清上蠲痛汤标准汤剂挥发油的UPLC特征图谱建立及成分分析

目的建立清上蠲痛汤标准汤剂挥发油的特征图谱,初步推断该方中影响临床治疗效果的主要挥发油类活性成分。方法采用水蒸气蒸馏法提取清上蠲痛汤标准汤剂中挥发油,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立15批样品的超高效液相色谱(UPLC)特征图谱并进行相似度评价;采用超高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法对标准汤剂挥发油类成分进行指认、鉴定;采用气质联用(GC-MS)法分析其挥发油类成分组成。结果15批清上蠲痛汤标准汤剂挥发油的UPLC特征图谱的相似度在0.949~0.997之间;共得到12个共有峰,经UPLC-Q-TOF/MS鉴定主要成分为甲基丁香酚、E-藁本内酯、E-正丁烯基苯酞等。GC-MS共鉴定出23个成分,主要为3,4,5-三甲氧基甲苯、百秋李醇、Z-藁本内酯等。结论建立了清上蠲痛汤标准汤剂挥发油的特征图谱,初步推断甲基丁香酚、藁本内酯、E-正丁烯基苯酞、百秋李醇、3,4,5-三甲氧基甲苯可能是影响清上蠲痛汤挥发油临床治疗效果的主要活性成分。

基于指纹图谱及一测多评法的莲子心质量评价研究

目的:建立UPLC指纹图谱和一测多评法评价莲子心的质量。方法:采用UPLC法建立莲子心指纹图谱;采用一测多评法测定莲子心中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱3种生物碱类成分的含量,通过与外标法比较,验证一测多评法的可行性和科学性。结果:建立的10批莲子心UPLC指纹图谱确定了10个共有峰,相似度均大于0.900;以莲心碱(S)为内参物,确定异莲心碱、甲基莲心碱的相对校正因子分别为1.1037、1.1039,莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱分别在0.09938~0.70053μg(r=0.9999)、0.10320~0.77400μg(r=0.9999)、0.22172~1.66287μg(r=0.9999)的进样量范围内与峰面积的线性关系良好。外标法与一测多评法的含量测定结果无显著性差异。结论:建立的方法准确、快速、可行,可用于莲子心的质量评价。

BP神经网络结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺

采用BP神经网络结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺,为该工艺工业化生产提供参考。以黄芪甲苷,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、马钱苷、毛蕊花糖苷、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、总多糖含量及干膏率为综合评价指标,按照L_9(3~4)正交表安排进行试验,考察提取次数、提取时间、加水量对综合评分的影响,以正交试验数据为基础,采用BP人工神经网络优化通脉复方提取工艺。结果表明最佳提取工艺为11倍水,提取4次,每次40 min;马钱苷,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、羟基红花黄色素A、毛蕊花糖苷、丹酚酸B、黄芪甲苷提取量平均值分别为6.9754,0.3315,14.8921,0.2956,55.2634,0.8647 mg·g^(-1);总多糖得率平均值为615 mg·g^(-1),干膏率平均值44.21%。BP人工神经网络结合综合评分可用于优选通脉复方提取工艺,无需多次试验便可为优化条件提供参考。

玄龙止咳方中药物配伍对麻黄有效成分影响的研究

目的:考察玄龙止咳方中其它药物对麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱含量的影响。方法:色谱条件为Wondasil-C_(18)色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5μm);流动相:以0.1%的磷酸(含0.1%的三乙胺)为流动相A,甲醇为流动相B;柱温30℃;流速:1.0 m L.min^(-1);进样体积:10μL,检测波长210 nm。结果:与麻黄单煎液的滤液相比,五味子能促使麻黄碱的含量升高,升高率达39.98%;僵蚕和百部都能使麻黄碱和伪麻黄碱含量降低,约降低10%。结论:麻黄与其他药物配伍时,麻黄碱和伪麻黄碱容易受到影响,含量或升高或降低。故而在麻黄提取时,配伍应当得到重视,同时为玄龙止咳方的制备方法提供依据。

清心解瘀方标准汤剂多指标成分含量测定及UPLC指纹图谱研究

目的制备18批清心解瘀方标准汤剂,对其物质基准进行研究。方法以标准汤剂丹酚酸B、阿魏酸、总生物碱和黄芪甲苷的含量、转移率,出膏率、含油量、指纹图谱相似度等为评价指标,建立清心解瘀方标准汤剂相关表征参数允许范围。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)进行指纹图谱分析,采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱共有峰进行评价。结果共确定了18个共有峰,共有峰相似度均大于0.90。18批样品聚为2类,结合相似度结果,分析可能与不同产地饮片配伍有关。根据OPLS-DA VIP值结合载荷图,共筛选出3个影响批间样品质量的色谱峰,依次为丹酚酸B(14号峰)、盐酸黄连碱(10号峰)和阿魏酸(7号峰)。为减小批间样品的质量差异,保证制剂质量的一致性,在后续制剂生产中应尽量选择同一道地产区药材。结论清心解瘀方标准汤剂制备方法稳定,多指标含量测定方法简便、快捷,指纹图谱方法稳定、相似度高,可为该方后续制剂质量控制提供参考。

HPLC测定通脉复方水提液中5种成分

目的：建立RP-HPLC同时测定通脉复方水提液中5种成分的方法。方法：采用岛津Inertsil ODS-3色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;以乙腈（A）-0.2%磷酸（B）为流动相,按梯度洗脱（0~15min,5%~15%A;15~50min,15%~35%A）,流速1mL/min,检测波长0~26min,240nm;26~29min,260nm;29~35min,334nm;35~50min,286nm,柱温30℃。结果：马钱苷、羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、丹酚酸B分别在0.156 7~5.014 56μg（r=0.999 9）,0.687 65~5.500 5μg（r=0.999 7）,0.044 75~0.716 02μg（r=0.999 9）,0.105 31~0.812 6μg（r=0.999 8）,0.997 9~12.833 1μg（r=0.999 8）范围内呈良好线性关系;平均回收率分别为97.60%,98.95%,103.85%,96.60%,96.79%,RSD分别为0.42%,0.51%,1.65%,0.93%,1.19%。结论：该法操作简单,结果准确可靠,可为优选通脉复方提取工艺提供参考。

一测多评法同时测定钩藤饮片中4种生物碱类化学成分

目的:建立超高效液相色谱法(UPLC)一测多评(QAMS)同时测定钩藤饮片中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种化学成分含量的方法,并验证该方法的可行性和准确性。方法:以钩藤饮片的4种成分为指标成分,以异钩藤碱为内标,分别计算得到钩藤碱、异去氢钩藤碱与去氢钩藤碱的相对较正因子,实现QAMS同时测定钩藤饮片中4种生物碱类成分含量。结果:在线性范围内,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的相对校正因子(RCF)分别为1.02、0.97、1.00、1.01,在不同实验条件下RCF的系统耐用性良好。结论:建立的以异钩藤碱为内标,同时测定4种钩藤生物碱的一测多评方法稳定、准确度高、适应性好,可用于钩藤饮片中4种生物碱类化学成分的含量测定。

经典名方清上蠲痛汤的煎煮工艺对其 指标成分转移率的影响

目的:通过考察经典名方清上蠲痛汤的煎煮时间、加盖与否和锉散粒度等工艺参数对其指标成分转移率的影响,确定清上蠲痛汤的最佳煎煮工艺。方法:建立清上蠲痛汤指标成分含量测定方法,以指标成分的含量和出膏率为指标,对清上蠲痛汤的煎煮工艺和锉散粒度进行优选。结果:确定了清上蠲痛汤的煎煮工艺为取日剂量饮片,粉碎(过4目筛),加水406 mL浸泡30 min,煮沸后再煎煮20 min,滤液趁热过200目筛,残渣加水316 mL,煮沸后再煎煮15 min,趁热过200目筛,合并2次滤液。结论:从指标成分含量和出膏率等方面考察清上蠲痛汤的煮散质量,较为全面地展示全方信息,为清上蠲痛汤后期标准研究和其他煮散类经典名方的煎煮工艺研究提供参考。

经典名方半夏厚朴汤物质基准量值传递分析

目的:制备15批半夏厚朴汤物质基准,通过特征图谱、含量测定等方法对药材-饮片-物质基准全过程进行量值传递分析。方法:以物质基准中特征图谱、多指标成分含量、转移率、出膏率为评价指标,确定半夏厚朴汤物质基准相关表征参数范围。采用SPSS 23.0及SIMCA 13.0软件对特征图谱共有峰进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析。结果:特征图谱共确定了12个共有峰,相似度良好,且指认了6个特征峰,分别为咖啡酸(F2)、野黄芩苷(F8)、迷迭香酸(F9)、6-姜辣素(F10)、和厚朴酚(F11)、厚朴酚(F12)。其指标成分厚朴酚与和厚朴酚总质量分数为0.09%~0.40%,转移率为7.18%~18.96%;野黄芩苷的质量分数为0.13%~0.33%,转移率为46.04%~88.30%;迷迭香酸的质量分数为0.20%~0.74%,转移率为29.91%~72.94%;出膏率控制在9.01%~15.83%。统计分析表明,15批样品聚为2类,筛选出4个影响样品质量的色谱峰,依次为F9、F8、F3、F4。结论:采用特征图谱、出膏率及指标性成分含量、转移率相结合的评价模式,对经典名方半夏厚朴汤物质基准的量值传递过程进行分析,初步建立其物质基准质量标准,可为经典名方半夏厚朴汤的后续研发及相关制剂的质量控制提供参考。

五子衍宗丸对生殖系统的保护作用及其临床研究进展

五子衍宗丸由枸杞子、菟丝子、五味子、覆盆子、车前子5味药组成,具有填精补髓、补益肾气的功能,是治疗男性生殖系统疾病的常用药方。五子衍宗丸能够增强睾丸生精功能,调节下丘脑-垂体-性腺轴功能,还有抗衰老、抗氧自由基、增强免疫等多种作用,现对其在生殖系统保护作用及其临床研究进展做一综述。

Box-Behnken响应曲面结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺

目的:采用Box-Behnken响应曲面结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺。方法:以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、马钱苷、毛蕊花糖苷、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、总多糖含量及干膏率为综合评价指标,根据单因素试验结果,按照响应曲面3因素3水平安排进行试验,考察提取次数、提取时间、加水量对综合评分的影响。结果:最佳提取工艺为加9倍水,提取4次,每次50 min,提取次数和加水量对综合评分有显著性影响,而交互作用对综合评分影响不显著。结论:响应曲面法可用于通脉复方提取工艺优选,优选的工艺稳定,合理可行。

波长切换高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中7个成分的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、（R,S）-告依春、射干苷、咖啡酸的含量。方法：采用岛津InertSustain C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-0.3%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0mL·min-1;进样量为5μL;检测波长为240 nm（0-25 min,检测（R,S）-告依春）、327 nm（25-39 min,检测绿原酸和咖啡酸）、240 nm（39-45 min,检测葛根素和马钱苷）、265 nm（45-53 nm,检测射干苷）、228 nm（53-65 min,检测连翘苷）;柱温为30℃。结果：绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、射干苷、咖啡酸、（R,S）-告依春7个成分的进样质量浓度分别在4.56-228μg·mL-1（R2=0.999 9）、4.04-202μg·mL-1（R2=0.999 8）、8.10-405μg·mL-1（R2=0.999 9）、8.06-161μg·mL-1（R2=0.999 9）、2.10-105μg·mL-1（R2=0.999 9）、3.46-173μg·mL-1（R2=0.999 9）、4.58-229μg·mL-1（R2=0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;各组分分离度良好;加样回收率（n=6）分别为99.35%（RSD为2.6%）、100.76%（RSD为1.5%）、100.34%（RSD为0.9%）、100.63%（RSD为1.5%）、100.31%（RSD为1.7%）、100.70%（RSD为1.6%）、99.03%（RSD为1.7%）。结论：本研究建立的含量测定方法符合方法学验证要求,可用于青翘抗毒颗粒7个指标性成分的同时测定。

中药复方清达颗粒标准汤剂的研究

目的:通过研究中药复方清达颗粒标准汤剂质量指标,来优选工艺和制定质量标准。方法:依据医疗机构煎药规范,制备清达颗粒15批标准汤剂;采用UPLC建立清达颗粒标准汤剂特征图谱;采用一测多评法对清达颗粒标准汤剂中各药味指标成分进行含量测定,通过对15批次清达颗粒标准汤剂中出膏率、指标成分含量、转移率、特征图谱进行分析,建立清达颗粒标准汤剂物质基准。结果:根据15批清达颗粒标准汤剂测定结果,拟合建立清达颗粒标汤特征图谱对照图谱,清达标准汤剂中出膏率波动范围为13.92%~25.84%;清达标准汤剂天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷及其衍生物总含量的波动范围为1.39%~2.90%,指标成分总含量转移率波动范围为50.64%~94.04%;钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱总含量的波动范围为0.04%~0.20%,指标成分总含量的转移率波动范围为14.24%~61.88%;莲子心中莲心碱、甲基莲心碱和异莲心碱总含量的波动范围为0.17%~0.59%,指标成分总含量的转移率波动范围为13.44%~42.66%;黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷总含量的波动范围为5.43%~10.09%,指标成分总含量转移率波动范围为33.67%~62.52%。结论:本研究建立的清达颗粒标准汤剂质量指标合理,可用于清达颗粒工艺研究和质量标准制订。

克敏芪丹方总黄酮苷的大孔树脂纯化工艺优选

目的:筛选适合分离纯化克敏芪丹方中总黄酮苷的大孔吸附树脂并优选其纯化工艺参数。方法:以总黄酮苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的比吸附量、洗脱率为指标,考察D101,AB-8,S-8型大孔吸附树脂对有效成分含量的影响,通过单因素试验考察上样液浓度、上样量及乙醇用量对克敏芪丹方中总黄酮苷大孔树脂纯化工艺的影响。采用HPLC测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,检测波长260 nm;采用UV测定总黄酮苷含量,检测波长509 nm。结果:药液浓缩至相对密度约1.05(60℃),加水稀释至0.5 g·m L^(-1),通过径高比1∶6的AB-8型大孔树脂柱,加1 BV水洗除杂,上样吸附和除杂流速均为2 BV·h^(-1),上样量为每1 g树脂上1.5倍生药量药液;加70%乙醇4 BV洗脱,洗脱流速4 BV·h^(-1),收集洗脱液。总黄酮苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的转移率分别为78.22%,43.81%。结论:该纯化工艺合理、稳定,可推广于克敏芪丹方的大生产应用。

莲子心药材含量测定标准修订建议

目的:改进并优化莲子心中有效成分莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量测定方法,为《中华人民共和国药典》中莲子心含量测定标准修改提供参考。方法:建立莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱一测多评测定方法。在全国道地产区和主产区取样38批样品,对其进行含量测定,确定莲子心中莲心碱含量范围和莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总含量范围。结果:莲心碱含量均值为0.156%,范围为0.019%~0.763%,仅31.579%符合《中华人民共和国药典》标准。莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总量均值为1.586%,范围为0.659%~2.059%。结论:建议莲子心药材质量标准中含量测定指标由莲心碱修改为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总量,含量限度建议定为不得低于1.10%。

吴茱萸-木瓜药对配伍提取工艺的优选

目的研究吴茱萸-木瓜药对配伍的最佳提取条件。方法首先进行提取条件的单因素考察,然后用多指标活动水平的正交设计法,将吴茱萸碱、吴茱萸次碱、总黄酮的提取率和干膏率作为评价指标,考察提取的乙醇浓度、溶剂用量、提取时间和提取次数等因素。结果吴茱萸-木瓜药对的配伍提取最佳工艺为55%乙醇回流提取两次,第1次加12倍量提取50 min,第2次加4倍量提取30 min。结论木瓜对吴茱萸有效成分提取有影响。经过优选的吴茱萸-木瓜药对配伍提取工艺,为其治疗痛风病的物质基础及作用机制研究奠定了基础。

基于UPLC指纹图谱及一测多评法的天麻标准汤剂质量评价研究

建立天麻标准汤剂中存在转化关系的6种成分的一测多评方法和指纹图谱,验证该方法的准确度及可行性,并对标准汤剂质量进行评价。采用超高效液相色谱技术,以天麻素为内标物,通过考察柱温、流速、不同色谱柱以及多点浓度校正,确定对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷与天麻素的相对校正因子。测定18批天麻标准汤剂总含量,计算相似度。比较标准曲线法,外标一点法和一测多评法测量结果,结果表明一测多评法,外标一点法和标准曲线法的含量测定结果无显著差异,通过分析不同产地标准汤剂结果可以看出,来源于安徽、云南制得天麻标准汤剂质量较优,陕西、湖北次之,甘肃相对较差,且多批次指纹图谱相似度均在0.90以上。以天麻素为内标物,一测多评测定天麻标准汤剂中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷等6个成分总含量,结合指纹图谱的方法准确、可行、快捷,可用于天麻标准汤剂质量评价体系的建立,亦可对天麻药材饮片等原料质量标准研究提供参考。

广藿香UPLC指纹图谱研究及基于网络药理学的广藿香潜在质量标志物预测

目的基于UPLC指纹图谱、质量标志物"五原则"和网络药理学,研究道地产区不同产地广藿香药材,预测广藿香治疗病毒感染和胃溃疡的潜在质量标志物。方法建立广藿香UPLC指纹图谱,利用SIMCA-P14.1分析软件对14批药材共有峰进行聚类分析,利用偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discrimination analysis,PLS-DA)筛选共有峰组间主要差异成分。基于质量标志物"五原则",对差异成分进行初步分析,进一步采用网络药理学,通过相应数据库检索差异成分、病毒感染和胃溃疡疾病靶点。采用David 6.8数据库对共有靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,同时构建"成分-靶点-疾病-通路"网络,分析广藿香主要活性成分和关键靶点。结果UPLC指纹图谱研究结合聚类分析结果显示,广东省2个产地广藿香药材存在一定差异。经PLS-DA分析,筛选出4个差异成分,依次为毛蕊花糖苷、广藿香酮、紫葳新苷和列当苷。根据质量标志物"五原则"结合网络药理学分析结果,预测广藿香主要活性成分为广藿香酮和毛蕊花糖苷,两者主要通过作用于ERBB2、EGFR、TLR4、AKT1、TNF靶点,调控TLR、ErbB、MAPK等信号通路,发挥抗病毒、调节肠胃功能等作用。结论建立的UPLC指纹图谱方法简便,筛选的2个活性成分毛蕊花糖苷和广藿香酮可作为广藿香潜在的质量标志物,为广藿香药材质量的控制和药效相关机制的研究提供参考。