电裂解芯片及其在细菌核酸分析中的应用

近年来,由于各种细菌引起的疾病不断爆发,细菌核酸检测已成为常用的实验室诊断方法。细菌核酸提取是细菌分类和鉴定的关键步骤,也是医学诊断、药物筛选的重要技术之一。目前的细菌核酸提取以化学裂解方法为主,其存在明显的缺点,如样品量大、化学试剂污染等。因此,研究快速、简单、无化学污染的检测装置具有重要意义。该研究设计了一种微流控芯片在直流电场下裂解各种细菌并提取核酸。研究了电场强度、电极间距、裂解时间、氧化铟锡电极方阻及电极宽度对核酸提取的影响。结果表明,在3.0 kV/mm的电场强度下,该芯片可在3 s内裂解大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌等多种细菌,并释放出核酸。提取的核酸无需纯化,可直接用于PCR检测。该芯片与实时荧光定量PCR联用检测细菌DNA的线性范围为10-18~10^(-10)mol/L,检出限低至4.2×10^(-18)mol/L。不同类型的细菌需根据其性质适当调整最佳裂解条件。该研究为病原体分析和细菌感染的医学诊断提供了一种简单、快速、高效且无化学试剂污染的核酸提取方法。

犬骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞(英文)

背景:骨髓基质干细胞的多向分化性不利于向软骨细胞单一方向分化,植入体内后成骨系细胞分泌的骨形态发生蛋白作用于非定向分化的前体细胞,使其向成骨细胞分化,而已定向分化的细胞则不受骨形态发生蛋白的影响,形成相应的组织。目的:体外诱导犬骨髓基质干细胞定向分化为软骨细胞,探讨体外诱导成软骨的方法和条件。设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-03/2006-01在中山大学组织工程实验室完成。材料:选取4个月龄雄性家犬1只,骨髓基质干细胞取自犬肋骨。方法:自犬肋骨取骨髓2.0～3.0mL行体外原代骨髓基质干细胞分离培养。8～11d细胞接近融合时,加入胰酶消化,用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM合成培养液终止消化,收集细胞悬液,离心后,用培养液悬浮细胞,按1∶3接种传代。取第3代细胞培养扩增,换液时加入10μg/L碱性成纤维细胞生长因子2mL,换液2次后,再加入1mg/L转化生长因β12mL诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化。主要观察指标:行甲苯胺蓝、阿新蓝染色检测软骨基质的分泌,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果:骨髓基质干细胞体外行原代和传代培养至P4代生长良好,经碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因β1扩增诱导的细胞甲苯氨蓝异染性、阿新蓝染色阳性;II型胶原免疫组织化学检测阳性,显示被诱导的骨髓基质干细胞具备软骨细胞特性。结论:应用碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因β1体外可以诱导犬骨髓基质干细胞分化为软骨细胞,诱导的软骨细胞可作为软骨组织工程较理想的种子细胞。

犬骨髓基质干细胞分离培养与向软骨样细胞诱导分化的研究

【目的】探讨犬骨髓基质干细胞的提取、分离和体外扩增的最佳条件,研究其在体外培养中定向诱导分化为软骨样细胞的可能。【方法】从幼年犬骨髓中分离基质干细胞进行培养扩增,观察其生长特性,体外应用碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)对第3代传代细胞诱导分化,并通过细胞的染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定诱导分化细胞的类型。【结果】原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落融合周期约6～9d左右。第3代传代细胞经碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-β1)诱导后,传代细胞在形态上呈软骨样改变;甲苯氨蓝异染性、阿新蓝染色阳性;Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性。【结论】犬骨髓基质干细胞在体外培养条件下生长良好和持续扩增,在碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-β1)作用下可被诱导分化为软骨样细胞。

儿童慢性扁桃体炎腺样体肥大切除202例

对２０２例慢性扁桃体炎腺样体肥大的患儿行手术切除，随访１８０例，治愈率９０％。对其中４０例伴有明确睡眠呼吸暂停病史的患儿手术前后进行了血气分析，结果（ｘ±ｓ）表明：术前ｐＨ７．３３４±０．０１３、Ｐｃｏ２（ｋＰａ）６．０４±０．２６、Ｐｏ２（ｋＰａ）１０３８±０２０，术后ｐＨ７３８８±００１８、Ｐｃｏ２５３７±０１９、Ｐｏ２１２４１±０２４，统计学处理各项指标均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。作者认为慢性扁桃体炎腺样体肥大如有睡眠性呼吸暂停临床症状及并发症者应早期手术治疗。

经关节镜半月板部分切除治疗半月板无血管区损伤

目的 分析关节镜下半月板部分切除治疗半月板无血管区损伤的手术疗效 ,提出较适宜的手术时机。方法 随访 2 76例 (侧 )半月板无血管区损伤关节镜下部分切除的患者 ,从手术时间、镜下部分切除术后疗效进行分析、比较。结果 半月板损伤后 15d～ 2个月组行半月板部分切除术后优良率达 79% ;2～ 4年组治疗术后优良率为 5 7 2 %。结论 半月板损伤应早期诊断、早期治疗 ;早期关节镜下部分切除无血管区损伤半月板的疗效明显优于晚期手术治疗。

应用LISS钢板治疗老年股骨干骨折

目的本研究对老年性股骨干骨折采用闭合复位或结合有限切开复位LISS钢板内固定的患者进行临床分析。方法从2002年至2007年对17例65岁以上股骨干骨折的患者采用复位后LISS钢板内固定系统治疗,其中男性7例,女性10例,骨折发生时平均年龄为71岁,对这些患者进行临床评估。结果随访平均持续时间为14个月(7～26个月),所有患者骨折愈合时间平均3.6月,本组病例没有使用同种异体骨条或自体骨植骨,没有出现并发症。结论LISS钢板在治疗老年性股骨干骨折时显示出相对于其他类型钢板的优势。微创的操作减少对骨折端血运的破坏,减低骨折不愈合等并发症,同时在这类骨质疏松性骨折中锁钉显示出良好的固定能力。

西若非注射用骨肽治疗类风湿性关节炎的疗效

目的对西若非注射用骨肽治疗类风湿性关节炎的疗效进行观察。方法将143例类风湿性关节炎患者随机分为对照组和观察组。对照组静脉注射青霉素;观察组静脉注射西若非注射用骨肽。比较治疗前后休息痛、压痛关节数、关节压痛指数、肿胀关节数、关节肿胀指数、握力、晨僵时间、血沉、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子指标及有效率。结果观察组休息痛、关节压痛指数、握力、晨僵时间、ERS、CRP和RF均有明显改善,治疗前后差异有显著性(P<0.05);观察组与对照组比较,各项指标值均有所改善;对照组总有效率为82.9%,观察组总有效率为89.0%,两组总有效率比较差异有显著性(P<0.05)。结论西若非注射用骨肽治疗类风湿性关节炎疗效确切。

等离子髓核消融术在颈椎病的临床应用

目的评价等离子髓核消融术在颈椎病治疗中的疗效。方法对168例年龄在26岁～86岁经MRI检查和临床表现确诊的颈椎病患者采用经皮等离子髓核消融术治疗,并对其疗效进行观察分析。结果本组全部患者经5个月～22个月的随访,平均10个月。152例患者症状有不同程度改善,总有效率为90%。术前VAS评分平均为(6.11±0.32)分,术后随访5个月时VAS评分平均(1.71±0.52)分。术后3天主观满意优良率88%,症状缓解率85%。结论等离子髓核消融术具有操作简单、安全、微创、近期疗效优的特点,是一种安全﹑有效的颈椎病微创手术,适合非脊髓型颈椎病。

后路椎间盘镜治疗腰椎间盘突出症疗效分析

目的评价腰椎间盘镜治疗腰椎间盘突出症的疗效。方法回顾分析129例采用腰椎间盘镜髓核摘除术治疗的腰椎间盘突出症患者,男71例,女58例;年龄22～71岁,平均37岁。病变部位:L3/4 7例,L4/5 66例,L5/S1 43例,L4/5和L5/S1 13例。评估术后半年和3年的疗效及满意度。结果术后半年和3年JOA评分由术前平均(6.20±1.30)分,分别提高到(12.40±1.22)分和(13.75±1.65)分(P<0.01);VAS评分由术前平均(7.30±1.25)分分别下降至(1.78±0.64)分和(2.07±0.76)分(P<0.01)。术后平均3年优107例,良12例,可10例,差0例。患者自我评价满意度分别为92%。平均恢复工作时间2个月。结论后路椎间盘镜具有创伤小、出血少、术后恢复快的优点是治疗老年腰椎间盘突出症有效且安全的手术方法。

复发性鼻(窦)息肉的鼻内窥镜手术

复发性鼻（窦）息肉的鼻内窥镜手术王其友１兰信堂１张建新１自１９９３年１１月～１９９５年１１月，对２２例双侧复发性鼻（窦）息肉患者进行了鼻内窥镜手术，为进一步提高手术疗效，对有关因素进行探讨。１临床资料２２例中，男１４例，女８例，年龄１５～６８岁，平...

负载外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶促进皮肤损伤愈合

背景:应用细胞外基质水凝胶有效递送外泌体,并与皮肤周围组织进行桥接,有助于皮肤损伤的修复。目的:探索负载骨髓间充质干细胞外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶对皮肤损伤的影响。方法:利用超速离心法提取大鼠骨髓间充质细胞上清液中的外泌体。①制备甲基丙烯酸改性明胶水凝胶,加入外泌体与光引发剂,于紫外线下交联,形成负载外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶;②将成纤维细胞分别接种于负载外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶与普通培养板上,接种12 h后,划痕实验观察细胞迁移情况;③在20只成年SD大鼠背部制作直径1 cm、深0.2 cm的皮肤损伤创面,实验组(n=10)覆盖负载外泌体的3D细胞外基质水凝胶,对照组(n=10)覆盖生理盐水,最后均覆盖无菌纱布,术后2周,通过苏木精-伊红染色法及马松染色观察损伤皮肤结构变化和胶原沉积情况。结果与结论:①划痕实验显示,负载外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶上成纤维细胞的迁移能力强于普通培养板;②动物实验苏木精-伊红染色显示,对照组皮肤组织结构有不同程度的断裂,炎症细胞增多;实验组皮肤组织结构较为完整,细胞数量明显增多,微血管结构清晰可见及密度增加;③动物实验马松染色显示,实验组皮肤组织内含有大量规则排列的胶原纤维,对照组仅存在少量胶原纤维,且呈现稀疏结构;④结果表明,负载骨髓间充质干细胞外泌体的3D明胶细胞外基质水凝胶水凝胶有助于皮肤损伤的愈合,可能与外泌体促进成纤维细胞迁移有关。

聚羟基烷酸酯与犬骨髓间充质干细胞的体外相容性(英文)

背景:聚羟基烷酸酯是将具有良好生物相容性的高强度高模量的聚羟基丁酸脂与聚羟基戊酸脂按一定比例组合,采用熔铸颗粒沥取法制备的新型支架,经检测其具有高孔隙度的三维网状结构、良好的生物降解性能等优良特性。目的:评价聚羟基烷酸酯作为组织工程支架与犬骨髓间充质干细胞的生物相容性。设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2003-06/2004-03在中山大学组织胚胎实验室完成。材料:聚羟基烷酸酯支架和膜的孔隙率>85%,孔径大小为100～350μm。方法:原代培养犬骨髓间充质干细胞,传至三四代后,接种至聚羟基烷酸酯膜和泡沫样三维支架上,以单纯细胞培养为对照组。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态;于培养1,2,3周采用40g/L多聚甲醛固定,常规组织切片,苏木精-伊红染色;在培养5,10,14d用Hoechs33258荧光法定量测定细胞内DNA含量,BCA法测定蛋白质含量。结果:倒置显微镜观察聚羟基烷酸酯纤维较粗,且透光性差,在相差显微镜下不易观察。第3,4代骨髓间充质干细胞接种至聚羟基烷酸酯膜上2h后即大部分黏附,3d后伸展良好,呈纺锤形或梭形,培养接种1周后,取2个膜状聚羟基烷酸酯固定,苏木精-伊红染色后,见骨髓间充质干细胞增殖可。培养接种2周后,骨髓基质干细胞增殖明显,呈梭形密布于膜状聚羟基烷酸酯上。细胞在聚羟基烷酸酯三维支架的孔隙内立体生长,1周开始细胞间连接,3周广泛连接,分泌大量基质;培养接种3周后,骨髓间充质干细胞增殖较第2周无明显变化。定量测定接种的细胞内DNA含量和蛋白质含量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:聚羟基烷酸酯作为骨髓间充质干细胞的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性。

犬骨髓基质干细胞与聚羟基烷酸酯体外相容性的实验研究

目的:评价聚羟基烷酸酯(PHBV)作为组织工程支架与犬骨髓基质干细胞(BMSCs)的生物相容性。方法:原代培养犬BMSCs,传至3-4代后,接种至PHBV膜和泡沫样三维支架上,以接种至培养板上细胞为对照组,倒置显微镜下观察细胞形态;于培养1、2、3周分别采用4%多聚甲醛固定,常规组织切片,HE染色;在5、10、14d用Hoechst33258荧光法定量测定细胞内DNA含量,BCA法测定蛋白质含量。结果:倒置显微镜观察PHBV纤维较粗,且透光性差,在相差显微镜下不易观察。第3-4代BMSCs接种至PHBV膜上2h后即大部黏附,3d后伸展良好,呈纺锤形或梭形,在三维支架的孔隙内立体生长,1周开始细胞间连接,3周广泛连接,分泌大量基质;培养接种1周后,取二个膜状PHBV固定,HE染色后,见骨髓基质干细胞增殖。培养接种2周后,骨髓基质干细胞增殖明显,呈梭形密布于膜状PHBV上。培养接种3周后,骨髓基质干细胞增殖较第二周无明显变化。定量测定接种的细胞内DNA含量和蛋白质含量与对照组相比无显著差异。结论:PHBV作为BMSCs的组织工程支架材料。

等离子低温髓核消融术治疗老年颈椎病的疗效分析

目的评价等离子髓核消融术在颈椎病治疗中的疗效。方法对85例年龄在62～86岁经MRI检查和临床表现确诊的颈椎病患者采用经皮等离子低温髓核消融术治疗,并对其疗效进行观察分析。结果本组全部患者经3～20个月的随访,平均11个月。78例患者症状有不同程度改善,总有效率为92%。术前VAS评分平均为(6.31±0.38)分,术后随访3个月时VAS评分平均(1.86±0.61)分。术后3天主观满意优良率90.5%,症状缓解率86%。结论等离子低温髓核消融术是一种安全?有效的颈椎病微创手术,适合非脊髓型颈椎病。具有操作简单、安全、微创、近期疗效优的特点。

腹直肌皮瓣修复四肢大面积软组织缺损

目的:探讨应用腹直肌肌皮瓣修复四肢大面积软组织缺损的临床应用。方法:19例严重创伤或手术切除后形成四肢大面积软组织缺损患者行腹直肌肌皮瓣修复术,术中根据患者损伤的创面部位采用带蒂或游离腹直肌肌皮瓣修复缺损处,3例胫前或足背动脉受损者采用逆行吻合血管的方法修复创面。结果:本组手术顺利、无皮瓣坏死、感染等并发症。随访4个月～22个月,皮瓣外形和功能恢复良好。结论:腹直肌肌皮瓣修复四肢大面积软组织缺损值得推荐。

基于受体配体结合技术研究酸枣仁镇静催眠活性成分

目的利用受体配体结合法探索酸枣仁中镇静催眠的活性成分,以及该成分的镇静催眠作用机制与苯二氮卓受体的关系。方法首先,对酸枣仁中的化学成分进行乙醇粗提;其次,制备Wistar大鼠脑组织匀浆液;根据受体-配体结合原理,采用体外饱和分子竞争的方法,利用高浓度的地西泮作为阳性竞争药,竞争低浓度的酸枣仁中可与脑组织中苯二氮卓受体结合的配体化合物;收集这些镇静催眠有效化合物,利用HPLC和LC-MS方法对酸枣仁与脑组织孵育提取化合物、地西泮与脑组织孵育提取化合物、地西泮+酸枣仁与脑组织孵育提取化合物进行谱图表征差异性分析鉴定,以确认被地西泮竞争置换出的酸枣仁中的有效镇静催眠化合物。结果 HPLC检测结果显示,与地西泮组、酸枣仁+地西泮组对比,酸枣仁作用组在出峰时间2.71min和46.87min处出现特殊峰。LC-MS检测结果表明,酸枣仁中与苯二氮卓受体结合的配体化合物分别为274.28 m/z、453.34 m/z、496.34 m/z和608.38 m/z,根据酸枣仁指纹图谱的比对这些化合物可能是脂肪酸类物质和三萜类化合物。结论利用受体配体结合技术的原理,结合HPLC和HPLC-MS分析技术研究酸枣仁中镇静催眠活性成分,实验结果发现,酸枣仁中镇静催眠的活性成分可能是脂肪酸类物质棕榈酸(palmitic acid,C_(16)H_(32)O_2)、三萜类化合物麦珠子酸(alphitolic acid,C_(30)H_(48)O_4)和斯皮诺素(spinosin,C_(28)H_(32)O_(15)),这3种化合物由于与地西泮竞争结合苯二氮卓受体,可能具有类似的镇静催眠作用,这为进一步开发新型镇静催眠药奠定了理论基础。

“T”形锁定加压钢板治疗桡骨远端骨折

目的探讨应用锁定加压接骨板(lockingcompressionplate,LCP)治疗桡骨远端骨折的临床疗效。方法对16例桡骨远端骨折行切开复位LCP内固定,术后早期功能锻炼。结果术后随访7～15个月,平均10个月,所有患者均获得骨性愈合。按照改良McBride评分和纽约骨科医院腕关节评估标准,优14例,良2例,无并发症发生。结论LCP治疗桡骨远端骨折临床疗效满意,尤其对于不稳定型以及骨质疏松性桡骨远端骨折,能够牢固维持复位,有利于患肢早期功能锻炼。

低温等离子消融术建立兔椎间盘退变模型的实验研究

目的 探讨低温等离子消融术建立兔椎间盘退变模型的方法与可行性。方法 新西兰大白兔24只，随机分为实验组12只，对照组12只。两组均穿刺L3/4～L5/6椎间隙,实验组采用消融30s建模,对照组单纯以穿刺针穿刺建模。分别于术前及术后4、8、12周行CR、MRI检查及病理学检查。结果 实验组DR及MR检查至术后12周均可见退变逐步加重的征象，如椎间隙高度的丢失及T2信号逐步降低。对照组DR及MR检查4周后无明显的退变加重迹象。两组病理学检查均未见早期的髓核缺失，实验组12周可见髓核正常结构消失，椎间盘内结构紊乱。结论 低温等离子消融术比传统单纯穿刺更易及快速建立椎间盘退变的动物模型，采用此方法建立兔椎间盘退变模型是可靠可行的。

高龄患者椎弓根钉内固定术的临床特点及疗效分析

目的 ：探讨高龄患者腰椎退行疾病经后路减压椎弓根钉棒内固定椎间融合治疗的临床疗效。方法 ：2010年3月至2013年5月收治28例80岁及以上高龄腰椎退行性疾病患者,其中男10例,女18例,年龄80-93岁,平均（85.44±3.66）岁,病程3-20年。采用经后路减压椎弓根钉棒内固定椎间融合治疗,记录手术时间、术中失血量及术后近远期并发症,术前和术后末次随访时分别进行JOA腰椎评分并计算临床改善率,并于术后末次随访时采用改良的Macnab标准评定疗效。结果：所有患者获得随访,随访时间12-40个月,平均26.5个月。手术时间（150.00±26.42）min,术中出血量（373.33±99.88）ml。JOA评分术前（12.30±2.43）分,末次随访时（24.81±2.09）分,较术前明显提高（P〈0.01）。手术前后的改善率为21%-89%,平均74.26%。末次随访时按照改良的Macnab标准评定结果,优16例,良10例,可2例。术后2周内,3例出现神经根牵拉刺激症状,3例出现伤口浅表感染愈合延迟,1例术中硬膜囊撕裂,出现脑脊液漏。1例患者术后34个月时出现相邻节段椎管退变狭窄。所有患者顺利融合,无内固定松动移位、假关节形成等其他并发症。结论：选择合适的病例,充分的术前准备,完备的术中操作及积极的术后管理和随访,即便是80岁及以上的高龄腰椎退行性疾病患者,采用经后路减压椎弓根钉棒内固定椎间融合治疗也可以取得满意的疗效。

骨髓间充质干细胞来源外泌体保护软骨细胞延缓骨关节炎的发生发展

背景:骨关节炎是最常见的关节退行性疾病,目前骨髓间充质干细胞已应用于骨关节炎治疗中,但与骨髓间充质干细胞相比,骨髓间充质干细胞来源外泌体移植具有更多优势,例如非免疫原性、非致瘤性以及储存和运输方便。目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎的保护作用。方法:①提取SD大鼠骨髓间充质干细胞并通过细胞形态及流式细胞学进行鉴定,利用超速离心法提取细胞上清液中的外泌体并通过透射电镜、粒径及western blot进行鉴定;②提取原代乳鼠肋软骨细胞,与荧光标记外泌体共培养12 h,观察软骨细胞吞噬情况。体外通过白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤,加入含有50μg外泌体的PBS溶液100μL干预24 h,采用免疫荧光检测基质金属蛋白酶13及Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达,评估外泌体对于损伤软骨细胞的保护作用;③体内通过碘乙酸诱导大鼠骨关节炎模型,关节腔内注射外泌体,通过苏木精-伊红染色及番红-固绿染色观察骨关节炎关节结构变化,通过免疫组织化学染色检测基质金属蛋白酶13及Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达,评估外泌体对体内软骨损伤的保护作用。结果与结论:①原代骨髓间充质干细胞呈现典型的梭形,放射状排列,表达CD73和CD105而几乎不表达CD45、CD34和CD3;透射电镜显示外泌体呈现典型茶托样形态,粒径小于100 nm,ALIX及HRS蛋白呈阳性表达;②软骨细胞内可观察到典型的红染颗粒证实外泌体可以被软骨细胞摄取,同时外泌体可以促进软骨细胞Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达及抑制基质金属蛋白酶13表达,证实外泌体可以减弱白细胞介素1β对软骨细胞的损伤作用;③外泌体可以促进损伤关节软骨形态恢复及Ⅱ型胶原纤维α1表达,抑制基质金属蛋白酶13表达,同样证实外泌体可以缓解碘乙酸对骨关节软骨的破坏作用;④上述结果表明,骨髓间充质干细胞外泌体通过软骨保护机制延缓骨关节炎的发生与发展。