GST-hZimp10融合蛋白的重组及抗体制备

目的:构建pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒,并在大肠杆菌中表达,纯化出GST-hZimp10融合蛋白,用以制备抗hZimp10抗体。方法:采用PCR技术以pcCDNA3.1-Flag-hZimp10为模板,扩增出hZimp10蛋白N端128个氨基酸对应DNA片段,并将其与谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1进行重组,酶切鉴定后获得重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达,获得GST-hZimp10融合蛋白,纯化后将其作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体特异性。结果:经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,确定PGEX-4T-1/hZimp10重组质粒中包含384bp的片段,与测序结果一致,表明pGEX-4T-1/hZimp10重组质粒构建成功。SDS-PAGE电泳,融合蛋白成功表达,蛋白相对分子质量大小与预期相符。间接ELISA法检测抗hZimp10抗体效价可达1∶100 000以上。Western blotting法,hZimp10在LNCaP细胞中具有很高的特异性。结论:成功获得GST-hZimp10融合蛋白,且制备了抗hZimp10抗体。

与化学相融合的高中生物有效思维课堂的构建——以《降低化学反应活化能的酶》一课为例

在生物教学中,与生物课程联系最紧密的是化学课程,若想让高中生物课堂更高效,进行与化学相融合的生物教学是十分必要的。本文以《降低化学反应活化能的酶》一课为例,探讨了与化学相融合的构建高中生物有效思维课堂的原则、思路和方法。

浅谈触摸式白板一体机在高中生物教学中的应用

触摸式白板一体机是一种集多种高端设备于一身的现代高科技教学设备,随着时代的发展,它已经广泛应用于中小学的教学过程中。它既具备了多媒体教学的优势,又继承了传统黑板的教学优点,更能发挥课堂教学潜能。本文结合生物教学的特点,阐明了触摸式白板一体机在生物教学当中发挥的价值及优势。

一种新的混合斑精子分离方法

制备了精子表面膜抗原受精素β蛋白（Fertilinβ）的特异性抗体,通过抗原-抗体反应和抗体固相偶联技术,将抗体连接到琼脂糖球珠上,建立了混合斑精子分离纯化的新方法.首先,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增编码人受精素β蛋白第341~373位氨基酸的基因序列,构建PGEX-4T-1/Fertilinβ原核表达质粒;其次,诱导表达GST-Fertilinβ融合蛋白,制备受精素β蛋白多克隆抗体,免疫荧光检测结果表明,受精素β蛋白定位于精子的头后部,并且阴道上皮细胞没有受精素β蛋白的表达;最后,将受精素β抗体与ProteinA琼脂糖球珠连接构建固相抗体系统,将精子吸附于表面,可从混合斑（精子与阴道上皮细胞混合液）中分离纯化精子.本文为性犯罪案件侦破提供了新的方法.