犬接种鼠疫菌后的血清鼠疫F1抗体及IgM动态

目的通过覌测犬接种鼠疫菌后鼠疫F1抗体及其IgM动态,推算发生动物鼠疫流行的时间和地点。方法应用ELISA夹心法检测犬鼠疫F1抗体,捕获法检测IgM,两种方法同步检测接种鼠疫菌EVparis株活菌的犬血清。结果犬接种鼠疫菌后第5d,抗鼠疫F1抗体和IgM都出现了阳性反应,IgM显色和滴度第7～9d达到高峰,第15～22d开始快速下降,第46d以后降到阳性标准以下;F1抗体在接种鼠疫菌后第38d显色和滴度达到高峰,第78d仍保持在OD450nm2.700以上和滴度1∶210左右。结论根据ELISA检测犬鼠疫F1抗体和IgM的结果,可推算动物间鼠疫流行的时间和范围,为及时实施防控措施提供参考资料。

耶尔森氏菌YadA蛋白单克隆抗体的研制与鉴定

１．以纯化的ＹａｄＡ蛋白〔１、３〕免疫普通小鼠４只，获得小鼠ＹａｄＡ多克隆抗血清；２．利用上述免疫血清建立了ＹａｄＡ多克隆抗体的ＥＬＩＳＡ检测技术，并对其最适条件进行了观察；３．用纯化的ＹａｄＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠２只，以免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，获得１７株分泌ＹａｄＡ－ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株，将其中４株进行了再克隆，经过半年左右的反复传代及冷冻、复苏测试，抗体分泌稳定；４．Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明瘤株所分泌的单克隆抗体特异；５．

反向血凝抑制试验(RIHI)检测鼠疫F1抗体在疫情监测和疫源地调查中的应用

在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部阴性,IHA 出现假阳性反应89份。鼠疫疫区3种动物血清713份,RIHI 检出 Fl 抗体阳性反应72份,未出现假阳性反应,IHA 检出 F1 抗体阳性反应44份,出现假阳性反应21份,几何平均滴度 RlHl 比 IHA 高2^(1.45)。RIHI 的特异性和敏感性均高于 IHA ,且简便、稳定、快速,是取代 IHA 检测鼠疫 Fl 抗体的理想方法。

新疆出血热病毒免疫荧光试验检测结果报告

目的了解新疆出血热(XHF)的自然界分布状况。方法对采自塔里木盆地、准噶尔盆地、伊犁谷地和东疆盆地23个县(市)的96份病原材料分别接种Vero-E6细胞,病原材料经细胞培养后,胰酶消化制备细胞片,应用免疫荧光试验(IFA)对细胞片进行病毒检测。结果96份病原材料中,检出新疆出血热病毒颗粒阳性材料16份,分布地区包括巴楚、于田、轮台、民丰、尉梨、莫索湾、吐鲁番和木垒。结论巴楚、于田、轮台、尉梨、莫索湾和木垒地区存在新疆出血热的自然界分布,而民丰和吐鲁番仅从羊血液标本中查出阳性,不能说明该地区存在新疆出血热的自然界分布。

灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地监测中应用ELISA检测F1抗体的可行性分析

目的观测灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地监测中应用酶联免疫吸附试验夹心法(ELISA)检测鼠疫F1抗体的效果,分析应用前景。方法 ELISA和间接血凝试验(IHA)同步检测动物血清鼠疫F1抗体,比较两种方法的阳性率、反应滴度。结果 ELISA和IHA检测血清的鼠疫F1抗体,长尾黄鼠阳性率分别为11.71%(118/1 008)和1.73%(21/1 216),平均滴度分别为27.805和21.254;牧犬阳性率分别为38.89%(28/72)和10.71%(7/75),平均滴度分别为27.731和21.50。ELISA检测长尾黄鼠、牧犬血清鼠疫F1抗体的阳性率和平均滴度均高于IHA,差异非常显著(P<0.001)。结论两种方法同步用于鼠疫监测,可及时发现并纠正单一方法因试剂变质或失效出现的错误结果,为制定防控措施提供准确的监测资料。

溴敌隆不同饵剂防治褐家鼠的效果观察

目的比较同浓度溴敌隆不同饵剂的现场灭鼠效果,为今后灭鼠工作提供科学依据。方法在新疆实验动物中心3个原料库分别采用含0. 005%溴敌隆的毒水、湿饵和干饵进行灭鼠,观察灭鼠前后的鼠密度变化及灭鼠效果。结果现场灭鼠17 d共发现死鼠59只,95%为褐家鼠,灭鼠17 d后平均鼠密度由灭鼠前的77. 8%下降至0,校正灭鼠率为100%。溴敌隆毒水和干、湿饵投放后分别在第3天和第4天开始发现死鼠,第5～6天达到峰值,第4～8天为溴敌隆灭鼠的关键时期,干旱地区或缺少水源的地方使用溴敌隆毒水灭鼠效率最高。结论应根据褐家鼠生活习性,选择最优的投饵方法进行灭鼠。溴敌隆毒水可显著降低鼠密度,中短期内能取得满意的灭杀效果。

ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原

对应于同一F1抗原分子且不相互阻断的2株F1 McAb,分别制备酶标抗体并包被反应板,用于ELISA双McAb夹心法检测鼠疫F1抗原。以PcAb-RIHA和四步检查为对照,检测不含F1抗原的细菌8株,非鼠疫疫区8种动物的新鲜和腐败标本723份,检测结果全部阴性,和四步检查结果相同,PcAb-RIHA出现非特异反应45份。检测鼠疫强毒菌18株和感染鼠疫标本27份,GMT比PcAb-RIHA高2~4和2~3。本法特异性、敏感性、试剂稳定性均高于PcAb-RIHA。应用于鼠疫疫源地调查、疫情监测、人间疫情判定、细菌学研究效果良好。

新疆阿拉套山发现鼠疫自然疫源地

目的 查清阿拉套山是否存在鼠疫自然疫源地 ,以及相关的动物和昆虫区系。方法 应用流行病学、医学动物昆虫学、血清学和细菌学等方法。结果 调查区内共采集啮齿动物 10种 ,优势动物为灰旱獭 (Marmotabaibacina) ,次为长尾黄鼠 (Citellusundulatus)与灰旱獭在同一生境 ;灰旱獭定点观察密度为 2 .5～ 5 .5只 /hm2 ;旱獭路线密度最高 2 .3 6只 /hm2 ,最低仅为 0 .0 1只 /hm2 。旱獭洞干蚤染蚤率 0 .3 6%、灰旱獭体蚤染蚤率为 6.2 %。采集小型鼠类的蚤类 18种 ,蜱 2种 ,虱 1种。灰旱獭体蚤主要为谢氏山蚤和似升额蚤及草原硬蜱。检查鼠类血清标本 180份 ,其中灰旱獭阳性血清 2份 ;牧狗血清 114份 ,阳性 1份。从自毙旱獭中 ,分离出 4株鼠疫菌。结论 首次判定新疆阿拉套山存在鼠疫自然疫源地。

耶尔森氏菌外膜蛋1（Yop1）的提取纯化与鉴定

耶尔森氏菌外膜蛋白（Ｙｏｐｓ）在菌体中所占比例甚小，因而提取与纯化均有一定难度，国内尚无成功的先例。我们使用了一种盐析加电泳的方法提取了Ｙｏｐ１蛋白。实验结果表明，该法简便、易行且重复性好、回收率高。使用本法提取假结核耶氏菌外膜蛋白１（Ｙｏｐ１），自每升培基增殖的菌体中（约４．５ｇ湿重），可获得纯品６．３ｍｇ，回收率高于国外同类研究的６倍以上［１］。一次性提取的Ｙｏｐ１蛋白在十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）中共显示出三条可辩认的蛋白带，其分子量依次为１５０ＫＤ，９０～１００ＫＤ及４５～５０ＫＤ。进一步的尿素－十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，样品中的约１００ＫＤ和５０ＫＤ两种蛋白实际为１５０ＫＤ蛋白解聚后的二聚体和单体，根据这一结果，推测该种蛋白系三聚体，其单体分子量为４５～５０ＫＤ。

鼠疫菌pH6抗原的提取、纯化与鉴定

使用ＫＣＮＳ解离、硫酸铵沉淀、电泳制备分离并纯化了鼠疫菌ｐＨ６抗原。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图型显示，提取物为单一蛋白，参照标准，推算其分子最约１５ｋＤ。多数情况下，在其上方尚有一条含最较低、表征分子量约１６ｋＤ的蛋白带，用Ｆ１单克隆抗体及１５ｋＤ蛋白制备的抗血清分别进行测定，该蛋白仅能与１５ｋＤ蛋白的抗血清产生高滴度反应，从而排除了其为Ｆ１抗原的可能性。依据上述实验结果并结合ＬｉｎｄｌｅｒＬＫ等的资料分析，该蛋白与提纯抗原属同一物质，表征分子量间的差异，很可能是分子量较大的一种（约１６ｋＤ）带有一段１ＫＤ的信号序列所致。用精制的ｐＨ６抗原免疫小鼠４只，所有小鼠于初次免疫后的第３０天放血测定，均与提纯抗原出现了高滴度的阳性反应，说明尽管提纯蛋白的方法不够温和，有可能使蛋白发生变性，但其免疫原性基本不受影响，做一般使用时可不做复性处理。

鼠疫菌pH6抗原的免疫效果观察

对实验条件下鼠疫耶尔森氏菌 p H6抗原的免疫效果及其对鼠疫强毒菌再攻击的保护力进行了观察 :(1)建立了鼠疫菌 p H6抗原的酶联免疫吸附试验 (简称 p H6 Ag- EL ISA)及间接红细胞凝集试验 (简称 p H6 Ag- IHA)检测技术 ,检测敏感、特异 ;(2 )用常规方法免疫小鼠 ,以 p H6 Ag- EL ISA和 p H6 Ag- IHA两种方法进行检测 ,实验动物均出现了较高滴度的免疫反应 ,其最高滴度分别为 1∶ 12 80 0和 1∶ 10 2 40 ;(3)对 40只免疫昆明小鼠进行鼠疫强毒菌攻击 ,其半数致死量虽较对照组稍有提高 ,但保护效果不明显 ;对产生这一结果的原因进行了分析 ,在此基础上 。

一种改良的耶尔森氏菌YadA蛋白提纯方法

本文介绍了一种改良的耶尔森氏菌ＹａｄＡ蛋白的提纯方法，该法省去了超声破碎菌体和超高离心等步骤，从而使之简便易行，得率高于原法。

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。

鼠疫菌pH6抗原单克隆抗体的研制及鉴定

:(1)依据 p H6抗原的生化特征及表达条件 ,对不同温度 (37℃和 2 8℃ )及不同酸碱度 (p H6和 p H7)条件下培养细菌的提取物进行了电泳图型对比 ;(2 )依照上述电泳图型 ,并结合该抗原的分子量 ,确定了 p H6抗原的电泳迁移位置 ;(3)采用 KCNS洗脱、(NH4) 2 SO4盐析、制备电泳的方法提取和纯化了鼠疫耶尔森氏菌 (Yersinia pestis) p H6抗原 ,SDS-PAGE分析表明 ,提取物均一 ,表征分子量符合 ,回收率较高 ;(4)使用纯化抗原免疫普通小鼠 5只、BAL B/ c小鼠 3只 ,免疫效果良好 ,利用获得的免疫血清 ,建立了 p H6抗原多克隆抗体的 EL ISA检测技术 ,应用于融合细胞中阳性克隆的筛检及实验动物的免疫效果评价 ,应用结果证实 ,检测敏感、有效 ;(5 )利用细胞融合技术获得杂交瘤 17株 ,对其中的 4株进行了 3次再克隆并经半年反复冷冻、复苏及上清检测 ,证实瘤株分泌抗体稳定 ;(6 )对所获单抗进行了 Western blotting(蛋白印迹试验 )鉴定 ,结果显示抗体特异。

鼠疫菌pH6抗原的电泳图型识别及其体外表达条件

ｐＨ６抗原是鼠疫菌毒力的重要组成部分，研究结果显示，这种抗原很可能与腺鼠疫的发病机制有关。为提供国内急需的ｐＨ６抗原纯品，研究和观察了该抗原的体外适宜表达条件。结果表明，在四种常规培基中，ｐＨ６抗原均可表达，但在ＬＢ培基中，该抗原的表达量明显高于其他培基。此外，还进行了两种ｐＨ及两种温度条件下该抗原表达量的比较，如预期的那样，该抗原仅在酸性和３７℃条件下最大限度表达。根据该抗原不同时ＰＨ和温度条件下十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ｐＡＧＥ）图型的比较、参照已单体分子量，初步识别了该抗原的电泳图型，为今后进一步提取、纯化这种抗原成分奠定了基础。

鼠疫F1McAb纯化抗原固相放射免疫试验检测鼠疫抗体的应用

本文介绍了用鼠疫F1McAb亲和层析法纯化鼠疫F1抗原及用Lodogen法制备^(125)I-F1标记物的方法。并以此标记物为试剂,用于固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体。试验表明,固相放射免疫试验较间接血凝试验特异性强,敏感性高,而且可用于检测各种鼠疫动物血清。操作程序亦较放射免疫沉淀试验简单,主要省去了离心沉淀及抽吸游离^(125)I-F1的过程。

反复冻融对鼠疫F1抗原/抗体效价的影响

目的了解鼠疫免疫学检测样本反复冻融对其效价的影响。方法分别取4份鼠疫F1抗原和鼠疫F1抗体阳性样本,连续8次反复冻融后,利用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),分别检测冻融前后样本的免疫学效价。结果4份鼠疫F1抗原检测样本,冻融前IHA和ELISA效价分别为:样本Ⅰ1∶2^(8)和1∶2^(11)、样本Ⅱ1∶2^(7)和1∶2^(10)、样本Ⅲ1∶2^(6)和1∶2^(8)、样本Ⅳ1∶2^(3)和1∶2^(6),连续8次反复冻融后IHA和ELISA平均效价分别为:样本Ⅰ1∶2^(8)和1∶2^(11)、样本Ⅱ1∶2^(7)和1∶2^(10)、样本Ⅲ1∶2^(6)和1∶2^(8)、样本Ⅳ1∶2^(3)和1∶2^(6)。4份鼠疫F1抗体检测样本,冻融前IHA和ELISA效价分别为:样本Ⅴ1∶2^(8)和1∶2^(11)、样本Ⅵ1∶2^(7)和1∶2^(10)、样本Ⅶ1∶2^(6)和1∶2^(9)、样本Ⅷ1∶2^(3)和1∶2^(6),连续8次反复冻融后IHA和ELISA平均效价分别为,样本Ⅴ1∶2^(8)和1∶2^(11)、样本Ⅵ1∶2^(7)和1∶2^(10)、样本Ⅶ1∶2^(6)和1∶2^(9)、样本Ⅷ1∶2^(3)和1∶2^(6)。结论反复冻融(不超过8次)对鼠疫F1抗原(抗体)阳性样本效价基本无影响。

鼠疫间接血凝试验影响因素及质量控制

鼠疫间接血凝试验是一种快速、敏感、特异性高的血清学诊断方法。经多年实践证明,该方法在疫源调查、快速检验及追溯诊断等方面发挥着重要作用,但在实际工作和现场指导中发现,很多专业人员对试验的影响因素及如何进行质量控制一知半解。为规范操作,本文就试验中试剂器材、样品处理、操作过程及结果判定等方面做一综述,以期对鼠疫间接血凝试验进行有效的质量控制。