银离子对细菌整合子捕获耐药性基因盒频率的抑制作用

目的讨论银离子对大肠埃希菌BL21(DE3)宿主中第一类整合子整合频率的影响。方法将pUCINT及pACINAD两种重组质粒依次转化大肠埃希菌BL21(DE3),命名为HS2。实验组分别使用含0.3μg/ml、0.6μg/ml和0.8μg/ml银离子LB液体培养基,对照组使用普通LB液体培养基,银离子通过硝酸银提供,培养条件为37℃培养24 h。菌株培养完成后均用实时聚合酶链反应(qPCR)测定发生重组反应的整合子拷贝数和总的整合子拷贝数,二者比值即为整合频率。同时通过3次独立表型筛选法分析整合频率变化并利用质谱分析菌株蛋白质表达情况。结果qPCR测定的对照组HS2菌株的整合频率为1.79×10^(-5)(1.44×10^(-5),3.13×10^(-5)),实验组中0.3μg/ml银离子组整合频率为2.07×10^(-5)(1.49×10^(-5),2.67×10^(-5)),0.6μg/ml银离子组为2.25×10^(-6)(1.47×10^(-6),4.54×10^(-6)),0.8μg/ml银离子组为1.69×10^(-6)(0.22×10^(-6),3.08×10^(-6))。实验组中0.6μg/ml银离子组与0.8μg/ml银离子组整合频率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),但0.3μg/ml银离子组整合频率与对照组比较差异无统计学意义。3次独立表型筛选法测定结果与qPCR结果一致且质谱分析得出经银离子作用的菌株蛋白质表达存在差异。结论一定浓度的银离子对细菌整合子捕获耐药性基因盒频率存在抑制作用。

血浆游离线粒体DNA拷贝数与烧伤患者病情的相关性

目的探讨不同程度烧伤患者血浆游离线粒体DNA(mtDNA)拷贝数变化及在烧伤病情中的作用。方法根据患者烧伤程度、面积(TBSA)选取重度烧伤患者30例(重度烧伤组)及中度烧伤患者30例(中度烧伤组),纳入同期30名健康体检者(正常对照组)。采集所有参试者入院第1、8~11、18~21天的血浆标本。所有血浆标本经试剂盒提取DNA,通过实时荧光定量PCR法检测血浆游离mtDNA拷贝数。分析mtDNA拷贝数与急性生理学和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)、多器官功能障碍综合征评分(MODS)、TBSA、Ⅲ°烧伤面积、烧伤指数及生化指标间相关性,并将上述指标进行Logistic回归分析。结果重度烧伤组入院第1天血浆游离mtDNA拷贝数高于中度烧伤组和正常对照组,重度烧伤组血浆游离mtDNA拷贝数在第8~11天到达峰值之后降低;mtDNA拷贝数与烧伤总面积、Ⅲ°烧伤面积、烧伤指数、APACHEⅡ评分、MODS呈正相关(P<0.05),与生化指标天冬氨酸氨基转移酶、谷丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、降钙素原、白细胞呈正相关(P<0.01),与总蛋白、白蛋白及前白蛋白呈负相关(P<0.01);经Logistic回归分析显示,患者APACHEⅡ评分和住院当天mtDNA拷贝数为烧伤严重程度的独立危险因素(P<0.05);mtDNA拷贝数在诊断烧伤程度的ROC曲线下面积为0.904,敏感度为0.833,特异性为0.867。结论烧伤患者血浆游离mtDNA拷贝数与烧伤程度和多项生化指标具有相关性,为临床判断烧伤程度提供依据。