羊λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

λ干扰素作为一种多效性细胞因子属于Ⅲ型干扰素,研究表明其能够对Ⅰ型和Ⅱ型干扰素逃逸的病毒起作用。为了利用家蚕杆状病毒表达系统高效表达出具有高抗病毒活性的羊λ3干扰素(OvIFN-λ3),首先将OvIFN-λ3基因优化后合成,将其克隆至转移载体pVL1393中,得到重组质粒pVL1393-OvIFNλ3,再将重组质粒与失活拯救型家蚕杆状病毒穿梭载体reBmBac DNA共转染家蚕卵巢传代细胞Bm-N,得到含OvIFN-λ3基因的重组杆状病毒。随后利用重组杆状病毒感染五龄起蚕,待其发病后收集蚕血淋巴。采用微量细胞病变抑制法在羊肾细胞上进行重组表达绿色荧光蛋白的水疱型口炎病毒(recombinant vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP)的攻毒实验,测定OvIFN-λ3抗病毒活性可达(6.5±0.27)×10^5 U/mL;利用空斑筛选法筛选重组病毒,感染家蚕后,测定其效价最高可达(3.1±0.42)×10^6 U/mL,表达量明显提高。家蚕杆状病毒表达系统为羊λ3干扰素产品的大量生产应用提供了新方法。

鸭α干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性检测

鸭α干扰素(DuIFN-α)是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤等生物学活性的细胞因子,可用于鸭及其他家禽养殖业中各种病毒性疾病的预防和治疗。将编码鸭α干扰素的基因序列密码子优化后进行合成,再对翻译起始序列进行优化,然后将2条序列分别克隆到杆状病毒转移载体上得到pVL1393-DuIFN-α和pVL1393-DuIFN-αm,与缺失orf1629的杆状病毒reBmBac共转染家蚕卵巢细胞系,获得携带目的片段的重组病毒reBmBac-DuIFN-α和reBmBac-DuIFN-αm。用重组病毒感染5龄起蚕后从血淋巴中获得表达产物,在鸡胚细胞中采用微量细胞病变抑制法检测表达产物对VSV?GFP病毒的抑制效果。结果显示,重组DuIFN-α产物的效价可达813×10^5U/mL,重组DuIFN-αm的效价可达307×10^5U/mL;重组病毒reBmBac-DuIFN-α经筛选纯化后,表达量提高,最高效价可达(190±025)×10^6U/mL。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统表达生产高抗病毒活性的重组鸭α干扰素奠定了基础。