血源性病原体的检测与血液及血液制品的安全性

血液及其制品的生物污染问题一直是医学界的研究热点．更由于81年发现血友病患者因注射凝血因子Ⅷ和Ⅸ浓缩制剂感染艾滋病病毒(HIV)而备受关注。生物污染的微生物类包括原虫(疟疾)、螺旋体(梅毒)、细菌和病毒．其中又以肝炎病毒(HBV、HCV)和HIV的危害最大。我国的输血后肝炎发病率较高．如乙肝为0．1％．

一种基于超高频RFID技术的血液管理智能门系统的研制

目的:研制一种血液管理智能门系统,实现实时监控和快速批量出入库的目的。方法:应用超高频RFID技术,研制包括读取器、启动装置、信息处理模块、信息显示模块和语音播报模块组成的智能门系统,比较扫描枪、手持机和智能门三者血液出入库的速度、准确性和完整性。结果:50袋血液平均入库时间:扫描枪225 s,手持机65 s,智能门59 s(P<0.01);平均出库时间:手持机15 s,智能门6 s(P<0.01)。与智能门比较,虽然扫描枪和手持机的出入库数量和数据准确,但内容不完整,缺少入库人、血液所在冰箱位置的信息。结论:智能门扫描出入库的速度最快,出库数量和数据准确,内容完整,提高了血液库存管理的效率和安全性。

血液管理信息化的历史、现状与未来

＂狼烟起江山北望,龙起卷马长嘶剑气如霜…＂,这是屠洪纲演唱的《精忠报国》首句,其中的＂狼烟＂就是古代信息传递的1种方式,通知大家敌人来了,做好战斗准备。当然,在如今信息爆炸的时代,靠＂狼烟＂已解决不了问题,但信息的本义依旧未改。在讨论血液管理信息化之前。

红细胞贮存损伤研究进展

随着世界范围内无偿献血的全民普及、血液筛查的严格执行,输血传播疾病的几率越来越小,而输血相关非感染性严重危害（noninfectious serious hazards of transfusion,NISHOTs）却上升为输血的主要并发症,超过输血传播疾病的1000倍（表1）.

乙型肝炎病毒基因突变的研究进展

本文对HBV基因突变频率、位置和生物学及临床和流行病学意义作了综述,并对突变机理进行了讨论。

丙型肝炎的基因诊断

自从1989年美国Chiron公司的Kuo等人首先建立了检测抗HCV抗体的第一代ELISA方法(C100-3)以来,第二代ELISA(2nd-ELISA、C200)和确证实验——重组免疫印迹试验(RIBA)又相继问世。还有学者尝试用荧光免疫方法做HCV抗原的检测。上述方法所存在的共同问题是灵敏度与特异性都不十分理想,因此不能作为丙型肝炎早期诊断和最终判断传染性的依据。相比之下,基因诊断却可以解决上述问题。

应用反转录骤合酶链反应研究庚型肝炎病毒感染

建立反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测庚型肝炎病毒感染的方法。该法特异性强，检测下限（１．９×１０３）与感染剂量相当，简便实用。对我国各类人群的ＨＧＶ感染情况进行研究，结果表明，慢性丙型肝炎患者、抗－ＨＣＶ阳性职业献血员和已知肝炎病毒标志物均阴性者感染率较高，分别为６０％、４０％和２１．７％。对其中一株（Ｐ１１）阳性扩增产物所做部分核酸序列分析，与国外两株相应区段的同源性高达９６．４％和９５．３％。

PG消毒剂的研究

PG 消毒剂含2%强化中性戊二醛,醇类和香料.该消毒剂对细菌、真菌与 HBsAg 有良好灭活作用.以其制成消毒纸巾擦手1分钟,可将自然菌减少99%.

乙型肝炎病毒亚型基因分类方法及其应用

HBV亚型分类学基础HBV基因组中的S区负责编码不同亚型的表面抗原决定簇;其中的a为共同决定簇,w/r和d/y为相互排斥的亚型决定簇。因此可根据HBsAg,用血清学和免疫学方法将HBV分成adr、adw、ayr和ayw4个主要亚型。虽然也发现了一些特殊的亚型决定簇,如x、n、t、q、Re、j和k等,但并不常见。1975年巴黎国际会议上将HBsAg确定为10个亚型(表1)。由于各亚型之间的HBV-DNA核苷酸序列存在差异,导致其相应的氨基酸序列不同和酶切位点的变化。因此可在基因水平上对HBV进行分类。

对流行病学定义和分支的几点看法

贵刊第8卷第1期上发表了丁仲时同志“对流行病学某些基本概念的探讨”一文,笔者拟就文中的某些问题发表个人的几点看法。

随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立

指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % .

实施核酸检测后献血者乙型肝炎病毒筛查策略的探讨

目的探讨献血者血液筛查中实施核酸(NAT)检测后去掉1遍HBsAg ELISA检测后HBsAg漏检的风险性,评估"1遍HBsAg ELISA加1遍NAT"是否优于"2遍HBsAg ELISA"的筛查策略。方法从本中心常规HBsAg ELISA双试剂(国产新创试剂和进口BIOMERIEUX试剂)2遍筛查中任一试剂筛查不合格的献血者血样中随机留取616份,作NAT检测、补充血清学乙肝两对半检测及HBsAg确证试验,对ELISA单试剂不合格、NAT阴性但HBsAg确证阳性标本追踪并重复上述检测加以进一步确认,分析去掉1遍HBsAg ELISA检测后HBsAg漏检的风险性。结果 616份ELISA双试剂筛查不合格标本中,有31份为新创试剂筛查合格NAT阴性但HBsAg中和试验确证阳性,因此如果去掉BIOMERIEUX ELISA试剂,采用新创ELISA试剂和NAT,那么原有2遍ELISA筛查不合格血液中将有5.0%(31/616)的HBsAg确证阳性血液会被漏检,按同期献血人群HBsAg不合格率0.32%推算,献血人群中将有16/10万HBsAg确证阳性的血液被漏检;有3份为BIOMERIEUX试剂筛查合格NAT阴性但HBsAg中和试验确证阳性,因此如果去掉新创ELISA试剂,采用BIOMERIEUX ELISA试剂和NAT,那么原有2遍ELISA筛查不合格血液中将有0.5%(3/616)的HBsAg确证阳性血液会被漏检,同理推算献血人群中将有1.6/10万HBsAg确证阳性的血液被漏检。鉴于加做单人份NAT检测可从原"2遍ELISA筛查"合格血中检出121/10万的HBV DNA阳性血液,因此"进口ELISA+NAT"或"国产ELISA+NAT"分别可比"2遍ELISA筛查"多检出119.4/10万及105/10万HBV。结论就献血者血液HBV筛查而言,"1遍ELISA 1遍NAT"的筛查策略比原有"2遍ELISA"筛查策略更能保障血液的安全性;以保留灵敏度和特异性较高的HBsAg ELISA试剂更优。

丙型肝炎病毒NS3螺旋酶寡核苷酸适配子的筛选与鉴定

为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定和Clustal W软件包分析适配子一级结构. 经过8轮循环筛选,随机ssDNA库与HCV NS3h的结合率从0.45%上升到29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分5个家族,其中4个家族具有共同的保守序列. 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子H2与HCV NS3h特异结合的亲和力最高,Kd值为140 nmol/L. 适配子H2 (10 μmol/L)在体外对HCV NS3h的活性具有一定的抑制作用,抑制率达44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗HCV NS3h的寡核苷酸适配子.

siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达

以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,所合成的 5条T7siRNAs ,均能特异性地抑制萤光素酶基因的表达 ,抑制率分别为 94 31%、80 0 1%、78 0 1%、80 33%、85 6 4% ,其中以靶向HCVIRES第二茎环结构的T7siRNA1抑制率最高 ,且对HCV基因的抑制作用有剂量依赖性 ,随T7siRNA1量的增加 ,抑制率逐渐增强 .siRNA抑制HCV基因的作用具有良好的特异性 ,改变其中 1个核苷酸即无显著抑制作用 .

对两种丙型肝炎病毒抗体辅助确认试剂灵敏度的比较

目的 对两种市售HCV-Ab辅助确认试剂的灵敏度进行比较,以便选定用于献血者最终确认的试剂。方法 应用Chiron公司的RIBA和Genelabs公司的WB确认试剂,对6种ELISA试剂检测阳性的168份血样进行确认检测。结果 168份标本中,124份标本两种试剂结果一致;在125份有反应的标本中,Chiron公司的RIBA对Core、NS_3、NS_4和NS_5区抗体分别检出51、60、53、和37份;Genelabs公司的WB对Core、NS_3、NS_4和NS_5区抗体分别检出77、69、56和30份。结论 两种试剂检测不同抗原的反应性存在差别,Genelabs公司的WB的灵敏度高于Chiron公司的RIBA。

亚甲蓝/光化学灭活病毒方法对血浆成分的影响

亚甲蓝 /光化学法可有效地灭活血浆中的病毒。为进一步观察该法对灭活血浆中诸成分的免疫活性及生化指标的影响 ,本研究用灭活病毒的条件处理单采血浆。将含有 1μmol/L亚甲蓝的血浆置于照度为 4 0 0 0 0lux的可见光下 ,在室温条件下处理 1小时。结果表明 ,除凝血因子Ⅷ ,PT和APTT有一定程度降低外 ,其它血浆蛋白活性未见明显变化 ,血浆中的白蛋白、葡萄糖、多种无机盐含量及血浆 pH值未受影响。处理后的血浆经不同电泳及免疫化学技术分析 ,未见新的抗原产生 ,电泳迁移率与未处理组相同。结论 :亚甲蓝