氧化苦参碱对脑梗死后血-脑脊液屏障保护作用的研究

目的 探讨缺血性脑卒中(CI)损伤后RAGE/NF-κB通路的动态变化及氧化苦参碱保护CI后血-脑脊液屏障(BCFB)通透性增加的具体机制。方法 应用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,并将大鼠随机分为4组:假手术组、缺血组和干预组分别为氧化苦参碱(OMT) 60 mg·kg^(-1),OMT120mg·kg^(-1)。在脑缺血24 h时应用干湿重法测定脑水肿、伊文思蓝渗出评估BCFB的完整性,并从组织学、蛋白和mRNA水平检测IS脑组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子-κB (NF-κB)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)及基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)的变化;以及OMT干预对其表达的影响。结果 OMT 120mg·kg-1组可明显降低脑含水量,减少伊文思蓝的渗出;高剂量OMT可降低RAGE、TNF-α、MMP-9的表达,并抑制NF-κB核转位。结论 OMT能够抑制IS后炎症反应,保护BCFB完整性,其作用可能通过RAGE/NF-κB信号通路介导。

紫草素通过调控PI3K/AKT通路减轻脑缺血再灌注损伤的机制研究

目的探讨脑缺血再灌注损伤后PI3K/AKT信号通路的活性变化及紫草素发挥相应作用的调控机制。方法采用改良的Longa线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。成年雄性CD-1小鼠随机被分为5组:假手术组(Sham)、缺血再灌注组(Vehicle)、低剂量紫草素干预组(L-Shi)、高剂量紫草素干预组(H-Shi)、紫草素+LY294002组(H-Shi+LY294002)。各组小鼠取材前先进行神经功能评分、取材后进行脑梗死体积、脑组织含水量的测定,并对超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化进行检测,运用免疫组化,蛋白印迹法和实时定量PCR等方法检测缺血侧脑组织中PI3K、AKT、HO-1、Nrf2蛋白和mRNA水平的变化;以及紫草素在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其对PI3K/AKT信号转导通路的作用。结果H-Shi组可明显改善神经功能缺损、降低脑含水量、减小脑梗死体积;免疫组化、Western blot结果显示H-Shi组在24 h和72 h均可明显升高p-PI3K、p-AKT、HO-1、Nrf2的表达,但这种作用同样可被LY294002阻断。H-Shi对于HO-1、Nrf2的mRNA表达与免疫组化和Western blot结果一致。结论PI3K/AKT通路参与了紫草素的脑保护作用,为其临床进一步应用提供了理论基础。

不同水文地质条件对城市地下水资源污染的影响研究

为研究水文地质对城市地下水污染的影响,选择了太行山以南、黄沁河以北的城市。该地区有四种水文地质条件,通过构建地下水水流和水质模拟算法,确定该区域受六价铬和总硬度污染最严重。在对两类污染物的分布情况分析后,确定受河流影响较大,迁移方向基本与水流方向一致,污染方式是径流扩散和蒸发浓缩。另外,两类污染物浓度依次按照山前平原水文地质、山前交接洼地水文地质和冲击平原水文地质的顺序递减,是因为山前平原水文地质包气带较厚,氧化作用较明显,所以该地质条件的地下水污染最严重。

成人MOG抗体相关疾病二例

目的讨论并总结髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体相关疾病的临床表现、影像学表现及治疗,为该类疾病的诊疗提供参考。方法报道2例成人MOG抗体相关疾病病历并分析。结果2例成人MOG抗体相关疾病均以头晕为首发临床症状,例1首次发作表现为双侧脑炎合并癫痫发作,复发表现为视神经脊髓炎。例2表现为逐渐进展的脑脊髓炎。本文2例急性期给予小剂量激素治疗后症状均得到明显缓解。搜索既往MOG抗体相关疾病报道,其中以视神经脊髓炎、横贯性脊髓炎等常见,治疗方法主要是激素冲击结合免疫治疗。结论目前MOG抗体相关疾病临床表现和影像学缺乏特异性,且存在影像学滞后于临床表现的情况。因此,对于临床表现或影像学不典型的患者,及早识别、及时治疗是关键。对于部分患者,急性期小剂量激素治疗也可得到临床获益。

植物MADS-box基因的研究进展

MADS-box基因是一类重要的转录调控因子,在动物、植物、真菌中都有分布。在植物中从根、茎、叶到花的发育,果实的成熟MADS-box基因都起作用,尤其是在开花植物中花的发育,开花时间的控制等方面起着重要的作用。综述了MADS-box基因的分类、进化、结构、以及MADS-box基因在植物花器官发育,开花时间的控制,果实的成熟等方面的作用。

HMGB1/NF-κB通路在脑梗死治疗中的调控研究

目的探讨脑梗死后HMGB1/NF-κB信号通路的活性变化及丹参酮ⅡA发挥调控作用的具体机制。方法应用改良线栓法制备大脑中动脉脑梗死模型,健康雄性SD大鼠随机分为4个亚组:正常组、缺血组和给药组(分别为丹参酮ⅡA 10 mg·kg-1,丹参酮ⅡA 20mg·kg-1)。实验采用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR等方法观察HMGB1、NF-κB的表达变化,以及丹参酮ⅡA在脑梗死后继发缺血损伤中的神经保护作用及其对HMGB1/NF-κB信号转导通路的作用。结果HMGB1在脑缺血损伤过程中表达可上调,缺血3 h开始上升,于24 h表达至高峰,缺血48h后逐渐下降,可持续至14d。给予丹参酮ⅡA治疗后可以有效减轻神经功能以及组织的损伤,其作用可能与其下调HMGB1、NF-κB表达,抑制炎症反应有关。结论HMB1/NF-κB通路参与了丹参酮ⅡA的脑保护作用,为其临床进一步应用提供了理论基础。

棉花GhMADS12基因的克隆及其表达载体的构建

MADS-box基因是真核生物中一类重要的转录调控因子,调节着植物根、茎、叶到花的发育和果实的成熟。本研究以中棉所36花发育期均一化全长cDNA文库为基础,分离出一个棉花的MADS-box基因全长cDNA命名为GhMADS12。同时利用pBI121双元载体成功构建了GhMADS12基因的植物过表达载体,并利用基因枪轰击法瞬时表达载体,验证了载体的可靠性,为下一步转基因验证基因的功能奠定了基础。

棉花MADS-box蛋白基因(GhMADS-13)的克隆和表达分析

一组具有MADS-box结构域的转录因子在控制花器官的诱导与发育中起着重要作,以中棉所36(CCRI)均一化全长cDNA文库为基础,结合EST测序分析,分离获得一个棉花的MADS-box基因全长cDNA。该基因cDNA全长1079bp,包含一个732bp的完整的开放阅读框,编码234个氨基酸,具有典型的MADS-box结构域和完整的K区,命名为GhMADS-13(GenBank:FJ409870)。与拟南芥、葡萄等植物的AGL6类基因具有高度的同源性。实时定量RT-PCR分析表明,GhMADS-13在CCRI36的花器官发育中早期表达量逐步增加,后期有下降趋势。推测GhMADS-13可能在开花诱导和花器官发育过程中起着重要作用。

孕妇血浆、羊水及胎儿血浆、软骨中环丙沙星浓度的测定

喹诺酮类（ＱＮＳ）药物对胎儿及未成年人的软骨毒性作用是全世界都很关注且悬而未决的问题。一方面，动物实验显示ＱＮＳ药物能引起幼稚动物关节软骨损害，年龄越小损害越严重，且有种属特异性。另一方面，临床上孕妇及生长发育期未成年人用ＱＮＳ药物极少发现软骨损害。研究的前提要有药动学数据。ＱＮＳ向胎儿转运的药动学资料迄今仍不易获得。为确定孕妇用此类药物能否到达胎儿体内，特别是软骨中，药物浓度如何，我们用微生物单层琼脂扩散法检测了１０例因感染而应用环丙沙星（ＣＰＬＸ）的中晚期引产的孕妇血浆、羊水及胎儿血浆、软骨中环丙沙星的浓度。结果表明环丙沙星容易通过胎盘到达羊水及胎儿体内，使孕妇血药浓度降低。同时胎儿软骨对环丙沙星可能有蓄积作用。本组靶组织中ＣＰＬＸ药物浓度的数据为孕妇的临床用药及ＱＮＳ药物的软骨毒性研究提供了药理依据。

丹参酮ⅡA保护脑梗死大鼠血脑屏障的机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠脑梗死后血脑屏障的保护作用及其机制。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型。实验采用随机分组(n=168),分为假手术组、MCAO组、丹参酮ⅡA大剂量组、丹参酮ⅡA小剂量组。丹参酮ⅡA于术后立即腹腔注射,大鼠24h处死。采用Western Blot和反转录-聚合酶链反应测定claudin-5蛋白和IgG变化,激光共聚焦显微镜观察双重荧光标记的claudin-5和IgG在脑组织的分布,并观察神经功能、脑梗死体积和脑水肿。结果与假手术组比较,MCAO组claudin-5表达明显减少;大剂量丹参酮ⅡA能够显著上调claudin-5,明显改善神经功能,减轻脑水肿,减小梗死体积,减少IgG渗出,保护血脑屏障。结论大剂量丹参酮ⅡA通过上调claudin-5表达,维持血管内皮细胞紧密连接的完整性,对血脑屏障发挥保护作用。

槐定碱抑制TLR4/NF-κB通路的激活和机制研究

目的观察脑缺血-再灌注损伤后TLR4/NF-κB通路的活性变化,并探讨槐定碱的调控机制。方法采用改良线栓法制备大脑中动脉缺血-再灌注模型。实验采用Western blot和qR-T PCR观察TLR4、NF-κB基因和蛋白变化,比较各组脑梗死体积、患侧脑水肿和神经功能。结果脑缺血-再灌注后TLR4、NF-κB表达明显上调。槐定碱通过抑制TLR4/NF-κB通路的激活,明显改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小脑梗死体积。结论 TLR4/NF-κB通路参与了槐定碱的脑保护作用,为其临床应用提供了理论基础。

注射丹参多酚酸治疗急性脑梗死的前瞻性临床研究

目的评价注射丹参多酚酸对轻中度急性脑梗死(ACI)的有效性和安全性。方法采用前瞻性临床研究的试验方法。注射丹参多酚酸0.13g·d^(-1)×14d,加于0.9%氯化钠注射液250mL中静脉滴注,输液速度2ml·min^(-1)。结果用药14 d后,头颅MRI/CT所示患者的脑梗死体积与用药前比较显著减小,差异有统计学意义(P<0.01)。用药后第7天、14天及90天,NIHSS评分和改良Rankin与用药前比较评分减少,差异有统计学意义(P<0.01);Bartel Index与用药前比较显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。用药后14d,患者血浆总胆固醇及低密度脂蛋白水平与用药前比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。半胱氨酸水平与用药前比较明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。安全性分析显示,用药后14 d,患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、及碱性磷酸酶(ALP)与用药前相比水平轻度升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。其余安全性检查如血常规、尿常规、凝血功能、肝功能、肾功能、心肌酶、心电图、血流动力学检查在用药前后,均无差异性变化。结论注射丹参多酚酸对轻、中度ACI的治疗安全、有效。同时提示注射丹参多酚酸在改善卒中神经功能缺损总评分、神经功能指标和日常生活能力,以及调节血脂、半胱氨酸水平等方面,具有一定的优势。

白藜芦醇苷对脑梗死大鼠中Shh和Nrf2信号通路的调节及机制研究

目的观察大脑皮质Shh信号通路的转录因子Gli1、Ptch1与SOD1的动态表达,并探讨白藜芦醇苷脑保护作用及其对Gli1、Ptch1、Nrf2及SOD1的调节作用。方法采用线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型。实验(一):SD大鼠随机分为7组:正常对照组以及建立局灶性缺血模型成功后3 h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h共7个观察组,采用免疫组织化学方法、Western blot及RT-PCR观察缺血周围区Gli1,Ptch1和SOD1表达的变化。实验(二):SD大鼠随机分为4组:假手术组、溶剂对照组、和给药组(白藜芦醇苷25mg,50mg·kg^(-1))。术后24h和72 h分别采用免疫组织化学方法、Western blot及RT-PCR观察缺血周围区Gli1,Ptch1,Nrf2和SOD1表达的变化。结果免疫组织化学、Western blot及RT-PCR显示脑缺血6 h后Glil、Ptch1以及SOD1的表达开始升高,并于24 h达高峰,72 h后开始降低。白藜芦醇苷50mg·kg^(-1)能改善大鼠缺血后神经功能评分、减少梗死体积,显著升高缺血后Gli1、Ptch1、Nrf2和SOD1表达量的升高。结论大剂量白藜芦醇苷对局灶性脑缺血具有神经保护的作用。其保护作用可能与上调Gli1、Ptch1、Nrf2及SOD1的表达有关。

PI3-K/Akt通路在脑缺血治疗中的调控机制研究

目的观察脑缺血-再灌注损伤后PI3-K/Akt通路的活性变化,并探讨阿利吉仑的调控机制。方法采用改良线栓法制备大脑中动脉缺血-再灌注模型。实验采用Western blot和qR-T PCR观察PI3-K、Akt基因和蛋白变化,比较各组脑梗死体积、患侧脑水肿和神经功能。结果缺血-再灌注后PI3-K、Akt表达明显减少。阿利吉仑通过激活PI3-K/Akt通路,明显改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小梗死体积。结论 PI3-K/Akt通路参与了阿利吉仑的脑保护作用,为其临床应用提供了理论基础。

TWEAK、NF-κB在脑梗死大鼠脑组织的表达及氧化苦参碱对其表达的影响

目的采用大鼠局灶性脑缺血模型,观察TWEAK、NF-κB的表达及氧化苦参碱的干预作用。方法 SD大鼠随机分为4组:正常组、缺血组、和给药组(氧化苦参碱60,120mg·kg^-1)。应用线栓法建立局灶性脑缺血模型,术后6 h,24 h,48 h,72 h、用免疫组织化学方法、Western blot及RT-PCR检测缺血周围区TWEAK和NF-κB表达的变化。结果免疫组化、Western blot及RT-PCR显示TWEAK的表达水平在脑梗死后6 h内上升,48 h达高峰,72 h逐渐下降。氧化苦参碱120mg·kg^-1能改善大鼠缺血后神经功能评分、减少梗死体积,显著降低缺血后TWEAK和NF-κB表达量的升高。结论实验证实了TWEAK的表达参与了脑缺血后继发性损伤,氧化苦参碱可通过下调TWEAK、NF-κB表达,减轻缺血后脑损伤。

替米沙坦对大鼠脑缺血后核因子κB表达的影响

目的探讨抗高血压药物替米沙坦对大鼠脑梗死的治疗作用及其机制。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型。替米沙坦治疗后,观察其神经功能评分、脑梗死体积和患侧脑水肿,采用免疫组织化学法、Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应检测核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ)基因和蛋白变化。结果 MCAO后24 h,与假手术组比较,替米沙坦能明显改善神经功能评分、减轻脑水肿、减小梗死体积,同时显著下调NF-κB,上调PPARγ的蛋白表达和基因表达;与GW9662(特异性阻断剂)联合干预,上述作用消失。结论替米沙坦能保护脑缺血性脑组织,其作用机制可能是激活PPARγ、抑制NF-κB表达。

妊娠期阴道、宫颈微生态的评价

目的了解妊娠期阴道、宫颈感染状况，探讨妊娠期进行阴道分泌物检测及宫颈分泌物HPV、衣原体检测的临床意义。方法产前门诊常规围产保健孕妇980例（早孕期159例、中孕期612例、晚孕期209例）采集阴道分泌物，测定pH值、涂片常规检查及，宫颈分泌物行杂交捕获试验检测人乳头瘤病毒（HPV）及送微生物室行免疫层析法检测沙眼衣原体抗原。妇科门诊非阴道炎就诊的患者（年龄≤40岁）100例进行相同的检查作为非孕期对照。结果阴道pH值在妊娠期、非孕期分别为3．88±0．20及4．28±0．33，孕期低于非孕期（P〈0．01）。孕期细菌性阴道病（BV）、外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）及沙眼衣原体（CT）感染率分别是23．9％、21．5％、22．0％，非孕期三项感染率分别为12．0％、11．0％、6．0％，孕期显著高于非孕期（P〈0．01）。孕期HPV感染率同非妊娠期。无症状体征孕妇中，仍有29．8％存在阴道微生态失调。在HPV阳性孕妇中BV、VVC、CT的患病率分别为48．7％、41．7％、45．2％，HPV阴性组中分别为20．6％、18．8％、19．0％，HPV阳性组BV、VVC、CT患病率明显高于阴性组（均P〈0．01）。结论妊娠期阴道微生态发生改变，表现为pH值降低，微生态失调比例升高，与HPV感染密切相关。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在保护大鼠脑缺血中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)对大鼠脑缺血的保护作用及其机制。方法线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。实验分为假手术组、溶剂对照组、替米沙坦组、替米沙坦+GW9662组。采用Western Blot和RT-PCR观察大鼠脑缺血后24h时PPARγ、色素上皮源性生长因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的基因和蛋白表达变化,采用干湿法测定各组脑组织含水量,采用TTG染色法测定患侧脑梗死体积,采用改良Longna分级法评价神经功能。结果 MCAO后24h,溶剂对照组PPARγ、PEDF表达明显减少,而MMP-9显著增加;替米沙坦组替米沙坦激活PPARγ能够上调PEDF、下调MMP-9,并明显改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小梗死体积,保护缺血脑组织;替米沙坦+GW9662组合并应用PPARγ特异性阻断剂GW9662显著逆转上述保护作用。结论 PPARγ是调控脑缺血后炎症反应的关键性因子,激活PPAγ途径可能成为治疗脑缺血的新靶点。

青蒿琥酯通过激活Nrf2通路增强小鼠脑梗死后的抗氧化能力和减轻神经损伤

目的探讨青蒿琥酯是否能减轻脑梗死小鼠脑损伤和增强抗氧化作用,以及其对核因子E2相关因子2(Nrf2)抗氧化通路的影响。方法将小鼠分为4组:dMCAO组、假手术组、青蒿琥酯低剂量组(15mg·kg^(-1))和青蒿琥酯高剂量组(30mg·kg^(-1))。脑缺血后72h,通过TTC染色测量的梗死体积和神经功能评分来评价青蒿琥酯的神经保护作用。用试剂盒分别测定缺血侧脑组织中MDA、ROS、SOD、CAT和GSH-Px的含量及活性。Western blot检测缺血脑组织中血红素氧合酶-1(HO-1)和Nrf2的蛋白水平。免疫荧光分析观察Nrf2的核转位。结果与dMCAO组相比,青蒿琥酯30mg·kg^(-1)对梗死体积和神经功能缺损有明显的改善作用。青蒿琥酯30mg·kg^(-1)处理可降低MDA和ROS的产生,提高CAT、SOD和GSHPx活性,同时能显著提高HO-1的蛋白水平,并上调Nrf2在细胞核中的表达。结论青蒿琥酯增强了脑缺血后的抗氧化作用,保护脑组织,其作用可能通过Nrf2信号通路介导。