心神经调节不经中枢神经系的反射通路的研究

1 传统认为调节心功能的神经通路均经过中枢神经系脊髓和/或延髓,其一级感觉神经元位于脊神经节和迷走神经节.已知消化管的肠神经系统内有感觉神经元,胃肠有不经过中枢神经系的反射路径调节其功能.

心室肌层的副交感神经支配——HRP-AChE结合法的研究

于11只家兔左、右心室前壁肌层内,注射20~50%HRP生理盐水溶液10~20μl。取心房后壁、窦房结区和房室结区,冰冻或恒冷箱切片,厚25~40μm,以HRP(TMB法)-AChE结合法进行孵育。心房后壁心外膜层内,少数AChE强阳性神经节细胞胞质内含HRP与TMB反应所生成的蓝色颗粒,说明这种HRP-AChE双标细胞的突起,分布于心室前壁肌层。一般认为,AChE强阳性神经细胞是胆碱能神经元。本研究进一步证实,心室肌层有副交感神经支配,支配左、右心室前壁的副交感节后神经元,主要位于心房后壁心外膜层内。

一氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶在大鼠心内神经节细胞共存的组化研究

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶反应,结合乙酰胆碱酯酶组化技术,观察了Wistar大鼠房后壁内神经节,发现节内存在还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶反应阳性细胞;少量细胞极度深染,并在深染细胞中发现有双突起的细胞;多数轻、中度着色的细胞胞浆内有蓝色颗粒和棕色反应;节内尚存在有仅为还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶反应的阳性细胞和极少量的乙酰胆碱酯酶弱阳性细胞,以及酶反应阴性细胞.证明了心内神经节有较多的神经元有还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶与乙酰胆碱酯酶共存,提示了一氧化氮在副交感节后神经元的功能活动中起重要作用;心内神经节尚有两种酶不共存的细胞以及酶反应均为阴性的细胞,结果提示心内神经节的神经元异质性.

心壁内 P 物质免疫反应阳性神经纤维的来源

本研究用成年大鼠9只,在左心室前壁肌层内,6例注入20%～40%HRP 生理盐水溶液12～16μl,3例注射 CB-HRP 10μl。取双侧胸_(1～3)脊神经节和结状神经节,切片应用 HRP(TMB 反应)和免疫组织化学 PAP 法(第Ⅰ抗体为抗 Sp 血清)相结合方法显色。在双侧胸_(1～3)脊神经节和双侧结状神经节内,观察到3种标记细胞:HRP 阳性细胞、Sp-IR 细胞以及 HRP 阳性和P 物质阳性的双重标记细胞。脊神经节和结状神经节内的双标细胞说明,心壁内 Sp-IR 阳性神经纤维部分来源于脊神经节和结状神经节,而发起这些纤维的神经元中含有 P 物质,其功能可能与传导心脏的痛觉有关。同时也证实,心交感传入纤维的主要功能是传导痛觉。结状神经节内极少数的双标细胞,能否被认为是部分心副交感传人纤维参与心痛觉冲动的传导,尚有待进一步研究。

房室结区神经结构的组织化学研究

Wistar大白鼠20只,10例用于胆碱酯酶(AchE)组织化学反应.在房间隔内发现AchE阳性神经元,该神经元发出神经纤维延续至房室结及房室束.该结果证实房室结及房室束区副交感神经纤维来源于房间隔内的胆碱能神经元.另外10例行单磷酸硫胺素酶(TMPase)和抗氟酸性磷酸酶(FRAP)组织化学染色,观察到房室结周围区存在(TMPase)阳性神经细胞,室间隔上部近房室结区存在FRAP阳性神经细胞.该二类神经元可能系房室结区局部神经调制结构.

大鼠心内一氧化氮能神经结构的研究

以还原型尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶（NADPHd）组织化学技术系统观察了大鼠心房壁与心室壁各层、冠状动脉、主动脉与肺动脉根部、窦房结、房室结及Purkinje细胞的一氧化氮（NO）能神经构造。证实心脏各部均接受NO能神经支配，传导系与冠状动脉壁的神经纤维最为丰富；心内神经节中25.8％为NO阳性神经细胞，部分NO强阳性神经细胞突起穿过神经节进入心房肌层，终于心肌细胞表面。

大鼠心内降钙素基因相关肽免疫反应神经细胞——免疫组织化学PAP法研究

本文用石蜡切片和PAP免疫组织化学技术,对大鼠心内神经节细胞进行了观察。结果发现,在心房壁内除存在大量降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应阳性神经纤维外,尚有少数CGRP免疫反应阳性神经细胞。本文提示,心内除有外源性的CGRP免疫活性神经纤维外,也可能有内源性纤维。一般认为,CGRP是与感觉功能有关的肽类物质。因此,这种心内的CGRP免疫活性神经细胞,可能是一种感觉性神经元。

心内神经节的研究进展

近年研究表明,心内神经节不仅是副交感神经的换元处.而且含有交感神经、感觉神经和多种肽类递质。本文根据前人研究成果和本实验室工作对心内神经节的分布和形态、纤维联系、存在的递质以及心内神经节细胞分类和心内神经节在心功能调节中的作用等方面进行综述.1.心内神经节的分布和形态 心内神经节遍及整个心脏的心外膜下近心肌层处,心房多于心室.在心房又以心房后壁、房间隔和冠状沟等处多见.Steele等认为:豚鼠心内神经节主要分布在以下两个区域:(1)右心房上、下腔静脉之间的心外膜下;(2)房间隔背侧部分到左肺静脉根部之间的心外膜下.1996年,Singh等观察了成人心脏心内神经节的分布情况,发现人的心内神经节全部位于心房,其中较大的心内神经节分布在窦房结和房室结周围,较小的心内神经节存在于左心房上表面、房间隔和心耳心房交界处.

大鼠心内血管活性肠肽神经元──PAP法研究

应用PAP免疫组织化学技术对大鼠心内血管活性肠肽神经元进行了研究、结果表明：在大鼠心脏心房后壁和心传导系统中的心内神经节内，存在着血管活性肠肽免疫活性神经细胞，这些细胞多为梭形或圆形，大小中等，并对它的功能进行了讨论。

大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构

以还原型尼克酰腕腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶组织化学技术研究大鼠肺一氧化氮合酶阳性神经结构。结果表明:(1):气管、支气管树系统壁内神经节部分神经细胞为一氧化氮合酶阳性神经细胞;(2)部分强阳性神经细胞的突起穿越神经节延向管壁粘膜组织或肺组织;(3)在各级肺动、静脉及肺组织内分布有不同密度的一氧化氮合酶阳性神经纤维。

大鼠心房室结区血管活性肠肽神经的分布和定量研究

用免疫组织化学方法结合图像分析和放射免疫测定研究了大鼠心房室结(AVN)区血管活性肠肽(VIP)的分布和含量,发现房室结区不仅含有VIP神经纤维而且含有VIP神经细胞.结果提示AVN的VIP能神经可能在房室传导等心功能调节中起重要作用.

一级感觉神经元周围突分支支配多个内脏器官的研究——荧光素逆行双标及三标法

将大鼠颈、胸、腹、盆腔多个脏器配对:食管-甲状腺、食管-气管、心-胃、肺-胃、左肾-脾、膀胱-直肠、膀胱-子宫、子宫-直肠。在配对脏器中先后注入碘化丙啶(PI)或快蓝(FB)及双苯甲亚胺(Bb)或核黄(NY),于迷走神经上、下节及相应背根神经节内出现PI与Bb(或FB与NY)的双标细胞。另设膀胱-子宫-直肠组,分别注入PI、FB及NY,在L_(1～2)背根节出现极少量PI、FB与NY三标细胞。结果提示,大鼠体内普遍存在内脏-内脏感觉在同一感觉细胞的汇聚。

交感神经化学切除后大鼠心窦房结区神经递质的变化

，王健本用６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）化学切除大鼠心内交感神经后，用免疫组织化学结合图像分析法和放免测定观察窦房结（ＳＡＮ）区神经肽Ｙ（ＮＰＹ）及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化；同时应用组织化学方法结合图像分析、生物化学测定观察了ＳＡＮ区去甲肾上腺素（ＮＡ）及乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）的变化。实验发现，静脉注射６－ＯＨＤＡ５０ｍｇ／ｋｇ一周后，ＳＡＮ区ＮＡ及ＮＰＹ含量明显减少，ＡＣｈＥ活性显著增加，ＣＧＲＰ含量增加不明显。

背根神经节降钙素基因相关肽阳性神经元周围突分支支配心和胃的研究——荧光素双标记与PAP结合法

本研究将propedium iodide(PI)和bisbenzimide(Bb)分别注入大鼠心室前壁及胃小弯部,于C_4～T_(12)背根神经节发现PI标记细胞,在T_4～L_1背根神经节见Bb标记细胞,T_6～T_(11)背根神经节内见PI与Bb双标细胞。提示背根神经节部分细胞的周围突分支投射到内脏-内脏。免疫组织化学PAP法发现,部分PI、Bb双标细胞是降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应阳性。本文并对内脏-内脏感觉汇聚于同一初级感觉神经元的意义进行了讨论。

大鼠心脏壁内双向投射神经元的研究

本文用CB-HRP及荧光素逆行标记法,研究了大白鼠心壁内神经元向星状神经节及心室壁的双分支投射。将CB-HRP注入20只大白鼠右侧星状神经节,心壁内神经节中可见CB-HRP标记细胞,且多位于大血管根部和心房后壁,细胞形态和大小不尽相同。将荧光素Bb和PI混悬液分别注入30只大白鼠的右侧星状神经节及心室壁,在心房后壁首次发现有PI-Bb双标记细胞。说明心壁内有的神经元可发出两个长突起,分别投射到星状神经节和心室壁。这种神经元可能是感觉性的,并可能参与构成心脏植物神经外周反射环路。

周围突分支至肺与体表的降钙素基因相关肽免疫反应阳性感觉神经元

将碘化丙啶(PI)注入大鼠肺内,双苯甲亚胺(Bb)注入右侧2～6肋间神经或/和双侧外耳皮肤。于双侧C_1～T_(11)背根神经节、迷走神经上、下节发现PI标记细胞;右侧T_(1～8)背根节、双侧迷走神经上、下节发现Bb标记细胞;PI/Bb双标细胞见于右侧T_(1～8)背根节及迷走神经上、下节。同一切片用PAP方法证实,部分PI/Bb双标细胞为降钙素基因相关肽免疫反应阳性。

迷走神经切断后大鼠心房室结区神经肽变化的研究

切断大鼠颈部一侧迷走神经后，用组织化学方法结合图像分析定量观察了心房室结（ＡＶＮ）区乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）、神经肽Ｙ（ＮＰＹ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化，同时用生物化学法测定了ＡＶＮ区ＡＣｈＥ、去甲肾上腺素（ＮＡ）的含量。并用逐步回归分析了各递质间的相互关系。本实验发现：ＡＶＮ区有ＮＰＹ、ＶＩＰ、ＣＧＲＰ免疫反应神经纤维和神经细胞。图像分析表明，左侧或右侧迷走神经切断５ｄ后ＡＶＮ区ＮＰＹ和ＶＩＰ明显减少，而ＣＧＲＰ变化不显著，图像分析和生物化学测定同时表明单侧迷走神经切断未引起ＡＶＮ区ＡＣｈＥ含量显著变化。逐步回归分析结果表明：ＮＰＹ对ＶＩＰ和ＣＧＲＰ的变化有重要的影响。本文结果提示：１．ＡＶＮ区存在多种内源性神经肽，可能在房室传导中起调制作用；２．单侧迷走神经切断可引起房室结区多种神经肽的变化；３．在ＡＶＮ区多种递质的变化中ＮＰＹ有着特别重要的意义。本实验表明心脏功能的调节是多因素的，神经肽在其中起重要作用。

大鼠心瓣膜神经支配

本文通过对32只大鼠心瓣膜进行胆碱酯酶组织化学法、乙醛酸诱发荧光法及P物质免疫组化方法的观察,获得心瓣膜胆碱能、肾上腺素能及肽能(SP)神经支配全貌。P物质免疫反应阳性神经纤维在房室瓣自瓣膜基部向下及自腱索向上进入瓣膜;在动脉瓣自附着缘进入瓣膜。该纤维的性质及走向提示SP免疫反应阳性神经纤维可能是感受血流动力学变化的传入神经。

心房内分泌肌细胞的分泌方式及其与神经、毛细血管关系的超微结构研究

本研究用透射电镜观察心房内分泌肌细胞在心脏不同容量负荷时的超微结构变化,以及其周围的神经、毛细血管的分布及类型。禁水或不禁水大鼠,在经股静脉注入生理盐水(20ml/kg体重)30～120秒内取右心耳。用鞣酸、戊二醛、锇酸法和戊二醛、锇酸法固定,观察到肌细胞特殊颗粒界膜与肌膜融合、开口和释放的全过程。有不同种类的神经终末存在于肌细胞旁。毛细血管为连续内皮型,与肌细胞关系密切。本实验结果提示,心房内分泌肌细胞主要以胞吐方式分泌心房利尿因子,并为心房利尿因子的转运及与神经支配的生理、生物化学研究提供了形态学资料。

交感神经损毁后大鼠心窦房结区神经递质与心电图变化的研究

为了探讨神经肽对心功能的调节，用６－羟多巴胺化学损毁大鼠心脏交感神经纤维后，观察了动物心电图的变化，而后用免疫组织化学法结合图像分析、放射免疫测定观测了窦房结区神经肽Ｙ（ＮＰＹ）及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化；同时应用组织化学法结合图像分析、生化测定观测了窦房结区去甲肾上腺素（ＮＡ）及乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）的变化。结果发现，静脉注射６－羟多巴胺５０ｍｇ／ｋｇ体重１周后，引起大多数动物心电图的明显改变：心率减慢，Ｐ－Ｒ间期及Ｑ－Ｔ间期延长。心脏窦房结区ＮＡ及ＮＰＹ含量明显减少，而ＡＣｈＥ活性显著增加、ＣＧＲＰ含量增加不明显。结果提示心脏交感神经纤维损毁后大鼠心电图的变化可能与心内多种神经递质的相互作用有关，神经肽在其中可能具有重要的调节作用。