苏湖肉羊选育群羔羊体重与体尺性状的相关性及生长曲线的拟合

为了研究苏湖肉羊选育群早期体重与体尺的相关性及其生长发育规律,试验选取了434只苏湖肉羊选育群羔羊,测定初生、2月龄和6月龄的体重、体尺数据,对体重与体尺间的相关性进行分析。通过Logistic、Gompertz和Von Bertallanffys模型对公母羊生长发育规律进行拟合分析,估算拐点体重、拐点月龄和最大月增长量。结果表明,苏湖肉羊选育群公羊在初生、2月龄、6月龄时体重、体尺性状间均存在极显著相关性,胸围与体重的相关性最大;母羊在初生、2月龄、6月龄时体重均与各体尺性状呈极显著相关,胸围与体重的相关性最大。3种模型均能很好地对公母羊生长曲线进行拟合(公羊拟合度R2>0.947,母羊拟合度R2>0.933)。综合3个模型估计值与实际值的比较,Logistic模型对公羊体重的拟合效果更佳,Gompertz模型对母羊体重的拟合效果更佳,说明Logistic模型更适用于拟合苏湖肉羊选育群公羊的生长曲线,Gompertz模型更适用于拟合苏湖肉羊选育群母羊的生长曲线。

苏湖肉羊(暂定名)与湖羊早期生长发育性状比较的研究

为评价苏湖肉羊(暂定名)的早期生长发育性状,将0、1、2、6月龄的苏湖肉羊与同龄同性别湖羊的体重、体尺进行比较,并利用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy生长模型对体重进行曲线拟合。实验随机选择湖羊214只(公羊96只、母羊118只),苏湖肉羊309只(公羊138只、母羊171只)分别对0、1、2、6月龄的体重、体长、体高、胸围、管围进行测定。研究结果表明:湖羊和苏湖肉羊初生体重没有差异,1、2、6月龄苏湖肉羊的平均体重均显著大于湖羊,6月龄苏湖肉羊公羊平均日增重为235.93g/d,母羊平均日增重为184.30 g/d。在0、2、6月龄期间湖羊体长均显著大于苏湖肉羊;6月龄时苏湖肉羊体高、胸围、管围均显著大于湖羊。在不同的生长模型中,Von Bertalanffy模型对湖羊和苏湖肉羊体重的拟合度最好。通过比较苏湖肉羊和湖羊的早期生长性状和体重生长模型,可为日后肉用绵羊选育提供一些科学依据。

鸡miR-1749生物信息学分析及真核表达载体构建

为研究鸡miR-1749功能及其前体rs15860000(C>T)不同基因型对成熟miRNA生成的影响,采用Mfold软件预测C>T突变对miR-1749前体二级结构能值的影响;选用pc DNA3.1-EGFP质粒,构建miR-1749前体不同等位基因的真核表达载体并转染DF1细胞,检测成熟miR-1749的表达;利用Target Scan和miRDB软件预测miR-1749的靶基因,并将靶基因的并集在DAVID数据库进行GO功能富集和KEGG信号转导通路分析。Mfold预测结果显示,miR-1749前体C>T突变影响其前体二级结构自由能值;成功构建pc DNA3.1-EGFP-pre-miR-1749-C和pc DNA3.1-EGFP-pre-miR-1749-T真核表达载体,转染DF1细胞后,不同基因型重组质粒miR-1749的表达量均显著高于空质粒组(P<0.01),T等位基因成熟miR-1749的表达量显著高于C等位基因(P<0.05)。2个软件预测结果显示,miR-1749靶基因的并集有250个基因,这些基因显著富集于Ras蛋白信号转导调控、GTPase介导信号转导调控、细胞稳态及胚后发育的生物学过程和GnRH、MAPK及细胞黏附分子的信号转导通路。

靶向敲除绒山羊lnc15479的CRISPR/Cas9构建及活性验证

为研究生长期和休止期lnc15479的差异表达在陕北白绒山羊毛囊周期性发育中的作用及功能,利用CRISPR/Cas9技术,在lnc15479的上、下游各设计1个sgRNA靶位点,构建CRISPR/cas9表达载体;并基于SSA修复机制,分别构建含有红色和绿色荧光标记的双荧光报告载体系统。通过将表达载体和报告载体共同转染HEK293T细胞,检测该CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明,lnc15479的CRISPR/Cas9表达载体成功构建,根据红色和绿色荧光表达情况及细胞计数的方法,该系统的工作效率约为20%。研究结果为进一步分析lnc15479的功能提供技术支持。

F17大肠埃希菌黏附湖羊小肠上皮细胞模型的初步建立

为探究F17大肠埃希菌对湖羊小肠上皮细胞的黏附机制,以体外培养的小肠上皮细胞和F17大肠埃希菌为研究对象,根据黏附后培养过夜的菌落数,调整黏附时间与感染复数(MOI),获取最佳黏附条件,初步建立F17大肠埃希菌黏附小肠上皮细胞的细胞模型;利用实时荧光定量PCR分别检测F17大肠埃希菌黏附后及脂多糖(LPS)诱导后的白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β的表达情况来鉴定该模型。结果表明:F17大肠埃希菌黏附3 h与黏附1、2、4 h时,黏附MOI=100∶1与MOI=200∶1、400∶1、500∶1差异显著,即F17大肠埃希菌黏附MOI=100∶1、黏附时间3 h为最佳黏附条件;小肠上皮细胞免疫相关基因的表达量随黏附时间、诱导时间发生显著变化;与LPS诱导模型相比, F17大肠埃希菌黏附模型更能模拟细菌黏附细胞的生理状态,说明模型建立成功。

基于转录组测序分析SOX18在湖羊毛囊毛乳头细胞中的功能

旨在初步探究SOX18基因在湖羊毛囊毛乳头细胞中的功能。本研究首先采用免疫荧光染色试验对从湖羊毛囊中分离的细胞进行鉴定,然后构建SOX18基因过表达载体并通过qRT-PCR和Western blot检测其过表达效率。将经过鉴定且生长状态良好的毛乳头细胞分为两组,分别转染SOX18过表达载体和空载质粒,每组3个重复。采用Trizol法提取6个样本的总RNA并构建cDNA文库,利用Illumina Novaseq6000平台进行测序,然后对样本相关性和差异表达基因进行分析,并对差异表达基因进行GO功能分类和KEGG通路注释,寻找SOX18基因调控的相关候选基因和通路。为确认转录组数据的准确性,随机选取9个差异表达基因进行qRT-PCR验证。免疫荧光结果显示,毛乳头相关基因在所分离的细胞中高表达,表明所分离的毛乳头细胞纯度高。qRT-PCR和Western blot检测发现,SOX18基因过表达能够增加毛乳头细胞中SOX18的mRNA和蛋白水平,表明构建的SOX18基因过表达载体可用于后续试验。转录组分析结果表明样本间相关性好,SOX18过表达组和对照组相比共发现157个基因差异表达,其中103个基因在SOX18过表达后上调,54个基因下调,qRT-PCR分析表明转录组数据准确性高。GO功能分析显示,一些差异基因富集于细胞进展和毛囊发育过程。KEGG富集分析表明,一些差异表达基因富集于细胞增殖和毛囊发育相关信号通路。GO功能分析和KEGG富集分析表明SOX18在毛乳头细胞的增殖和毛囊发育过程中起作用。本研究通过转录组测序分析发现SOX18可能通过影响细胞增殖和毛囊发育相关的基因和信号通路来影响毛乳头细胞增殖和毛囊生长发育,研究结果为解析SOX18基因在湖羊毛乳头细胞和毛囊中的分子调控机制提供了理论基础。

新农科背景下农科专业学位研究生复合型培养模式研究

随着农业现代化建设进入全产业链发展阶段,高层次复合型人才短缺日益凸显,而产业链与人才培养脱节现象严重制约了农业产业化的发展。笔者分析了农科专业学位研究生培养中存在的问题,探索了以产业链需求为导向的新农科复合型专业学位研究生培养模式构建的关键环节,为我国新农科人才培养提出合理化建议。