来那度胺对血友病性关节炎的治疗作用研究

目的:探讨来那度胺对人滑膜成纤维细胞(HFLS)增殖的影响以及对A型血友病小鼠血友病性关节炎(HA)的治疗效果。方法:以HFLS为模型细胞,在细胞培养基中添加柠檬酸铁和TNF-α重组蛋白,体外模拟炎性环境,加入不同浓度的来那度胺,通过CCK-8、ELISA、RT-q PCR、流式细胞术等方法检测HFLS的增殖能力、促炎细胞因子释放和细胞凋亡等功能的变化;构建小鼠HA模型,关节腔内注射不同浓度(0.1、0.3和1.0 g/kg)的来那度胺,在给药后d 14收集样本,通过RT-q PCR检测和组织学方法观察小鼠关节中滑膜增厚、新生血管形成等情况。结果:在体外,与未加药物的对照组相比,来那度胺0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L均能够显著抑制HFLS的增殖活力(P<0.05),以浓度为0.01μmol/L时作用最显著(P<0.001)。与对照组相比,来那度胺能够显著抑制HFLS细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ等炎性因子的表达水平(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,来那度胺能够促进HFLS细胞的凋亡水平(P<0.05)。RT-q PCR结果表明来那度胺能够显著降低小鼠关节组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1和VEGF的mRNA表达水平(P<0.05)。组织学病理检测结果表明,来那度胺能够明显降低HA小鼠的关节滑膜厚度,减少新生血管生成,效果呈现剂量依赖性(r=-0.9129),以剂量为1 g/kg时保护作用最明显。结论:在体外,来那度胺能够有效抑制HFLS细胞增殖,促进其凋亡,并抑制其炎性因子的表达;在体内,能够缓解小鼠关节内炎症发展,显著降低小鼠关节中炎性因子的表达水平,为来那度胺将来应用于HA的临床治疗提供了理论和实验依据。

AAV介导的TNFR关节内基因治疗对血友病性关节病预防和治疗的实验研究

血友病性关节病(HA)的发病机制与关节内炎性细胞因子过表达有关,肿瘤坏死因子α(TNFα)是最重要的炎性因子之一。可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)作为TNFα的受体可以特异性地与TNFα结合拮抗TNFα炎性效应。为探讨关节腔内持续表达sTNFR对HA关节的保护作用,将表达TNFR的质粒(pAAV-TNFR:Fc)包装为rAAV5-TNFR:Fc载体,注射到血友病小鼠膝关节内。结果显示炎症持续42 d后,关节内仍能表达TNFR:Fc,两个给药组中TNFα和白介素-1β(IL-1β)的表达不同程度地下降,关节病变均显著减轻,表明该关节内基因治疗对血友病性关节病有预防和治疗效果。