厚壳贻贝血细胞颗粒的蛋白质组学分析

贝类的血细胞在宿主的免疫防御机制中发挥着重要的作用。文章利用线性离子阱-四级杆质谱对厚壳贻贝(Mytilus coruscus)血细胞的颗粒蛋白质组分进行了Shotgun分析,结合Mascot数据库搜索,共鉴定了125种高丰度蛋白,其中包括细胞骨架蛋白、细胞粘附蛋白、精氨酸激酶和代谢相关酶类等。此结果为深入了解厚壳贻贝血细胞颗粒的蛋白组成、贻贝免疫分子标记的筛选及其免疫机制奠定了基础。

一种新型贻贝抗菌肽的分离纯化及鉴定

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)广泛分布于我国东部海域,其体内富含各种抗菌肽分子,是研究软体动物免疫防御机制以及开发抗菌肽来源的新型生物抗生素的重要对象。采用多步反相高效液相色谱对厚壳贻贝血清进行分离纯化,获得一种分子量为6261.55 D的具有抗菌活性的多肽成分;经多肽N端测序和基因克隆,结果表明该抗菌肽由55个氨基酸残基构成,含6个半胱氨酸并形成三对二硫键。结构域分析表明该抗菌肽具有几丁质结合结构域(Chitin-biding domain),因此将该抗菌肽命名为mytichitin-A。Mytichitin-A对革兰氏阳性菌具有较强的抑制作用,同时对真菌及革兰氏阴性菌也具有抑制作用。荧光定量PCR检测表明,mytichitin-A主要在厚壳贻贝的性腺组织中表达且在细菌诱导后12h其表达量达到峰值。研究为深入了解厚壳贻贝抗菌肽的分子多样性及免疫机制奠定了基础。

利用蛋白质组学手段鉴定新型贻贝足丝蛋白

贻贝通过足腺分泌特有的足丝并以此粘附于水下各种基质表面.贻贝足丝中富含各种粘附蛋白,其优异的水下粘附性能使其成为开发新型生物粘合剂的候选分子.厚壳贻贝足丝粘附能力强,本文采用尿素及盐酸胍抽提结合二维双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE),分别对厚壳贻贝足丝纤维和足丝盘的蛋白质进行分离及染色;采用串联质谱技术结合常规搜库和表达序列标签(EST)数据库搜索,对分离获得的蛋白质点进行鉴定,从中获得了mfp-3、mfp-6、胶原蛋白以及3种未曾报道过的新型贻贝足丝蛋白成分.上述研究为深入了解厚壳贻贝足丝蛋白的分子多样性、探讨其粘附机理以及从中筛选具有应用前景的贻贝足丝蛋白奠定了基础.

厚壳贻贝足丝黏附蛋白mfp-3重组表达及黏附功能分析

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)中富含各种黏附蛋白分子,其中贻贝足丝蛋白3(mussel footprotein-3,mfp-3)是贻贝用以与外界基质进行黏附的主要蛋白分子.贻贝足丝中天然的mfp-3的含量低,水溶性差,因此纯化困难.本文以厚壳贻贝足丝蛋白mfp-3的cDNA序列为目的基因,用PCR法扩增Mfp-3基因,并成功构建含有多聚组氨酸标签的重组mfp-3原核表达载体pET-21a/Mfp-3.经IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达出重组蛋白,利用亲和层析和反相高效液相色谱分离纯化,获得分子量为9.18 kD的重组蛋白.经酪氨酸酶催化、玻璃包被和石英晶体微天平(quartzcrystal microbalance,QCM)分析.结果表明,重组厚壳贻贝mfp-3蛋白经酪氨酸酶催化后,L-3,4-二羟基苯丙氨酸(即多巴,L-3,4-dihydroxyphenylalanine,DOPA)含量较高并且具有较好的黏附性能.上述研究为开发以mfp-3黏附蛋白为来源的生物粘合剂奠定了良好的基础.

厚壳贻贝血细胞及血清抗菌肽的分析

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)是中国东部海域广泛分布的具有重大经济价值的水产养殖贝类,其血淋巴中含有多种抗菌肽分子。为了解厚壳贻贝血细胞和血清抗菌肽分子的组成特点,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清及血细胞的抗菌肽进行分离纯化,从中鉴定了多种具有抗菌活性的抗菌肽分子,质谱鉴定结合cDNA文库数据分析表明厚壳贻贝血细胞和血清的抗菌肽主要属于Mytilin和Myticin抗菌肽家族,分子量在3000～7000Da之间,血细胞和血清抗菌肽在分子组成、抗菌谱方面均存在差异,此外还发现有分子量在10000Da左右的新型抗菌肽分子。以上工作为深入了解厚壳贻贝Mytilin抗菌肽的分子多样性、了解厚壳贻贝的免疫机制以及从中筛选具有开发价值的抗菌肽分子奠定了基础。

利用质谱技术结合EST库搜索鉴定厚壳贻贝新型足丝蛋白(英文)

贻贝利用足丝粘附于水下各种基质表面.作为一种具有优异粘附性能的生物材料,贻贝足丝蛋白在新型水下粘附剂及表面保护涂层的研制与开发中具有重要的仿生学意义.目前,已报道的贻贝足丝蛋白分子达11种,但是仍然有更多的足丝蛋白分子不为人知.为进一步探讨贻贝足丝蛋白的分子多样性,并从中筛选具有特殊生物学功能的足丝蛋白分子,本文采用鸟枪法-液相色谱-质谱/质谱技术(shotgun-LC-MS/MS)对厚壳贻贝足丝蛋白进行了蛋白质组学分析.将厚壳贻贝足丝分为足丝纤维和足丝盘两部分,每一部分均采用醋酸-尿素溶液,以及醋酸-盐酸胍溶液进行蛋白质抽提;抽提后的足丝蛋白经胰蛋白酶酶解,利用线性离子阱四级杆质谱(LTQ)进行鸟枪法质谱分析.二级质谱图(MS/MS)用以搜索公共数据库中的贻贝表达序列标签(expressed sequence tag,EST)数据库.采用上述方法,获得14种贻贝新型足丝蛋白的高可信度结果及其所匹配的部分或全长cDNA序列;经结构域分析,发现上述新型贻贝足丝蛋白分子的序列中多数包含各种类型的结构域,包括胶原蛋白结构域、C1Q结构域、C1Q结合结构域、微管蛋白辅助折叠结构域、蛋白酶拮抗结构域、VWA结构域、几丁质酶结构域等.在此基础上,对上述新型足丝蛋白在贻贝足丝形成以及粘附方面的功能进行了推测.上述结果对进一步了解贻贝足丝的分子组成以及粘附机理奠定了基础.

勐腊橡胶林木更新采伐调查作业设计技术研究

根据勐腊农场管理委员会2016年度第一批橡胶林木更新采伐的实际情况,本着科学、实事求是的原则对采伐范围内的所有林地、活立林木进行了详实的调查和科学合理的测量、规划设计,顺利完成了采伐区内的调查设计工作,为橡胶林木产业的可持续发展和森林资源的永续利用铺平了道路。

毒杀农田害鼠技术要点

常见的农田害鼠主要有:褐家鼠、小家鼠、黑线姬鼠等,前两种在室内和田野都可栖息危害,后一种则完全生活在田野里。它们盗食种子,咬断禾苗,作物成熟期大量盗食穗粒,给农业生产带来很大损失。毒杀农田害鼠是用化学药物将鼠群杀死、驱避,使其失去繁殖能力,减少其繁衍传代和危害。据璧山县农牧渔业局植保站近年的试验、示范,开展农田化学灭鼠。

壁山县杂交中稻穗期病虫的综合防治措施

壁山县杂交中稻穗期病虫的综合防治措施王信超（壁山县农牧渔业局６３２７６０）水稻是我县主要粮食作物之一．常年种植面积３２万亩左右，总产达１４．５万吨左右，占全年粮食总产的６０％．在水稻全生育期中．病虫种类较多，特别是穗期病虫危害严重，品质降低，商品性状...

性早熟儿童肠道菌群结构特征分析

目的分析性早熟儿童肠道菌群结构特征,探寻肠道菌群与儿童性早熟之间的关系,探讨儿童性早熟与肥胖之间的联系。方法纳入2018年9月~2019年10月于江苏大学附属医院就诊的性早熟儿童,分为治疗前、后组,选择同期于笔者医院体检的单纯性肥胖儿童及体重指数(body mass index,BMI)正常的健康儿童分别为肥胖组及对照组,收集各组儿童新鲜粪便标本,应用16S rRNA高通量测序分析其肠道菌群结构特点,采用问卷调查的形式调查分析纳入研究的各组儿童饮食习惯,性早熟组住院按照临床路径管理完成性激素等检查。结果代表肠道菌群丰富度指数Ace指数,Chao1指数在性早熟治疗前组均明显低于对照组(P<0.05),而与肥胖组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);性早熟治疗后组Ace指数及Chao1指数明显高于治疗前组,多样性指数Shannon指数比较,差异无统计学意义。对各组儿童肠道菌群门水平分布研究显示,性早熟治疗前组拟杆菌门丰富度较对照组明显升高,而厚壁菌门、放线菌门及疣微菌门丰富度明显下降(P<0.05),且与肥胖组比较差异无统计学意义。各组儿童肠道菌群属水平分布显示,性早熟治疗前组双歧杆菌属及乳杆菌属等菌属丰富度较对照组明显下降,而拟杆菌属及普氏菌属等菌属丰富度明显升高(P<0.05),这些菌属丰富度与肥胖组比较,差异无统计学意义。主成分分析(principal component analysis,PCA)显示性早熟治疗前组肠道菌群与对照组菌群结构比较,差异有统计学意义。性早熟儿童及肥胖儿童在饮食方面更倾向于肉食及油炸类高热量食物,性早熟治疗前食反季水果概率明显高于肥胖组及正常组。结论性早熟儿童肠道菌群丰富度及多样性均明显下降,门及属水平菌群结构出现改变,提示肠道菌群结构紊乱可能是导致儿童性早熟发生的潜在因素,性早熟组与肥胖组儿童肠道菌群结构及饮食习惯均存在一定的相似性,为探究性早熟与肥胖之间潜在的发生机制再添新证。

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