癫痫病人脑脊液中游离氨基酸的测定

某些氨基酸及氨基酸的衍生物在中枢神经系统的调节中起重要作用,测定人体脑脊液(CSF)游离氨基酸(AAs)对神经系统疾病的诊斯及发病机理研究具有重要意义。 国内有关此项测定报导甚少,张宗昊等研究惊厥和癫痫时测定了CSF中5种AAs介质,牛磺酸、甘氨酸与国外报导值接近,天冬氨酸、谷氨酸等有一定差异。 我们用离子交换色谱法测定了21例非神经系统疾病患者及34例癫痫病人CSF中AAs浓度。本文侧重报导此项测定方法的建立与评价:提供癫痫病人CSF中AAs浓度变化数据,为该病的临床诊断及机理研究提供一定科学依据。 有关癫痫病氨基酸等神经递质的详细研究另文报导。

大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因人白细胞介素-2在大肠杆菌和卡介苗中的表达

目的构建和鉴定大肠杆菌－分支杆菌穿梭表达质粒，检测外源基因在大肠杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）中的稳定表达。方法采用基因工程技术构建大肠杆菌－分支杆菌穿梭表达质粒，用电穿孔法将重组质粒ＰＺＳＩＩ－Ｉ转化ＢＣＧ，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定外源基因白细胞介素－２（ＩＬ－２）在ＢＣＧ和大肠杆菌中的表达。结果外源基因人ＩＬ－２基因能在大肠杆菌和ＢＣＧ中稳定表达，并能从ＢＣＧ中分泌到胞外。结论构建的ＢＣＧ重组体，能表达和分泌人ＩＬ－２。ＢＣＧＨＳＰ６５启动子表达质粒能启动外源基因在ＢＣＧ和大肠杆菌中的表达，同时使外源基因分泌至ＢＣＧ之外，但不能分泌至大肠杆菌之外。

卡介苗－抗原85－B基因的信号肽序列的克隆和鉴定

目的克隆和鉴定卡介苗－抗原８５－Ｂ（ＢＣＧ－Ａｇ８５－Ｂ）基因的信号肽序列。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对ＢＣＧ的主要分泌抗原Ａｇ８５－Ｂ基因的５′端第９４～２１１的核苷酸的信号肽序列进行扩增，再将１１７ｂｐ的扩增片段克隆到质粒ｐＢｌｕｅｃｒｉｐｔＳＫ的ＳａｃＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，并对此片段进行定序。结果序列分析表明，扩增的信号肽序列无碱基错配，同时在信号肽３′端下游可提供携带外源基因的１２个多克隆位点。结论构建一含信号肽序列的重组质粒（ＢＣＧ－ＳＯ１）。