基于仿生控冰材料的生物安全冷冻保存策略

冷冻保存技术是维持细胞、组织和器官活性的重要手段,实现安全有效的冷冻保存会为生物科学和临床医学研究带来历史性的变革。传统的小分子冷冻保护剂(如二甲基亚砜(DMSO))在冷冻保存过程中发挥着重要作用,但它在分子、亚细胞、细胞以及组织器官和个体层面的结构破坏作用和生物毒性,使其在冷冻保存中的应用受到很大的局限。探讨并总结了DMSO的毒性以及当前研究者在冷冻保存领域中努力探索的新型控冰材料,特别是受自然界极端环境中耐寒生物的启发而创制的一系列具有良好生物相容性的仿生控冰材料,概述了控冰材料的发展历程,分析了仿生控冰材料等新型控冰材料在生物样本冷冻保存中的优势、挑战,并展望了未来的发展趋势。

甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-Pro^(SPLV-lotus)。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1∶256000时,ELISA显色后OD_(450)读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带。这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测。

碱性鞘磷脂酶抑制炎症性肠病的研究

碱性鞘磷脂酶(alkaline sphingomyelinase,alk-SMase)最初作为肠道中水解鞘磷脂(sphingomyelin,SM)的关键酶被人们所认知。随着SM代谢通路在细胞增殖和凋亡中的作用被认识,人们开始探索alk-SMase在肠道中的潜在功能。近年来,alk-SMase通过参与磷脂代谢在结肠炎症和肿瘤中的作用逐渐被发现,证实了它是肠道中的一个保护因子。本文将重点对alk-SMase通过参与磷脂分子代谢抵抗炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的研究作一概述。

碱性鞘磷脂酶对小鼠胆固醇代谢的调节作用及机制

目的探讨碱性鞘磷脂酶(alk-SMase)对机体胆固醇代谢的调节作用及机制。方法将小鼠按照基因型分为WT(alk-SMase+/+)组和KO(alk-SMase-/-)组,经过常规喂养12 w龄时,分别检测两组小鼠血清中血脂四项水平、肝脏中胆固醇水平;取小鼠小肠粘膜组织提取蛋白,采用Western blotting检测小肠中B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BI)、顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT),同时提取肝脏蛋白检测羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、尼曼-匹克C2(NPC2)的表达情况。结果与WT小鼠比较,KO小鼠alk-SMase活性缺失引起血中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平下降,肝脏TC水平也升高,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。同时,KO小鼠小肠粘膜中SR-BI、ASBT和肝脏HMGCR表达显著上调,而肝脏NPC2表达显著下调,且差异都具有统计学意义(P<0.05)。结论在正常生理状态下,初步探明alk-SMase通过调节肠道中胆固醇吸收及肝脏胆固醇合成及外排的过程调节机体胆固醇的代谢,维持机体胆固醇稳态平衡。