基于血管新生途径探讨银杏蜜环口服溶液对光化学诱导血栓形成致小鼠脑梗死模型皮质损伤的影响

目的 观察银杏蜜环口服溶液(Yinxing Mihuan oral solution,YM)对光化学诱导血栓形成致小鼠脑梗死(photothrombotic stroke,PTs)模型大脑皮质缺血性损伤的影响,同时探讨其在缺血后血管新生方面的作用机制。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,金纳多组(12.5 mg/kg),YM低、高剂量组(412 mg/kg,824 mg/kg),每组10只。采用光化学诱导血栓形成法建立小鼠脑梗死模型,术后连续灌胃给药14 d。观察各组动物体质量、神经功能缺损评分变化;激光散斑成像观察各组动物脑血流灌注量;免疫组化法检测皮质缺血灶周围区脑组织CD31、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测小鼠缺血灶周围区脑组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α及血管生长素(angiogenin,ANG)m RNA表达。结果 PTs模型成功建立。与模型组比较,YM高剂量组小鼠神经功能缺损评分明显下降(P<0.05),脑血流变化率明显减少(灌注量明显升高,P<0.05),VEGF、HIF-1α及ANG m RNA表达明显上调(P<0.05);低剂量组CD31蛋白表达、高剂量组v WF蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论 YM可改善PTs模型小鼠神经功能缺损,其作用机制可能与促进缺血后的微血管新生,从而增加皮质缺血区域脑血流灌注相关。

银杏蜜环口服溶液对多发性脑梗死大鼠模型的影响

目的:银杏蜜环口服溶液是由银杏叶和蜜环菌组合而成的上市药物,临床用于缺血性心脑血管疾病,本研究探讨该药对大鼠多发性脑梗死(Multiple Cerebral Infacrtion,MCI)模型的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组,模型组,金纳多组(18 mg/kg),银杏叶提取物组(9 mg/kg),天麻蜜环菌素片组(600 mg/kg),天麻蜜环菌粉组(300 mg/kg),银杏蜜环口服溶液组(618 mg/kg),银杏蜜环口服溶液组(309 mg/kg)。从大鼠颈总动脉向大脑中动脉方向注射荧光微球混悬血清,致使大脑动脉多发性阻塞,造成大鼠多发性脑梗死模型。灌胃给药28 d,末次给药后观察药物对大鼠神经功能评分、抓力、血清TNF-α、脑内氨基酸类神经递质及脑组织形态学的影响。结果:MCI模型大鼠神经功能有显著障碍,抓力显著降低,脑组织内谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)水平显著升高,血清TNF-α水平升高,与假手术组大鼠比较,差异有统计学意义(P<0.05)。组织学检查显示,脑组织受损,有明显的梗死灶,神经细胞排列紊乱,炎性细胞浸润等病理改变,免疫组化显示CD34、GFAP有自修复的表达,Neu N低表达。给药28 d后,银杏蜜环口服溶液神经功能明显改善,抓力增加,脑内Glu和GABA显著降低,血清TNF-α水平显著下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05~0.01);病理结果显示,银杏蜜环口服溶液可保护脑缺血,改善由此导致的神经缺损程度;免疫组化结果显示,银杏蜜环口服溶液可明显促进血管内皮细胞、胶质细胞及神经元修复。银杏蜜环口服溶液对神经功能的改善和脑内Glu、GABA水平的降低作用显著优于银杏叶提取物;增加抓力作用显著优于天麻蜜环菌;降低血清TNF-α水平程度则同时优于两者。结论:银杏蜜环口服溶液有保护脑缺血,改善神经功能的作用,复方优于单一组份,且有一定的协同增效的作用。

银杏蜜环口服溶液减轻脑缺血再灌注大鼠脑梗死的实验研究

目的:评估银杏蜜环口服溶液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织的保护作用,从神经功能评分、脑梗死范围及抗氧化能力探讨银杏蜜环口服溶液保护受损脑组织的药效。方法:首先建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、金纳多组,银杏叶提取物组,天麻蜜环菌素片组,天麻蜜环菌粉组,银杏蜜环口服溶液618 mg/kg组,银杏蜜环口服溶液309 mg/kg组共8组。除假手术组只分离血管不进行缺血外,其他组大鼠均以线栓阻塞大脑中动脉,1.5 h后再灌注,造成缺血再灌注损伤模型。缺血同时经十二指肠给予各受试药物,假手术和模型组按3 m L/kg体积给予生理盐水。于6 h、24 h进行神经功能评分,末次神经行为评分后取血检测血清中SOD、MDA、GSH-Px水平;取脑后TTC染色,计算脑梗死范围。结果:与模型组比较,银杏蜜环口服溶液组大鼠脑梗死范围显著缩小;大鼠24 h神经功能评分提高;血清SOD及GSH-Px活力增强,MDA水平降低,且优于银杏叶提取物组和天麻蜜环菌组。结论 :银杏蜜环口服溶液可减小缺血再灌注大鼠脑梗死范围,减轻神经功能损伤,其抗氧化作用有可能起到神经保护的作用。

银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和SH-SY5Y细胞炎性损伤的保护作用与机制

目的:探讨银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y损伤的保护机制,以及其对e NOs介导的Beclin-1依赖的自噬通路的影响。方法:本研究采用缺氧缺糖再灌注诱导大鼠脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y构建糖氧剥离+复糖复氧模型,同时给予不同浓度的银杏蜜环口服溶液(5.15 mg/m L、2.575 mg/m L和1.545 mg/m L)及有效组分进行干预,通过观察细胞培养上清炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6的浓度和自噬通路的活化,并采用PI/Annexin V双染色分析细胞凋亡率,探讨银杏蜜环有效成份的脑保护机制。结果:银杏蜜环口服溶液5.15 mg/m L、2.575 mg/m L和1.545 mg/m L3个剂量组均可抑制脑微血管内皮细胞上清液TNF-α、IL-1β和IL-6含量,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L和1.545 mg/m L可抑制Caspase3、LC3II和Beclin-1表达。同时,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L明显促进e NOs的磷酸化。其中对L-1β和IL-6的作用明显优于银杏叶提取物和天麻蜜环菌。银杏蜜环口服溶液2.575 mg/m L和1.545 mg/m L还可降低SH-SY5Y细胞的凋亡率(Annexin V+/PI-细胞),差异有统计学意义。结论:银杏蜜环口服溶液可通过促进一氧化氮合酶e NOs的磷酸化来抑制缺糖缺氧再灌引发的细胞凋亡和自噬。

清热解毒中药有效组分配伍对内毒素致大鼠感染性脑水肿的保护作用

目的:探讨清热解毒中药黄芩、栀子等有效组分配伍而成的注射液(TLQN注射液)对内毒素(LPS)所致大鼠感染性脑水肿的脑保护作用及其可能机制。方法:70只SD大鼠随机分为正常组、模型组、清开灵组(3 mL/kg)、地塞米松组(10 mg/kg)、TLQN注射液低、中、高剂量组(24、47.5、95 mg/kg)。经颈内动脉注射LPS(1 mg/kg)建立感染性脑损伤模型,各给药组在注入LPS后立即尾静脉注射相应药物。造模前以及造模6h后各测量一次体温。取各组脑组织标本,干湿法测定脑组织含水量,甲酰胺法检测脑组织伊文思蓝(EB)水平,HE染色后观察各组脑组织病理形态变化,酶联免疫法(ELISA)检测各组血清TNF-α、IL-6含量。结果:模型组体温、脑组织含水量和EB含量明显高于正常组(P<0.01),皮质及海马区存在广泛的神经元、胶质细胞损伤,血清TNF-α及IL-6水平显著升高(P<0.01);TLQN注射液可明显降低模型大鼠体温(P<0.05),减少脑组织含水量及EB含量(P<0.05,0.01),改善脑组织神经元、胶质细胞损伤,显著降低血清TNF-α和IL-6水平(P<0.05)。结论:清热解毒中药有效组分配伍对LPS致大鼠感染性脑损伤有保护作用,其机制可能与抑制TNF-α和IL-6等细胞因子过度产生有关。

灵芪加口服液对心脾两虚小鼠益气宁心安神功效研究

目的:通过观察灵芪加口服液对心脾两虚小鼠体质量和行为学等指标的影响,评价灵芪加口服液益气宁心安神功效。方法:小鼠每日负重游泳法复合药物诱导建立小鼠心脾两虚证候模型,并检测其体质量、摄食量、肠推进,以及悬尾和游泳不动时间、睡眠行为学实验及脑神经递质含量测定。结果:小鼠每日负重游泳法复合药物诱导形成心脾两虚证候模型,模型组小鼠体质量下降,摄食减少,游泳不动时间和悬尾不动时间延长,肠推进亢进,入睡时间、苏醒时间明显缩短,脑神经递质含量减少;灵芪加口服液可明显改善以上实验指标。结论:灵芪加口服液改善心脾两虚所致失眠的药效学作用可能与其益气、宁心安神之功效密切相关,同时脑神经递质的改变可能是其发挥益气宁心安神功效的物质基础。

结扎颈总动脉复合低氧致C 57 BL/6小鼠缺血缺氧性脑病模型的建立及溶栓胶囊的作用

目的:通过结扎颈总动脉复合低氧建立C 57 BL/6小鼠缺血缺氧性脑病(HIE)的模型,并观察溶栓胶囊的作用。方法:C 57 BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、溶栓胶囊大、中、小剂量组(400、200、100 mg生药/kg)。采用左侧颈总动脉结扎并通入氧气和氮气(8∶92)15 min的方法,建立C 57 BL/6小鼠缺血缺氧性脑病模型。在缺血缺氧损伤24 h后开始灌胃给药,1次/d,连续给药4周。4周后观察模型小鼠肌力、学习记忆能力的改变以及脑组织病理形态学变化以及NSE、MAP-2和Caspase-3的表达。结果 :手术后4周,缺血缺氧性脑病C 57 BL/6小鼠肌力和学习记忆能力显著下降,NSE和MAP-2低表达,Caspase-3高表达,病理学检查可见神经元细胞排列紊乱,大量变性、坏死及凋亡细胞,另见大片软化灶,血管扩张充血,多量炎性反应细胞浸润。溶栓胶囊对上述指标有明显改善作用。结论:通过结扎颈总动脉合并低氧成功建立了C 57 BL/6小鼠缺血缺氧性脑病模型,溶栓胶囊可改善模型小鼠肌力、学习记忆下降等症状,减轻脑组织病理性损伤,其机制可能与其神经保护作用有关。

解毒通络胶囊对中风后抑郁大鼠模型益气解郁功效研究

目的:观察解毒通络胶囊对中风后抑郁大鼠行为学的影响,评价解毒通络胶囊益气解郁的功效。方法:大鼠麻醉后采用颈外动脉注射微球法制备多发性梗死模型,中长期饲养造成中风后抑郁模型,对各组大鼠进行旷场实验、悬尾实验、游泳实验不动时间测定、糖水偏好实验等行为学实验。结果:大鼠注射荧光微球后长期饲养形成中风后抑郁模型,与正常组相比,模型组大鼠进食量减少,体质量增加较缓,旷场实验所示的自发运动和探究活动减少,游泳不动时间、悬尾不动时间延长,糖水偏好程度下降。与模型组相比,解毒通络胶囊组及步长脑心通组大鼠体质量增幅较大,旷场实验所示的自发运动和探究活动增加,游泳不动时间和悬尾不动时间均缩短,糖水偏好程度增加,并接近假手术组。结论:解毒通络胶囊对中风后抑郁大鼠的抑郁样行为有显著改善作用。

溶栓胶囊对脑缺血缺氧耐受和脑储备能力影响的实验研究

目的:观察具有活血化瘀功效的溶栓胶囊对脑缺血缺氧耐受和脑储备能力影响。方法:采用左侧颈总动脉结扎并通入氧气和氮气(8?92)15 min的方法建立C57 BL/6小鼠急性脑缺血缺氧模型,造模后10 min十二指肠给药,给予不同剂量的溶栓胶囊(100、200、400 mg·kg-1)或生理盐水,评价局部脑血流量变化以及24 h后的神经行为学改变。SD大鼠给予不同剂量的溶栓胶囊(75、150、300 mg·kg-1)或生理盐水,观察溶栓胶囊对高分子右旋糖苷诱导的大鼠微循环障碍的改善作用。结果:与假手术组比较,模型组小鼠脑血流量明显下降,脑缺血范围增加,脑缺氧后行为学评分明显升高(P<0.05或P<0.01);同时,模型组大鼠在注射高分子右旋糖苷后软脑膜血管出现微循环障碍,10、20、30 min 3个时间点大鼠软脑膜微循环血液流速明显减慢。与模型组比较,溶栓胶囊(400 mg·kg-1)可以明显增加小鼠局部脑血流量,改善行为学障碍,减小脑缺血范围(P<0.05或P<0.01);溶栓胶囊还可改善高分子右旋糖苷诱导的大鼠软脑膜微血管不同时间点血液流速和流态(P<0.05或P<0.01)。结论:溶栓胶囊可通过增加脑缺血缺氧耐受和脑储备能力而达到保护缺血缺氧神经组织的作用,促进神经功能的恢复。

通络清脑注射粉针对脑缺血-再灌注损伤大鼠的脑保护作用及神经元自噬相关蛋白表达的影响研究

背景细胞自噬所致神经元凋亡是脑缺血后神经损伤的重要环节,而以通络清脑注射粉针为代表的清热解毒通络疗法在只辨病、不辨证的情况下治疗大鼠脑缺血亦能取得良好疗效,因此推测通络清脑注射粉针发挥脑保护作用的机制很可能与抑制细胞自噬有关。目的探讨通络清脑注射粉针对脑缺血-再灌注损伤大鼠的脑保护作用及神经元自噬相关蛋白表达的影响。方法本实验于2019年1月—2020年3月实施,共选取SPF级成年雄性SD大鼠36只,编号后采用随机数字表法分为假手术组、模型组、通络清脑组,每组12只。采用线栓法制备大鼠脑缺血-再灌注损伤模型(假手术组大鼠只进行血管分离、不进行其他操作),通络清脑组大鼠经尾静脉缓慢推注浓度为18.75 mg/ml的通络清脑溶液3.2 ml/kg,假手术组、模型组大鼠经尾静脉注射等体积0.9%氯化钠溶液。比较三组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比及再灌注24 h后海马区神经元损伤情况、海马区和皮质区自噬体形成情况、海马区神经元自噬相关蛋白〔包括磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)、Beclin1、自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)〕表达情况。结果模型组、通络清脑组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比高于假手术组,而通络清脑组大鼠建模24 h后神经功能学评分、脑梗死体积占比低于模型组(P<0.05)。再灌注24 h后假手术组大鼠海马区神经元未见明显坏死、海马区和皮质区均偶见自噬体,模型组大鼠海马区缺血区神经元结构破坏严重、大量神经元丢失且海马区和皮质区均可见双层膜结构自噬体,通络清脑组大鼠海马区缺血区神经元坏死范围较模型组缩小、神经元损伤明显缓解且海马区和皮质区自噬体数量均减少。再灌注24 h后模型组、通络清脑组大鼠海马区p-NF-κB、LC3相对表达量及模型组Beclin1相对表达量高于假手术组,而通络清脑组大鼠海马区p-NF-κB、Beclin1、LC3相对表达量低于模型组(P<0.01)。结论通络清脑注射粉针可有效改善脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能,减轻脑梗死程度、神经元损伤,减少自噬体形成及神经元凋亡,抑制神经元自噬相关蛋白p-NF-κB、Beclin1、LC3的表达,其发挥脑保护作用的机制可能与抑制神经元过度自噬有关。

复方中药塞络通对多发性脑梗死小鼠神经发生与神经修复作用及对Notch1/TLR4信号通路的调节机制

目的初步探讨复方中药塞络通(SLT)对多发性脑梗死损伤小鼠的神经修复作用及其可能的作用机制。方法C57/B16小鼠随机分为假手术组、脑梗死模型组、阳性药丁苯酞(78 mg·kg^(-1))组、SLT(11,22和44)mg·kg^(-1)组,除假手术组外,其他每组小鼠建立微球致多发性脑梗死模型。按相应剂量灌胃给药7 d,同时ip给予Brdu(50 mg·kg^(-1))7 d,每天对小鼠进行称重和神经功能缺陷评分,7 d后检测各组小鼠抓力,激光散斑多普勒法测定梗死半脑脑血流量,HE染色观察脑组织病理变化,免疫荧光单标及双标染色检测脑组织中NeuroD1,Brdu/DCX和Brdu/PAX6表达情况,ELISA法检测患侧大脑皮质组织BDNF和bFGF含量以及血清CXCL2,IL^(-1)7A和MCP-1含量。采用Western印迹法和qRT-PCR法测定患侧海马组织Notch1、中白细胞介素-1β(IL^(-1)β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子-88(MYD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)的蛋白和mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠神经行为评分升高,体重减轻,抓力降低,脑血流量降低,HE染色观察脑组织病变区域可见明显的神经细胞无序排列、坏死、肿胀及凋亡。海马齿状回区NeuroD1阳性细胞数增加,Brdu+/DCX+和Brdu+/PAX6+细胞数量增加。大脑皮质BDNF和bFgF含量减少,血清CXCL2,IL17A和MCP-1含量升高,海马组织Notch1,IL^(-1)β,TNF-α,TLR4,MYD88和NF-κB p65的蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,各给药组小鼠神经功能缺陷评分降低,体重升高,抓力升高,脑血流量有所恢复,脑组织病变区域的细胞无序状态、坏死、肿胀及凋亡现象减轻。海马齿状回区NeuroD1阳性细胞数进一步增加,Brdu+/DCX+、Brdu+/PAX6+细胞数量进一步增加。大脑皮质BDNF和bFgF含量增加,血清CXCL2,IL^(-1)7A和MCP-1含量降低,海马组织Notch1,IL^(-1)β,TNF-α,TLR4,MYD88和NF-κB p65的蛋白和mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论塞络通能明显改善多发性脑梗死小鼠神经功能与病理形态,其机制可能是通过抑制Notch1/TLR4信号通路,从而发挥促神经发生与神经修复作用。

通咽喷雾剂对短暂性大脑中动脉栓塞模型大鼠吞咽功能的干预效应

目的 观察通咽喷雾剂(TYSpray)对短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型大鼠吞咽功能的影响。方法 将大鼠随机分为Sham组、tMCAO组、tMCAO+TYSpray组。tMCAO组采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,于90min后再灌注,以建立tMCAO大鼠模型。tMCAO+TYSpray组大鼠在造模后给予通咽喷雾剂口咽部喷雾用药,Sham组、模型组给予等量生理盐水。观察大鼠一般营养状况并记录死亡数;于7d、14d时,记录大鼠体重及进食水量;于14d时,观测大鼠吞咽潜伏期及吞咽次数。结果 tMCAO组大鼠除表现为吞咽潜伏期延长和吞咽次数减少等吞咽直接指标的异常,还表现为毛发干枯少泽、活动度减低、体型瘦弱、精神状态不佳、死亡率高、体重下降和体重增量/体重比值下降、进食量减少、进水量减少和进水量/体重比值下降等吞咽间接指标的异常。tMCAO+TYSpray组大鼠未见吞咽潜伏期延长和吞咽次数减少,而表现为吞咽次数明显增加,在进食量/体重比值方面虽与tMCAO组大鼠相比差异无统计学意义,但表现出一定的改善趋势,在14d时的进水量/体重比值与tMCAO组大鼠相比明显增加。结论 通咽喷雾剂可有效改善tMCAO组大鼠的吞咽功能,在改善进食水方面亦显示出较好的改善趋势。

脑梗死气虚血瘀证大鼠模型表征及病理生理变化研究

观察多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型表征及病理生理指标的变化。将大鼠随机分为4组（每组30只）：正常组、假手术组、模型组、益气活血方组。模型组和益气活血方组大鼠均采用水环境小平台法进行睡眠剥夺1周后行多发性脑梗死手术，术后继续睡眠剥夺4周；同时益气活血方组大鼠术后每天灌胃给药26g·kg^-1，连续4周。于术后48h,2周及4周每组随机选取lO只大鼠，检测反映大鼠表征及病理生理动态变化的指标。结果显示，正常组和假手术组大鼠一般状况良好，行为和脑组织形态结构正常，模型组大鼠毛发枯黄，精神萎靡，静卧懒动，便溏，行为出现障碍，脑组织形态结构出现明显的病理性改变，且随造模时间的延长情况愈加严重，益气活血方组大鼠一般状态、行为障碍及脑组织形态结构病变程度均较模型组明显减轻；模型组3个时间点体质量、负重力竭游泳时间、舌面图像色彩饱和度R，G，B值均减少，切变率5，60，150S^-1下的全血黏度均增加，脑皮层Na＋-K＋．ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性均降低，5-HT含量减少，血清TXB：含量增加，6-keto-PGFl。含量减少，与假手术组比较均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）；益气活血方组大鼠术后2周、4周上述指标的变化较模型组有明显改善（P〈0．05或P〈0．01）。以上结果表明，多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠表征及病理生理指标变化明显异常，益气活血方对其有明显改善作用，说明该模型具有较好的稳定性和可靠性，模型演化的病理生理机制及生物学基础可能与能量代谢障碍、血管活性物质异常及神经递质变化等有关。

塞络通胶囊对大鼠多发性脑梗死恢复期Glu和GABA合成以及NMDA受体亚型表达的影响

观察塞络通胶囊(塞络通)对大鼠多发性脑梗死恢复期脑组织中神经递质谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量以及NMDA受体亚型NR1、NR2A和NR2B表达的影响,阐述塞络通在脑缺血后恢复期对脑组织保护的作用机制。通过大鼠颈内动脉注射微球血管栓塞剂的方法建立多发性脑梗死大鼠模型,在脑梗死后10天采用不同剂量的塞络通(16.5及33.0 mg.kg 1)连续干预60天。采用透射电子显微镜观察脑组织超微病理结构改变,高效液相色谱法检测脑组织Glu和GABA含量,免疫组织化学方法分析脑组织NMDA受体NR1、NR2A和NR2B亚型表达的变化。结果表明,与假手术组相比,模型组恢复期脑组织不仅存在神经元、神经胶质细胞和突触超微结构异常改变,而且神经递质Glu和GABA合成显著减少,同时NMDA受体NR1、NR2A和NR2B亚型表达明显升高;塞络通能够改善脑组织超微结构,明显促进神经元Glu和GABA合成,同时下调NMDA受体NR1、NR2A和NR2B亚型表达。以上结果提示,塞络通在大鼠多发性脑梗死恢复期通过促进Glu和GABA神经递质合成以及抑制NMDA受体表达而产生一定程度的神经保护作用。

塞络通胶囊对多发梗死性痴呆大鼠认知功能障碍的干预作用

目的:研究塞络通胶囊(塞络通)对多发梗死性痴呆(multi-infarct dementia,MID)大鼠学习记忆功能的改善作用及其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组以及塞络通高、低剂量组。采用SD大鼠颈内动脉注射微球血管栓塞剂的方法建立多发梗死性痴呆模型;手术成功后第10天,大鼠分别灌胃给予蒸馏水、盐酸美金刚(20 mg.kg-1)以及高、低剂量的塞络通(16.5,33.0 mg.kg-1),每日1次,连续60 d;检测塞络通不同剂量对模型大鼠Morris水迷宫潜伏期、路径长度,以及脑组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。结果:与假手术组比较,多发梗死性痴呆大鼠在Morris水迷宫实验中的潜伏期及路径长度均明显延长(P<0.05或P<0.01),脑组织ChAT活性明显降低(P<0.05);塞络通干预60 d后明显缩短模型大鼠在Morris水迷宫实验中的潜伏期及路径长度(P<0.05或P<0.01);并且明显降低脑组织AchE活性而升高ChAT活性(P<0.05或P<0.01)。结论:塞络通对多发梗死性痴呆大鼠认知功能障碍具有一定程度的改善作用,作用机制可能与其对脑组织ChAT活性以及AchE活性不同的调节相关。

通络清脑注射液对大鼠脑缺血再灌注致脑水肿的影响

目的:探讨清热解毒活血中药有效组分配伍通络清脑(TLQN)注射液对大鼠脑缺血再灌注所致脑水肿的影响及其可能的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.4mg/kg),通络清脑注射液低、中、高剂量组(24、48、95mg/kg),每组10只。线栓法建立大鼠脑缺血模型,1.5h后再灌注,同时经大鼠尾静脉注射相应药物。缺血后24h处死大鼠,取各组脑组织标本及血清,干湿重法检测脑组织含水量,HE染色后观察皮层、海马病理形态变化,免疫组化法分析皮层及海马AQP-4蛋白表达,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6含量。结果:通络清脑注射液高剂量组可显著降低模型大鼠脑指数与脑组织含水量(P<0.01,P<0.05),各剂量组均可不同程度改善缺血再灌注损伤所致的病理形态变化,高剂量组可显著下调模型大鼠皮层、海马AQP-4蛋白表达(P<0.05,P<0.01),各剂量组均可显著降低血清TNF-α含量(P<0.01),中、高剂量组可显著降低血清IL-6含量(P<0.05)。结论:通络清脑注射液具有减轻和改善脑缺血再灌注损伤后脑水肿的作用,其机制可能是通过抑制TNF-α、IL-6的释放,减轻脑内炎症免疫反应,从而抑制脑组织中AQP-4的表达,降低血脑屏障的通透性,对神经功能起到保护作用。

塞络通胶囊在络脉瘀阻证脑梗死大鼠缺血时间窗外给药的保护作用

目的:建立大鼠络脉瘀阻证脑梗死模型,观察并探讨塞络通胶囊在缺血时间窗外给药的疗效。方法:采用SD大鼠颈内动脉注射微球血管栓塞剂的方法建立络脉瘀阻证脑梗死模型,在脑梗死时间窗外(脑梗死后第10天)给予塞络通胶囊不同剂量进行干预,每日1次,连续60d,观察大鼠血液流变性、脑组织病理形态和TNF-α含量等指标的变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠在切变率60/s、5/s下的全血黏度和脑组织TNF-α含量均明显升高(P<0.01,P<0.05),病理形态学显示脑组织神经元变性、坏死,出现软化灶以及炎症细胞浸润反应;与模型组比较,塞络通胶囊干预后,切变率60/s、5/s下的全血黏度和脑组织TNF-α含量均明显下降(P<0.05),脑组织病理损伤减轻。结论:采用大鼠颈内动脉注射微球血管栓塞剂的方法可以较好的模拟脑梗死络脉瘀阻证的病机特点,塞络通胶囊在络脉瘀阻证脑梗死大鼠缺血时间窗外给药可保护脑组织,抑制炎症反应,改善络脉瘀阻证候的相关性改变。

银杏蜜环口服溶液对化学光栓塞型局灶性脑缺血小鼠模型微血管生成与重构的影响

目的:观察银杏蜜环口服溶液对化学光栓塞型局灶性脑缺血小鼠模型的影响,并探讨其在微血管生成与重构方面的作用机制。方法:将50只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组、模型组、金纳多组(12.5 mg·kg^(-1))、银杏蜜环口服溶液(银蜜)低、高剂量组(412、824 mg·kg^(-1)),每组10只。采用化学光栓阻塞微血管法建立小鼠局灶性脑梗死模型,术后连续灌胃给药14 d。采用改良神经功能缺损评分(mNSS)及前肢抓力测定评价小鼠神经功能;异硫氰酸荧光素葡聚糖(FITCdextran)染色法观察缺血灶周围区域毛细血管密度;苏木素-伊红(HE)染色观察缺血灶周围区域组织病理形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠缺血灶周边脑组织微血管生成与重构相关指标血管内皮生长因子(VEGF)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管性血友病因子(vWF)、血管生成素(ANG)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠存在显著神经功能缺损(P<0.01),前肢抓力显著下降(P<0.01),缺血灶周围区域毛细血管密度显著增加(P<0.01),存在明显神经元坏死、胶质细胞增生等病理形态改变;给药后14 d,与模型组比较,银蜜高剂量组小鼠神经功能缺损情况显著改善(P<0.01),银蜜低、高剂量组小鼠抓力均显著提升(P<0.01),银蜜高剂量组小鼠缺血灶周围区域毛细血管密度进一步增加(P<0.05),脑组织病理性损伤明显减轻,CD31、ANG、HIF-1α、vWF蛋白表达不同程度上调(P<0.05,P<0.01)。结论:银杏蜜环口服溶液可改善化学光栓塞型局灶性脑缺血小鼠模型运动功能及病理形态,其作用机制可能与促进缺血灶周围区域微血管生成与重构有关。

多因素复合建立多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型的探讨

目的:通过多因素复合建立多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型,研究多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型的建立方法。方法:将大鼠随机分为假手术组、多发性脑梗死模型组(脑梗组)和3个病证结合模型组——力竭游泳复合多发性脑梗死组(游泳+脑梗组),睡眠剥夺复合多发性脑梗死组(睡夺+脑梗组),力竭游泳加睡眠剥夺复合多发性脑梗死组(游泳+睡夺+脑梗组)。3个病证结合模型组大鼠先分别采用相应因素(力竭游泳和睡眠剥夺)造模10 d,然后行多发性脑梗死手术,术后继续采用相应因素造模10 d;脑梗组大鼠只进行多发性脑梗死手术;术后第11天观察各组大鼠一般状态,采集中医证候指标(体重、抓力、脉搏、舌象等)和西医生化指标(血液流变学、凝血4项等)。结果:与假手术组比较,睡夺+脑梗组大鼠活动量减少、体重减轻、抓力下降,脉搏幅度减弱,舌面R,G,B值降低,全血黏度增加凝血酶原时间(PT)或活化部分凝血酶原时间(APTT)缩短(P<0.05,P<0.01),且较其他组指标变化明显。结论:通过中医证候指标和西医生化指标综合分析,睡眠剥夺复合多发性脑梗死的方法优于其他3个造模方法,更适合建立多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型。

通咽喷雾剂对短暂性大脑中动脉栓塞大鼠吞咽功能和肺组织炎症的影响

目的探讨通咽喷雾剂对短暂性大脑中动脉栓塞(t MCAO)模型大鼠吞咽功能和肺组织炎症的影响。方法将70只SD大鼠随机分为空白组10只、模型组30只、通咽喷雾剂组30只。模型组和通咽喷雾剂组采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,于90 min后再灌,以建立t MCAO大鼠模型。通咽喷雾剂组大鼠在造模后给予通咽喷雾剂口咽部喷雾用药,空白组、模型组代以同等量生理盐水喷雾,每日1次,每次1喷。14天后观察大鼠吞咽潜伏期及吞咽次数,酶联免疫吸附法检测血清、肺组织P物质含量,HE染色观察大鼠肺组织改变,免疫组织化学法观测大鼠支气管黏膜上皮肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠支气管腔及肺泡充气扩张,肺组织结构紊乱,肺泡间隔变薄;吞咽潜伏期延长、吞咽次数减少,血清、肺组织P物质含量增加,支气管黏膜上皮组织TNF-α、IL-6表达增加(P <0. 05或P <0. 01)。与模型组比较,通咽喷雾剂组大鼠肺组织病变有减轻的趋势,吞咽次数明显增加,血清和肺组织P物质含量增加(P <0. 05或P <0. 01),支气管黏膜上皮TNF-α、IL-6表达无明显改善(P>0. 05)。结论通咽喷雾剂可有效改善t MCAO模型组大鼠的吞咽功能,增加吞咽频率,可能与增加血清、肺组织P物质含量有关,但其对肺组织炎症改变的影响不明显。