哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P<0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P<0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P<0.01),细胞内ROS水平显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P<0.01),Bax蛋白表达显著上调(P<0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P<0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P<0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P<0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。

基于IL-6/STAT3信号通路研究冬凌草甲素对乳腺癌细胞的作用及机制

目的基于白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)信号通路研究冬凌草甲素对乳腺癌细胞增殖、自噬和凋亡的影响,并进一步探究冬凌草甲素对乳腺癌细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。方法通过MTT法检测冬凌草甲素对MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖的影响;采用GFP-LC3荧光斑点检测冬凌草甲素对MDA-MB-468细胞自噬的影响;采用DAPI染色法观察冬凌草甲素对MDA-MB-468细胞生长抑制的影响;采用流式细胞仪测定冬凌草甲素对MDA-MB-468细胞凋亡的影响;利用稳定转染STAT3-luciferase报告基因质粒的HepG2-STAT1/3-Luc细胞,检测冬凌草甲素对IL-6/STAT3信号通路的作用;采用Western blotting检测冬凌草甲素对STAT3磷酸化的影响以及对细胞增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。结果冬凌草甲素抑制乳腺癌细胞增殖,诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡作用,呈剂量相关性;冬凌草甲素对IL-6/STAT3信号通路和STAT3磷酸化均有明显的抑制作用;冬凌草甲素能够上调乳腺癌细胞p53、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,cleaved PARP)、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)以及Caspase-9蛋白表达。结论冬凌草甲素通过抑制STAT3磷酸化而抑制IL-6/STAT3信号通路的激活,并能上调p53、cleaved PARP、cleaved Caspase-3及cleaved Caspase-9蛋白表达,进而抑制乳腺癌细胞增殖,诱导乳腺癌细胞的自噬和凋亡。