大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

目的合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清。方法采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联。用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量。结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性。兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)%,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)%。结论本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础。

利用免疫亲和色谱柱特异性敲除甘草酸的方法学研究

目的制备特异性敲除甘草酸的免疫亲和色谱柱。方法抗甘草酸单克隆抗体与CNBr活化的Sepharose 4BTM凝胶偶联制备甘草酸特异性敲除免疫亲和色谱柱,利用HPLC法测定敲除液与洗脱液中甘草酸质量浓度,考察甘草酸免疫亲和色谱柱的最大载样量、敲出率、精密度、准确度及稳定性等参数。结果甘草酸免疫亲和色谱柱的最大载样量为1.326 11 mg;日内及日间精密度总RSD分别为0.65%,相对误差(RE)为0.37%;免疫亲和色谱柱稳定性实验显示32 d内甘草酸敲除率的RSD为1.37%,稳定性良好。结论制备的甘草酸特异性敲除免疫亲和色谱柱能快速、高效、稳定地敲除甘草酸。