一种低密度及高纯度胎鼠原代海马神经元培养方法的优化及鉴定

目的通过将海马、皮层细胞共培养的方式建立一种低密度、高纯度、高稳定性的大鼠胎鼠原代海马神经元体外培养方法,以获取纯度更高、活力更好的原代海马神经元。方法分离孕16~18 d SD大鼠胎鼠的海马和皮层并分别剪碎,经0.125%胰蛋白酶消化后用200目细胞筛过滤,将获得的细胞悬液以包围的形式分别接种于培养板的内层和外环上,于含10%马血清的DMEM/F12培养基中进行共同培养,4~6 h细胞贴壁后更换培养基为维持培养基培养(Neurobasal培养基+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺)。通过CCK-8试剂盒检测细胞活力,利用免疫荧光染色检测海马神经元纯度。结果海马神经元在5 d后形成纵横交错的神经网络,生长状态较好,经鉴定海马神经元的纯度高达98%,且能够稳定存活3周。结论利用海马、皮层细胞共培养的方法可以获取高纯度、高活性、高存活率、高稳定性的胎鼠原代海马神经元,可为神经系统中海马神经元相关疾病研究提供一定的实验条件。

微管细胞骨架在小鼠脑缺血/再灌注超急性期海马CA1区组织中的表达及意义

为探讨微管细胞骨架在小鼠脑缺血/再灌注(I/R)超急性期(6、12、24 h)海马CA1区神经元中的变化情况,初步阐明微管细胞骨架对早期脑缺血/再灌注损伤的影响,将96只8周龄健康雄性ICR小鼠随机分为假手术组(24只)和I/R组(72只), I/R组通过Longa改良线栓法制备小鼠左侧大脑中动脉栓塞模型,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估各组小鼠脑缺血梗死体积,采用尼氏(Nissl)、Fluoro-Jade C (F-JC)和Neun染色检测各组小鼠海马CA1区神经元死亡情况,应用IF染色和Western blot试验检测小鼠海马CA1区微管细胞骨架相关蛋白α-tubulin、β-tubulin、acetyl-tubulin、β-tubulinⅢ和MAP2蛋白的表达水平。结果表明:与假手术组相比,I/R组在6、12、24 h时小鼠脑缺血梗死面积百分比明显增大(P<0.05),随再灌注时间和延长,脑缺血梗死面积百分比逐渐增大。Nissl、F-JC和Neun染色结果显示,I/R组在6、12、24 h时小鼠神经元随再灌注时间的延长,神经元损伤加重且存活数逐渐减少(P<0.05)。而免疫荧光染色结果表明,与假手术组相比,I/R组在6、12、24 h时小鼠海马CA1区微管细胞骨架相关蛋白β-tubulin、acetyl-tubulin、β-tubulinⅢ和MAP2表达水平明显下降(P<0.05)。综上,在小鼠I/R超急性期,微管细胞骨架相关蛋白随时间的延长,呈先缓慢后快速降解的趋势,且微管解聚进程与神经元死亡进程呈正相关,其微管细胞骨架参与早期I/R损伤进程。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是调节低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)循环水平的重要蛋白,在低密度脂蛋白受体(LDLR)降解中起关键作用。PCSK9主要通过靶向肝脏中低密度脂蛋白受体(LDLR)的降解来调节胆固醇代谢。PCSK9功能获得突变是常染色体显性高胆固醇血症的遗传原因之一。相反,功能缺失突变与低浓度的LDL胆固醇(LDL-C)和冠心病发病率的降低有关。由于这些缺失功能突变与明显的有害作用无关,抑制PCSK9是降低LDL-C浓度的一种有吸引力的新策略。在抑制PCSK9的各种方法中,人类数据仅可用于抑制PCSK9与LDLR结合的单克隆抗体。此外,也有研究表明,PCSK9可能在神经发生、神经元迁移和凋亡中发挥作用。近年来,降低胆固醇治疗的潜在神经不良反应,特别是PCSK9抑制剂引起了一些关注。该文对PCSK9的功能及其抑制剂的研究进展做一综述。

血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与急性脑梗死分型及颈动脉粥样硬化斑块性质的相关性研究

目的探讨血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平与不同分型急性脑梗死(ACI)及颈动脉粥样硬化斑块性质的相关性。方法依据TOAST分型、病情严重程度、斑块稳定性对患者进行分组,比较各组PCSK9水平。采用Logistic回归分析探讨不稳定斑块的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估PCSK9的预测作用。结果纳入的236例研究对象中,ACI患者158例,其中检出斑块142例。ACI患者血浆PCSK9水平高于对照人群,差异有统计学意义(P<0.05);大动脉粥样硬化(LAA)型ACI患者PCSK9水平、美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分高于其他亚型患者,差异有统计学意义(P<0.05);不稳定斑块组PCSK9水平高于稳定斑块组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCSK9与神经功能缺损程度呈正相关(r_(s)=0.468,P<0.05)。Logistic回归分析显示,PCSK9是LAA型ACI、颈动脉不稳定斑块的危险因素(OR=1.010,95%CI:1.001~1.019,P<0.05;OR=1.007,95%CI:1.001~1.013,P<0.05)。ROC曲线提示PCSK9>438.21 ng/mL时,患者发生LAA型ACI的风险较高。结论PCSK9可能通过诱发颈动脉不稳定斑块形成而导致LAA型脑梗死。

神经内科住院患者耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布及预后影响因素

目的分析神经内科住院患者耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因及预后影响因素。方法2017年6月-2020年6月扬州大学附属医院收治的80例神经内科住院患者为研究对象,分离CRKP菌株共86株,采用聚合酶链式扩增反应(PCR)法对CRKP菌株KPC、OXA-48、IMP、NDM、SHV耐药基因进行扩增。通过电子病历系统调取患者病史资料及实验室检查结果,包括年龄、性别、感染前住院时间、感染前手术史、合并糖尿病、合并肾功能不全、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、预后营养指数(PNI)评分、留置导尿管、二次气管插管情况,根据临床资料分析患者预后不良影响因素。结果86株CRKP感染患者药敏试验结果显示,检出CRKP菌株对厄他培南、亚胺培南、头孢曲松、美罗培南、头孢噻肟、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢他啶、左氧氟沙星和环丙沙星耐药率均超过80%,对替加环素、多黏菌素耐药率较低;86株CRKP菌株73株检出耐药基因,其中59株检出1种耐药基因,14株检出2种耐药基因,各耐药基因中KPC(66.28%)检出率最高;对两组患者临床资料分析结果显示,神经内科CRKP感染患者预后不良与年龄、APACHEⅡ评分、PNI评分有关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示APACHEⅡ评分是CRKP患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论医院神经内科CRKP检出情况较为严峻,CRKP对替加环素、多黏菌素耐药率较低,临床可据此针对性的治疗,而APACHEⅡ评分高是神经内科CRKP感染患者预后不良的危险因素,对于此类患者应加强针对性干预,最大限度改善其预后。