目的:探讨白花丹素作为一种新型的铁死亡诱导剂在膀胱癌抑制中的作用机制。方法:本研究中使用了膀胱癌细胞T24。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测白花丹素(0.1、1、2、3、6、12、24、48μmol·L^(-1))对T24细胞活力的影响。...目的:探讨白花丹素作为一种新型的铁死亡诱导剂在膀胱癌抑制中的作用机制。方法:本研究中使用了膀胱癌细胞T24。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测白花丹素(0.1、1、2、3、6、12、24、48μmol·L^(-1))对T24细胞活力的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)凋亡试剂盒检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞凋亡的影响。采用不同的抑制剂(铁死亡抑制剂Fer-1,凋亡抑制剂VAD,坏死性凋亡抑制剂Nec-1)与白花丹素(6μmol·L^(-1))联合使用。采用活性氧荧光探针(DCFH-DA),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测不同浓度的白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞内活性氧水平,MDA和GSH的含量,脂质过氧化荧光探针(C11-BODIPY)荧光探针检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞中过氧化物水平的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))细胞中溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化酶(GPX4)、核因子E2相关因子-2(Nrf-2)和Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,白花丹素组T24细胞的活性明显降低(P<0.05),IC50为3.52μmol·L^(-1)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1))T24细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与单独使用6μmol·L^(-1)的白花丹素组比较,铁死亡抑制剂和凋亡抑制剂组能够逆转6μmol·L^(-1)的白花丹素对T24细胞增殖抑制作用(P<0.05)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1)),T24细胞ROS、MDA及脂质过氧化物的含量明显升高,GSH水平明显降低,铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4以及Nrf-2/Keap1明显降低(P<0.05)。结论:白花丹素能诱导细胞铁死亡,其机制与Nrf-2/Keap1信号通路有关。展开更多
文摘目的:探讨白花丹素作为一种新型的铁死亡诱导剂在膀胱癌抑制中的作用机制。方法:本研究中使用了膀胱癌细胞T24。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测白花丹素(0.1、1、2、3、6、12、24、48μmol·L^(-1))对T24细胞活力的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)凋亡试剂盒检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞凋亡的影响。采用不同的抑制剂(铁死亡抑制剂Fer-1,凋亡抑制剂VAD,坏死性凋亡抑制剂Nec-1)与白花丹素(6μmol·L^(-1))联合使用。采用活性氧荧光探针(DCFH-DA),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测不同浓度的白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞内活性氧水平,MDA和GSH的含量,脂质过氧化荧光探针(C11-BODIPY)荧光探针检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))对T24细胞中过氧化物水平的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^(-1))细胞中溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化酶(GPX4)、核因子E2相关因子-2(Nrf-2)和Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,白花丹素组T24细胞的活性明显降低(P<0.05),IC50为3.52μmol·L^(-1)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1))T24细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与单独使用6μmol·L^(-1)的白花丹素组比较,铁死亡抑制剂和凋亡抑制剂组能够逆转6μmol·L^(-1)的白花丹素对T24细胞增殖抑制作用(P<0.05)。与空白组比较,白花丹素组(1.5、3、6μmol·L^(-1)),T24细胞ROS、MDA及脂质过氧化物的含量明显升高,GSH水平明显降低,铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4以及Nrf-2/Keap1明显降低(P<0.05)。结论:白花丹素能诱导细胞铁死亡,其机制与Nrf-2/Keap1信号通路有关。