DNA双链退火压力对DNA聚合酶gp5链置换的调控

DNA聚合酶是执行DNA复制和修复的重要蛋白,由于其只能从5′向3′方向聚合,所以在聚合双链DNA时会有两种模式:其一是先打开DNA双链,让其暴露出3′-5′方向的模板链(先导链),然后沿着这条链复制出新链以此置换旧链,这就是链置换的合成.另一种是沿着已经置换出的5′-3′方向的模板链(滞后链)进行延伸合成.T7噬菌体作为常被研究的模式生物,其DNA聚合酶gp5在复制过程中既会参与链置换也会参与延伸合成,已有的研究报道gp5自身独立链置换的能力很弱,其与T7解旋酶gp4耦合形成复制体后可以发生快速且持续的链置换,这一现象的分子机制尚待厘清.本文通过单分子荧光共振能量转移(smFRET)的方法对gp5聚合过程的动力学进行了研究,发现gp5在没有外力帮助下时会进入链置换-外切的循环,导致聚合难以延伸,调控这一循环的关键则是DNA双链退火压力.进一步的实验表明gp5和gp4形成复制体后,gp4辅助gp5克服了退火压力从而聚合可以延伸.