蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP 2在乳腺癌细胞MCF 7的移动及粘附中的作用 .利用基因重组技术分别将野生型SHP 2与突变型SHP 2与绿色荧光蛋白GFP的基因片段构成重组质粒 (SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP) .脂质体转染法分别转入MCF 7中 ,表达成功后筛选并建立SHP 2 GFP和SHP 2C >S GFP细胞株 .荧光显微镜观察细胞移动情况 ,免疫印迹法检测粘附分子E 钙粘蛋白和金属蛋白酶MMP 1及MMP 9的表达 .实验后建立SHP 2 GFP及SHP 2C >S GFP细胞株 ,同时观察到SHP 2C >S GFP细胞的形态发生明显改变 :从梭形状态变成圆形状态 .荧光显微镜发现 ,MCF 7细胞和SHP 2 GFP、SHP 2C >S GFP转染的细胞在 3h、6h、9h的移动情况分别是MCF 7为 10 %、2 3%、5 4% ,SHP 2 GFP为 15 %、4 9%、98% ,SHP 2C >S GFP为 4 %、11%、30 % .免疫印迹结果表明 ,SHP 2C >S GFP细胞的E 钙粘蛋白表达比SHP 2 GFP细胞明显升高 (P <0 0 5 ) .MMP 1及MMP 9的表达量在SHP 2 GFP细胞中有所增强 (P <0 0 5 ) .实验表明 ,SHP 2可能通过调节粘附分子和基质金属磷酸酶而在细胞移动。

卵巢移位及腹膜阴道延长术在宫颈癌根治术中的临床应用

宫颈癌是常见的妇科生殖系统恶性肿瘤之一，近年来由于新柏氏液基细胞学技术（TCT）宫颈癌筛查的广泛应用，其发病率在世界各地明显下降，但是在一些地区由于人乳头瘤病毒（HPV）感染和社会生活的变化，宫颈癌的发病年轻化趋势十分明显。对年轻的早期宫颈癌患者的治疗，不仅要以手术彻底切除肿瘤、降低复发和延长生存期为目的，还应在保证预后的前提下提高其生活质量。我们对年龄〈45周岁的早期宫颈癌（Ⅰa-Ⅱa）患者在做根治术中保留一侧或双侧卵巢（35周岁以下），并移位至横结肠旁沟同时行阴道延长术，探讨其对患者生活质量的影响。

全身麻醉对剖宫产术中孕妇循环和新生儿Apgar评分及血气分析的影响

目的比较不同剖宫产麻醉方式对孕妇循环和新生儿Apgar评分及血气分析的影响,以期为优化剖宫产麻醉方案提供依据。方法收集2010年1月至2013年1月南京军区福州总医院在全身麻醉下行剖宫产的孕妇80例(全麻组)与椎管内麻醉失败后行全身麻醉下剖宫产的孕妇60例(对照组)的临床资料。比较两组孕妇血流动力学、麻醉开始至新生儿出生时间、新生儿Apgar评分及脐动脉血气分析。结果全麻组与对照组孕妇麻醉前后心率、血压和血氧饱和度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。全麻组与对照组新生儿1分钟Apgar评分≥7者的比例分别为96.3%(77/80)和75.0%(45/60),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。全麻组和对照组新生儿插管率分别为1.3%(1/80)和13.3%(8/60),新生儿脐动脉pH值分别为7.29±0.41和7.23±0.53,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和全麻组麻醉开始至新生儿出生时间分别为(8.3±3.2)min和(3.2±2.2)min,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论全身麻醉可安全用于剖宫产手术,合理用药、缩短新生儿出生时间,以减少并发症的发生。

基因表达谱芯片筛选宫颈癌放疗抵抗差异表达基因

目的探讨基因表达谱芯片筛选宫颈癌放疗残留癌组织与放疗前宫颈癌组织的差异表达基因。方法收集接受根治性放疗的宫颈癌患者3例,分别获取放疗至50 Gy残留癌组织和放疗前癌组织,通过基因表达谱芯片筛选出放疗前后的差异表达基因,应用荧光定量PCR对部分基因进行验证。结果基因表达谱芯片检测显示,放疗后残留癌组织表达上调3倍以上的基因有111个,表达下调3倍以上基因有127个。这些基因主要涉及DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞粘附、细胞凋亡及自噬、细胞能量代谢、血管生成以及细胞信号转导等功能。荧光定量PCR证实CXCL12、CD74、FGF7、COL14A1、ATM和CD44基因在放疗后表达明显上调(P<0.05),而PRC1、RAD54L基因在放疗后表达明显下调(P<0.05)。结论基因表达谱芯片能筛选出宫颈癌放疗抵抗差异表达基因,为放疗敏感性的研究提供参考。

MMP-1、MMP-2在盆底器官脱垂疾病患者阴道组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶与女性盆底器官脱垂性疾病的关系。方法选择20例盆底器官脱垂患者为研究组,20例非盆底器官功能障碍患者作为对照。RT-PCR法检测阴道前壁组织中MMP-1和MMP-2 mRNA的表达,明胶底物酶法测定阴道前壁组织中MMP-1、MMP-2的活性。结果脱垂患者阴道组织中MMP-1 mRNA的表达为0.68±0.06,显著高于对照组的0.41±0.03(P<0.01),pro-MMP-2在脱垂患者阴道壁组织酶活性为1.98±0.42,明显高于对照组的0.56±0.27(P<0.05)。结论 MMP-1使盆底组织胶原代谢分解增加,增加的MMP-1表达可能与盆底器官脱垂有关。

两种经闭孔无张力尿道悬吊术治疗压力性尿失禁疗效对比研究

目的回顾性评估由外向内经闭孔无张力尿道悬吊术('outside-in'transobturator tape,TOT)与由内向外经闭孔无张力尿道悬吊术('inside-out'transobturator tape,TVT-O)治疗压力性尿失禁的安全性和有效性。方法选择2004年4月～2007年1月本院压力性尿失禁患者79例,其中,行TOT患者41例,行TVT-O患者38例。TOT组和TVT-O组患有混合性尿失禁者分别为17例和13例;伴有盆腔脏器脱垂者9例和7例。对比两种手术方式的治愈率和术后并发症,评估两者的安全性和有效性。结果单纯性尿失禁患者平均手术时间为11min(TOT)和15min(TVT-O)。TVT-O组发生膀胱穿孔1例。TOT组平均随访时间为26个月,TVT-O组为14个月。TVT-O组和TOT组的1年总治愈率分别为92%和90%(P>0.05)。结论TOT和TVT-O均能有效的治疗伴有或不伴有盆腔器官脱垂的压力性尿失禁。

SHP-2野生型基因可促进乳腺癌转移而其突变型基因可抑制转移

目的:探讨含2个Src同源区2的蛋白酪氨酸磷酸酶(Src homology 2 domain-containing tyrosine phosphatase,SHP-2)在乳腺癌MCF-7细胞体内外移动和转移中的作用。方法:首先构建重组质粒SHP-2-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因及SHP-2C>S-GFP(SHP-2突变体),并分别转入乳腺癌MCF-7细胞中,建立2种细胞,即SHP-2-GFP-MCF-7和SHP-2C>S-MCF-7。利用荧光显微镜技术观察细胞移动情况,动物实验观察不同细胞移植组裸小鼠的肿瘤生长情况,从而确定蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动、侵袭和转移中的作用。结果:SHP-2转染的乳腺癌MCF-7细胞的体外移动能力增强,且在注射此组细胞的裸鼠中有肿瘤生长;而转染了SHP-2C>S-GFP的乳腺癌MCF-7细胞的移动能力明显减弱,且注射此组细胞的裸鼠未发现肿瘤生长。结论:SHP-2可促进乳腺癌MCF-7细胞在体外的移动及体内的侵袭和转移。

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

本文探讨SHP-2在乳腺癌细胞MCF-7的移动及粘附中的作用。利用基因重组技术分别将野生型SHP-2与突变型SHP-2与绿色荧光蛋白GFP的基因片段构成重组质粒(SHP-2-GFP、SHP-2C>S-GFP)，脂质体转染法分别转入MCF-7中，表达成功后筛选并建立SHP-2-GFP和SHP-C>S-GFP细胞株。荧光显微镜观察细胞移动情况，

骨形态发生蛋白-1在盆底器官脱垂患者阴道组织中的表达及意义

目的:探讨骨形态发生蛋白-1(BMP-1)在盆底器官脱垂患者阴道组织的表达情况及其在盆底器官脱垂发生中的作用。方法:选择南京军区福州总医院收治的绝经前盆底器官脱垂患者15例为研究组,同期选取因妇科良性疾病行全子宫切除8例患者为对照组。于术中取患者阴道前壁组织,采用RT-PCR检测BMP-1mRNA的表达,采用免疫印迹方法检测BMP-1两个主要表型(BMP-1-1、BMP-1-3)蛋白表达。结果:盆底器官脱垂患者阴道前壁组织中BMP-1mRNA以及BMP-1-3蛋白的表达与对照组比较明显减低,差异有高度统计学意义及统计学意义(P<0.01,P<0.05);而BMP-1-1蛋白的表达在两组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:盆底器官脱垂患者BMP-1表达降低,从而使成熟胶原释放减少,胶原蛋白含量降低,这可能是盆底器官脱垂的发生机制之一。

蛋白激酶与蛋白磷酸酶在细胞增殖分化中的机制研究

细胞生长发育和癌变过程中有众多复杂的信号转导途径以及信号分子参与,其中最基本的生化反应过程是系列蛋白质(信号分子)的磷酸化.

低氧培养的肝癌细胞中低氧诱导因子1的表达与血管生成和细胞凋亡相关蛋白的关系

目的：观察低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-α，HIF-1α）在低氧培养的肝癌细胞中的表达变化，并初步探讨其与血管生成和细胞凋亡的关系。方法：将终浓度为125μmol／L的氯化钴加入HepG2肝癌细胞培养液中模拟低氧环境，并设培养不同时间（O、1、2、4、6、8h）组。（1）采用RT-PCR技术检测低氧培养不同时间的肝癌细胞中HIF-1α、VEGF、Caspase-3、bcl-2和bax mRNA的表达；（2）应用Western印迹方法及酶标免疫测量仪分别检测了各培养组细胞Caspase-3蛋白表达及Caspase-3酶活性。结果：（1）HepG2细胞在低氧培养1～2h后，其HIF-1n、VEGF、bob2mRNA的表达逐渐增加，在4h达到高峰，随后下降，但仍高于低氧处理前水平；而baxmRNA表达无明显变化，bcl-2／bax比值与上述变化趋势一致。（2）Caspase-3mRNA及蛋白的表达及酶活性变化趋势与HIF-1α正好相反。结论：HI卜1n可能通过调节VEGF、bcl-2、bax和Caspase-3的表达而抑制肝癌细胞凋亡，且这种抑制作用与缺氧程度有关。

小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定

目的：分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法：取18～20d雄性小鼠的睾丸，酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ，与pcDNA3．0连接后构建重组质粒pcDNA3．0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcDNA3．0-SERZ，获得线性化模板进而合成探针。原位杂交检测SERZ mRNA在培养细胞中的表达；用RT—PCR的方法检测雄激素结合蛋白（ABP）在支持细胞中的表达。结果：支持细胞多为多边形，核呈三角形或不规则形，染色浅，核仁明显，细胞完全铺开，成膜状，相邻细胞之间交织连接，细胞纯度为（85．1±2．5）％。SERZ mRNA在培养细胞的胞质中高水平表达。RT—PCR结果表明我们分离的支持细胞能够表达ABP mRNA。结论：我们成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞，纯度为（85．1±2．5）％。

电离辐射对缺氧条件下肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨缺氧条件下电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子(HIF)-1α及血管生成因子(VEGF)表达的影响,从理论上寻找一种提高放射治疗肿瘤有效性的方法。方法将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照照射率4Gy/min,共8Gy的剂量利用X射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞。利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况。结果(1)细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P<0.05)。(2)MTT检测结果:细胞存活分数排列顺序为:对照组>缺氧组>缺氧加照射组>单纯照射组。(3)HIF-1α表达情况:缺氧加照射组>缺氧组>正常组(P<0.05),单纯照射组与正常组无明显差异;VEGF表达变化情况:缺氧加照射组>缺氧组>单纯照射组>正常组(P<0.05)。结论提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用,从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性。

乏氧条件下HIF-1α介导Hela宫颈癌细胞的放射敏感性

目的:探讨乏氧条件下,乏氧诱导因子HIF-1α对Hela宫颈癌细胞放射敏感性的影响以及初步作用机制。方法:MTT法分析不同组别宫颈癌细胞存活分数,流式细胞法(FCM)检测各组细胞的凋亡变化,RT-PCR和Western blot分别检验各组宫颈癌细胞的HIF-1α、VEGF和p53的mRNA和蛋白表达情况,siRNA干扰HIF-1α对宫颈癌放射敏感性的影响,以及对VEGF、p53表达的影响。结果:乏氧条件下通过诱导肿瘤细胞HIF-1α的高表达途径,提高VEGF表达,抑制p53表达来降低Hela宫颈癌细胞的放射敏感性。HIF-1α的siRNA转染联合照射后,在乏氧条件下MTT法显示细胞存活率较非转染组明显下降,流式细胞仪法显示细胞凋亡率明显上升。同时干扰HIF-1α后明显抑制VEGF的表达,提高p53的表达。结论:抑制HIF-1α可能通过减少VEGF及增加p53来提高Hela宫颈癌细胞的放射敏感性。

组织芯片检测肝癌组织中GATA4及甲胎蛋白的表达及二者相关性

目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在肝癌中的表达、意义及二者相关性。方法:应用免疫组化ABC法检测29个肝癌和37个癌旁组织组织芯片中GATA4和AFP的表达。结果:肝癌组织中GATA4和AFP的阳性率分别为96.5%和82.7%,GATA4主要在核表达,胞质也有表达;癌旁组织中GATA4和AFP的阳性率为分别为94.5%和78.3%,GATA4主要在胞质表达,胞核也有表达。而癌和癌旁组织中AFP均在胞质表达。癌和癌旁组织中GATA4和AFP表达既有相关性又有统计学差异。GATA4的表达,癌组织较癌旁组织高,低分化癌较高分化癌高。结论:GATA4和AFP均在肝癌和癌旁组织表达,二者相关性较好,但GATA4比较敏感。GATA4的转录活性与肝癌细胞的分化程度密切相关。

食管癌组织VEGF表达的临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达对食管癌术后放疗疗效的影响。方法:回顾性研究1999～2001年期间95例有临床随访资料的食管癌术后患者,应用免疫组化方法检测食管癌石蜡切片中VEGF蛋白的表达情况,选取45例根治术后行辅助放疗,选同期单独手术的50例患者作对照,应用Kaplan-Meier法和Cox比例风险模型进行分析。结果:VEGF在食管癌组织中阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆内,其VEGF蛋白表达阳性率为58.9%;VEGF蛋白表达与性别、年龄、病理类型、临床分期之间无明显相关性(P>0.05),但与复发及远处转移呈正相关(P<0.05);在单纯手术组和术后放疗组中VEGF阳性表达和阴性表达的生存率差异有统计学意义(P<0.05);Cox多因素分析结果显示,治疗分组、分期和VEGF表达均为预测食管癌预后的独立指标。结论:VEGF蛋白表达是预后好差的指标之一,VEGF蛋白表达阳性者较阴性者对放疗不敏感,其高表达提示预后不良。

P44/42 MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的表达

为了观察P4 4 / 4 2MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的变化情况 ,首先利用γ射线诱发Balb/C小鼠发生白血病 ,成功地建立了辐射致癌模型 .在此基础上 ,将动物分为三组 :癌变组、辐射未癌变组和对照组 ,利用免疫沉淀和免疫印迹技术 ,检测各组骨髓细胞的P4 4 / 4 2MAPK和STAT3蛋白及磷酸化水平变化情况 .结果显示 :癌变组骨髓细胞P4 4 / 4 2MAPK蛋白及磷酸化水平均高于辐射未癌变组和对照组 (P <0 0 5 ) ;而STAT3蛋白及磷酸化水平在三组骨髓细胞之间无显著差异 (P >0 0 5 ) .说明Ras/P4 4 / 4 2MAPK途径可能在γ射线诱发的小鼠白血病中发挥一定的作用 。

缺氧条件下电离辐射与肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的关系

目的:探讨缺氧条件下,电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子HIF-1α及血管生成因子VEGF表达的影响。方法:将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照射率4Gy/min、总共8Gy的剂量,用X线射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞。利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况。结果:细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡的情况,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P<0.05);MTT检测细胞存活分数排列顺序为:对照组>缺氧组>缺氧加照射组>单纯照射组。HIF-1α表达情况:缺氧加照射组>缺氧组>对照组(P<0.05),单纯照射组与正常组无明显差异。VEGF表达变化情况:缺氧加照射组>缺氧组>单纯照射组>对照组(P<0.05)。结论:本研究提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用,从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性。