统计和税政统计三个方面。

做好统计法制工作的思考与建议

当前如何开展统计法制工作，依法保障统计活动的顺利实施，拓展统计的功能，完成统计的法定任务，充分发挥统计在市场经济中的作用，是统计法制部门面临的新课题。

血液透析联合血液灌流对维持性血液透析患者微炎性因子及钙磷代谢的影响

目的:探讨血液透析联合血液灌流对维持性血液透析患者微炎性因子及钙磷代谢的影响。方法:选取在本院接受维持性血液透析治疗的患者共116例,将其随机分为观察组和对照组,各58例。其中对照组采取血液透析治疗,观察组采取血液透析与血液灌流联合治疗。观察并比较两组治疗前后炎性因子水平变化及钙磷代谢改善情况。结果:观察组治疗后白介素-6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hsCRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血磷、成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)、全段甲状旁腺素(iPTH)水平与对照组比较明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);而血红蛋白(HB)、血清白蛋白(Alb)及血钙、血清1,25-(OH)2D3水平与对照组比较明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:血液透析联合血液灌流对维持性血液透析患者具有更好的临床疗效,可以有效地改善患者的微炎症状态,维持其钙磷代谢平衡,进而提高患者的生活质量和生存率,值得大力推广和应用。

系膜增生性肾小球肾炎患者血清Th1/Th2细胞因子表达的变化

目的观察系膜增生性肾小球肾炎患者血清Th1和Th2类细胞因子(INF-γ、IL-4、IL-10)表达变化。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定10例正常人和25例慢性肾小球疾病患者(轻中度系膜增生性非IgA肾小球肾炎)外周静脉血血清INF-γ、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果系膜增生性肾小球肾炎患者血清INF-γ分泌水平较正常人明显增多(P<0.01),而IL-10分泌水平较正常人明显减少(P<0.05),IL-4分泌水平则与正常人无显著差异(P>0.05),系膜增生性肾小球肾炎患者INF-γ/IL-4、INF-γ/IL-10值均显著高于正常人(P<0.05)。结论系膜增生性肾小球肾炎患者在外周血细胞因子水平存在Th1/Th2免疫失衡,可能参与了系膜增生性肾小球肾炎的免疫发病机制。

PTEN编码蛋白对TGF-β_1刺激大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN的抑制作用

目的观察PTEN基因编码蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾成纤维细胞分泌Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的影响。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,实验分为4组,对照组,TGF-β1组(给予TGF-β1刺激),PTEN+TGF-β1组(Ad-PTEN转染后给予TGF-β1刺激)和GFP+TGF-β1组(Ad-GFP转染后给予TGF-β1刺激)。倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达。转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平。结果PTEN腺病毒转染后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达增多。TGF-β1组及GFP+TGF-β1组较对照组ColⅣ、FN分泌量明显增多,PTEN+TGF-β1组较TGF-β1组及GFP+TGF-β1组ColⅣ、FN分泌量明显降低(P<0·05)。结论PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN,故可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用。

激活素A刺激大鼠肾成纤维细胞增殖和激活

目的研究激活素A对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞增殖及激活的影响。方法取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养,分别向培养液中加入激活素A或激活素A加卵泡抑素或卵泡抑素,应用MTT法检测细胞增殖情况(OD值),免疫组化及RT-PCR法检测培养细胞α-肌动球蛋白(-αSMA)的表达,以观察成纤维细胞的激活状况。结果与对照组和卵泡抑素组相比,激活素组成纤维细胞的OD值增高有统计学意义(P<0.05),表达-αSMA mRNA和蛋白显著增多。结论激活素A能促进肾间质成纤维细胞增殖和激活,提示激活素A可能在肾间质损害的发生发展中起重要作用。

MicroRNA-30a在评估慢性肾衰竭血液透析效果中的作用

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在慢性肾衰竭患者透析前后血清中的表达差异,评价其在评估慢性肾衰竭血液透析效果中的作用。方法选取2012年10月至2013年12月本科收治的慢性肾衰竭患者40例,分别在患者透析前后采血并获得血清样本,采用mirV ana PARIS Kit提取血清样本中总RNA,利用qRT-PCR法检测miR-30a的表达,临床生化检测患者透析前后血清中肌酐(Cr)、尿素氮(Ur)及β2微球蛋白(β2-MG)的含量,表达值行曼-惠特尼U检验,工作特征曲线(ROC curve)评估miR-30a在慢性肾衰竭患者透析效果中的价值。结果 miR-30a、Ur和β2-MG在慢性肾衰竭患者透析后的表达显著低于透析前(P<0.05,P<0.01),ROC curve显示在患者透析后miR-30a的表达低于透析前0.25倍以上时患者可获得较好的透析效果。结论 miR-30a可作为一种潜在的评估慢性肾衰竭血液透析效果的生物标志物。

DNA免疫吸附治疗狼疮性肾炎的临床观察

目的观察DNA免疫吸附血液灌流器对狼疮性肾炎患者的临床疗效。方法选择重庆第三军医大学新桥医院肾内科16例活动性狼疮性肾炎患者,采用DNA免疫吸附血液灌流器进行32例次血液灌流。观察相关症状及蛋白尿改善情况;ANA、ds-DNA清除效果;血常规、肝、肾功能、电解质、免疫球蛋白等影响程度。结果吸附后症状明显改善,尿蛋白减轻;ANA水平显著下降(P=0.0001),ds-DNA抗体完全清除;血中有形成份、肝、肾功能、电解质等无明显影响。结论DNA免疫吸附血液灌流的净化疗法是治疗狼疮性肾炎特异性相对较强、疗效好、无明显毒副反应的一种新疗法。

系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞及肾组织PD-L1/PD-L2的表达变化

目的观察系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肾组织活检标本中抑制性协同刺激分子PD-L1/PD-L2表达的变化。方法收集2007年11月-2008年5月在第三军医大学新桥医院住院的25例原发性系膜增生性肾小球肾炎患者作为病例组,另外选择10例正常人作为正常对照组。全血法多色流式细胞染色技术检测两组的PBMC CD4+和CD8+ T细胞上PD-L1和PD-L2的表达水平;免疫组化方法检测肾组织活检标本中PD-L1和PD-L2的表达情况。结果病例组患者PBMC CD4+ T细胞比例(31.78%±8.48%)明显高于正常对照组(22.17%±8.00%,P<0.05),而CD8+T细胞比例(23.06%±10.32%)与正常对照组(21.56%±5.32%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。病例组患者PBMC CD4+和CD8+ T细胞上PD-L1表达阳性率(分别为14.21%±11.87%、12.92%±12.86%)均较正常对照组(分别为5.39%±4.92%、5.06%±4.61%)显著升高(P<0.05);而两组PBMC CD4+及CD8+ T细胞上PD-L2的表达很少甚至无表达,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组中肾组织PD-L1表达很少甚至无表达,病例组肾小管上皮细胞可见PD-L1阳性表达;两组肾活检组织中均未检测到PD-L2表达。结论系膜增生性肾小球肾炎患者中抑制性协同刺激分子PD-L1表达上调,可能参与了疾病的免疫发病机制。

尿毒症血清蛋白对血管内皮细胞的损伤作用

目的研究尿毒症血清蛋白对人血管内皮细胞的损伤作用,探讨蛋白结合尿毒症毒素对人血管内皮细胞的损伤作用。方法采集维持性血液透析尿毒症患者和正常健康人的静脉血,经过血清分离、透析、低温真空冻干等处理提取血清蛋白,以不同浓度的尿毒症血清蛋白溶液或正常血清蛋白溶液(0.4%、1%、2%、4%)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不同时间(24、48、72 h),设置空白对照组。倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8检测细胞增殖抑制率,一氧化氮(NO)试剂盒、一氧化氮合酶(NOS)试剂盒分别检测细胞培养上清液NO浓度和细胞NOS活性,流式细胞仪检测内皮细胞膜微粒(EMPs)产生率、细胞凋亡率。结果与正常血清蛋白溶液组、空白对照组比较,尿毒症血清蛋白溶液组细胞折光性差,细胞间隙增宽,细胞膜表面毛糙,细胞突起明显增多,细胞形态各异,胞浆颗粒明显增加。不同浓度的尿毒症血清蛋白溶液处理HUVEC的细胞增殖率均显著低于相应正常血清组和空白对照组(P<0.05)。与正常蛋白溶液组、空白对照组比较,尿毒症蛋白溶液组细胞培养上清液中NO浓度降低、细胞NOS活性明显降低(P<0.05)。尿毒症蛋白溶液组EMPs产生率为(62.57±1.59)%,显著高于空白对照组(7.3±0.57)%和正常蛋白溶液组(13±0.94)%(P<0.05)。尿毒症蛋白溶液对HUVEC细胞凋亡无明显影响。结论尿毒症血清蛋白溶液能使内皮细胞形态发生变化,抑制内皮细胞增殖,损伤内皮细胞分泌功能,导致内皮细胞功能受损。

HD联合HP对维持性尿毒症透析患者微炎症状态、肾功能和营养状况的影响

目的:探讨血液透析(HD)联合血液灌流(HP)对维持性尿毒症透析(MHD)患者微炎症、肾功能和营养状况的影响。方法:选择我院收治的维持性血液透析的尿毒症患者68例,随机分为两组:HD组(单纯采用HD治疗)和HD+HP组(采用HD联合HP治疗),每组各34例,分别在治疗前和治疗3月后采血,测量其超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症状态指标、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)等肾功能指标,尿β2-微球蛋白(β2-MG)和血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(Alb)、血浆瘦素(leptin)等指标。结果:①两组患者治疗前后hs-CRP、IL-6、TNF-α和β2-MG等指标均无统计学差异(P>0.05),治疗后HD组患者上述指标较治疗前无明显改变(P>0.05);而HD+HP组其上述指标水平较治疗前有明显下降(P<0.05)。②两组患者治疗前Leptin、Hb、Alb水平无统计学差异(P>0.05),HD组治疗后其Leptin水平较治疗前无明显变化(P>0.05),Hb和Alb较治疗前明显升高(P<0.05);HD+HP组治疗后其Leptin水平较治疗前明显降低(P<0.05),Hb和Alb较治疗前明显升高(P<0.05),且与HD组比较,变化更明显(P<0.05)。结论:HD联合HP可明显降低MHD尿毒症患者的炎性因子表达,改善患者的肾功能和营养状况。

SD大鼠胚胎后肾间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的对SD大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMSCs)进行分离培养,并检测其生物学特性。方法采用胚胎后肾微组织块接种培养法,检测其生长曲线和生长周期,并进行细胞表面抗原和成骨能力的鉴定。结果MMSCs体外培养生长状况良好,具有活跃的增殖能力。细胞周期显示90%以上细胞处于G0/G1期。表面抗原检测绝大多数细胞阳性表达波形蛋白(vimen-tin)和纤维连接蛋白(fibronectin),几乎不表达CD34。在体外能够向成骨细胞分化。结论原代分离、培养的细胞为MMSCs,细胞纯度高、扩增迅速、生物学性状稳定,可为组织工程提供比较理想的种子细胞。