新型鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研究

为评价真核表达的鸭坦布苏病毒(DTMUV)融合表位蛋白的免疫原性,本研究通过生物信息学技术,对DTMUV E蛋白序列进行分析,筛选2段T细胞表位和8段B细胞表位,采用柔性肽将10条多肽进行拼接,人工合成串联表位基因,利用杆状病毒表达系统对该融合表位蛋白(rTBE)进行表达。经western blot和间接免疫荧光试验证明rTBE能够在在Sf9细胞中有效表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用Al(OH)3乳化(0.1μg/mL),分别以0.3 mL、0.6 mL和0.8 mL的剂量免疫雏鸭,ELISA抗体检测结果表明,rTBE可以诱导雏鸭产生高水平的IgG血清抗体;MTT结果表明,rTBE能够刺激雏鸭脾脏T淋巴细胞增殖;中和抗体试验结果表明,表达的rTBE和DTMUV病商品活疫苗均能够刺激机体产生针对DTMUV的中和抗体。Al(OH)3对照组雏鸭均未产生IgG血清抗体与中和抗体。攻毒保护试验结果显示,0.3 mL rTBE免疫组对雏鸭的保护率为70%,0.6 mL、0.8 mL和商品化疫苗免疫组对雏鸭的保护率均为100%,而Al(OH)3对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上结果表明,本研究预测及表达的DTMUV E蛋白融合表位蛋白rTBE具有免疫原性及保护力。以上研究结果为DTMUV新型亚单位疫苗的研究奠定了基础。

锡林浩特杂岩中斜长角闪岩锆石U-Pb年代学及Hf同位素研究

锡林浩特杂岩是一套经历强变形变质作用的变质岩,主要由黑云斜长片麻岩、角闪斜长片麻岩、斜长角闪片麻岩及变粒岩夹透镜状或脉状斜长角闪岩组成。查明其形成年龄、变质年龄对深入认识中亚造山带的形成演化具有重要意义。本次研究对锡林浩特杂岩中斜长角闪岩进行了SHRIMP锆石U-Pb测年和LA-MC-ICP-MS锆石Hf同位素组成分析,给出了锆石SHRIMP U-Pb的加权平均年龄为(316±4)Ma,该年龄代表斜长角闪岩的原岩形成年龄,表明锡林浩特杂岩不是前寒武纪地质体。通过锆石Hf同位素分析,εHf(t)值主要为正值(+4.1～+17.0),揭示其物源可能来自亏损地幔或壳幔混合。根据亏损地幔和古老地壳的锆石Hf同位素进行两端元的混合计算,得到斜长角闪岩原岩岩浆的源区以幔源增生组分为主体(经过计算壳幔混合比例大约1∶2)。部分锆石的模式年龄在1.8～2.5 Ga之间,表明斜长角闪岩的原岩在形成过程中有古元古代地壳物质的加入,通过兴蒙造山带和锡林浩特杂岩中斜长角闪岩的Hf模式年龄对比可知,物源可能来自兴蒙造山带内部。基于Hf同位素的两端元混合计算表明该区在晚古生代存在地壳增生。根据野外观察和室内岩石特征分析,该套杂岩可能是一套经历强变形与变质作用的晚古生代火山-沉积建造。

新城疫病毒感染绵羊诱导免疫应答反应的实验研究

为探索新城疫病毒(NDV)作为羊病毒病疫苗载体的可行性,验证NDV感染绵羊的可能性,本研究采用NDV Clone-30株分别通过滴鼻和气管灌注两种途径接种绵羊,接种后观察临床症状,检测接种动物排毒情况,通过血凝抑制试验检测接种绵羊特异性血凝抑制抗体,ELISA试验检测接种绵羊血清特异性IgG抗体,微量中和试验检测接种绵羊血清中和抗体。研究结果表明,NDV在绵羊体内是非致病性的,并且通过两种接种途径在绵羊体内均可以产生血凝抑制抗体、NDV特异性IgG抗体和中和抗体反应。本研究结果表明NDV有可能作为宿主限制性疫苗载体用于预防无特效疫苗的羊类疾病,且与气管灌注接种途径比,滴鼻接种途径相对安全。

声学CT储粮温度监测收发器阵列设计

针对声波收发器阵列设计的合理性直接影响声学CT系统的测量实时性及温度场重建精度等问题,提出了声学CT储粮温度监测收发器阵列设计方法.该方法对围绕圆筒形仓布置的声波收发器数量、布局和有效声波路径选择等参数进行了计算机仿真设计.三种典型的三维模型温度场重建结果表明,有效声波传播路径选择、收发器布置的层数、每层布置收发器的个数都会对模型温度场重建质量产生较大影响.通过对声波收发器阵列的仿真设计,可优化收发器阵列各参数,提高声学CT系统的性能和温度场重建精度.

鸭坦布苏病毒江苏XZ株的分离和鉴定

从江苏徐州地区分离到的以引起樱桃谷鸭产蛋下降和死亡为特征的1株病毒，命名为XZ株。对该病毒进行电镜观察、血凝试验、ELD50测定、RT—PCR扩增特异性目的基因、序列比对分析和动物回归试验。结果显示，分离毒株能致死鸭胚和鸡胚，电镜下观察到球形病毒粒子，不具有血凝性，对病料和接毒鸭胚尿囊液进行RT—PCR，均可扩增出基因片段，其核苷酸序列与坦布苏病毒奉贤株的相似性最高，为98．7％，与其他坦布苏病毒的毒株也具较高同源性，为86％～98％。用鸭胚分离毒株接种健康产蛋鸭，能复制出同样的疾病。结果表明分离病毒为鸭黄病毒属的坦布苏病毒。

山羊胎盘肽对幼犬免疫功能和抗氧化功能的影响

将24只健康幼犬随即分成4组,一个对照组(n=6),3个实验组:小剂量(1mg/kg.bw)胎盘肽(Goat placenta peptide,GPP)组(n=6)、中剂量(2mg/kg.bw)胎盘肽组(n=6)、高剂量(4mg/kg.bw)胎盘肽组(n=6)。在口服羊胎盘肽的前1 d和连续口服羊胎盘肽10 d后的第1 d各组采血样一次,测定外周血白细胞数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清溶菌酶活性、血清总抗氧化能力、血清谷胱甘肽过氧化物酶活性、血清超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。结果表明:连续给药10 d后实验组幼犬血液白细胞总数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清中溶菌酶活性与给药前相比均明显增加,并且中剂量组、高剂量组与给药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。同时犬血清总抗氧化能力、血清谷胱甘肽过氧化物酶活性及超氧化物歧化酶活性均较给药前相比有所增强,血清丙二醛含量与给药前相比明显减少,并且中剂量组、高剂量组与给药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。实验结果提示中剂量(2mg/kg.bw)、高剂量(4mg/kg.bw)羊胎盘肽可提高幼犬的免疫功能和抗氧化能力,从而提高幼犬的抗病防病能力。

声学层析成像传感器布局设计

声学传感器阵列设计的合理性直接影响声学层析成像系统对温度场重建质量。本文对声学传感器阵列的数量、布局等参数进行设计,利用计算机对不同结构下的传感器阵列进行仿真,比较了几种模型温度场的重建结果,初步确定了传感器阵列各参数的最优值。通过对声学传感器阵列的仿真设计,提高了声学层析成像系统的性能,据此参数设计的声学传感器阵列获得了较高的温度场重建精度。

H9N2亚型禽流感病毒HA-M2融合基因的真核表达及免疫原性研究

选择H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,与载体p Fast Bac HTA连接,构建重组真核表达质粒p Fast HTA-HA-M2。阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,转染Sf9昆虫细胞获得含HA-M2基因的重组杆状病毒,重组杆状病毒感染Sf9细胞72 h后,进行SDS-PAGE、间接免疫荧光试验和Western blot鉴定。利用目的蛋白免疫3周龄SPF鸡,采用ELISA测定抗体滴度,MTT试验检测T淋巴细胞增殖。结果显示,目的蛋白HA-M2在昆虫细胞中有特异性表达,能被H9亚型AIV免疫阳性血清所识别,可诱导高滴度的AIV特异性抗体。试验结果为新型禽流感通用疫苗的研制奠定了基础。

呼吸道合胞病毒融合蛋白F在重组杆状病毒表达系统中的表达及抗原性研究

目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含F基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫Balb/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT试验检测T淋巴细胞增殖。结果目的蛋白F在昆虫细胞中有特异性表达,能被F蛋白单克隆抗体所识别,该蛋白诱导了高滴度的RSV特异性抗体。结论成功克隆RSVF基因,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究开发RSV重组亚单位疫苗奠定了基础。

昆虫细胞表达基因ⅦNDVHN基因的免疫效力研究

利用杆状病毒表达系统对ⅦNDV HN基因进行表达研究。RT-PCR扩增HN基因,将其克隆到p Fast Bac HT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含HN基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72 h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫SPF鸡,间接ELISA测定抗体滴度,攻毒保护试验检测重组HN蛋白保护性。结果显示,目的蛋白HN在昆虫细胞中有特异性表达,该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体,具有良好的免疫原性;强毒攻击保护率达到75%,与La sota疫苗组保护率接近,均明显高于阴性对照组。上述结果为NDV新型亚单位疫苗奠定了基础。

鸭坦布苏病毒E基因重组杆状病毒的构建与间接ELISA检测方法的建立

研究旨在建立基于真核表达的鸭坦布苏病毒(DTV)E蛋白的诊断鸭坦布苏病毒病的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统,构建含有DTV E基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出55 ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid DTV E蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。利用该方法对135份来自江苏省的樱桃谷鸭血清样品进行检测,发现其血清阳性率达79.3%。表明建立的间接ELISA检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可以用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断。

人呼吸道合胞病毒亚单位疫苗的研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是在世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒之一,WHO要求对RSV要严加监控。RSV是副粘病毒科肺炎病毒属的单股负链非节段性RNA病毒。RSV疫苗的研制已有40多年的历史,但至今未被批准使用其疫苗。RSV膜表面融合蛋白F和黏附蛋白G两种糖蛋白,是激发机体产生保护性抗体的最主要的病毒抗原,亚单位疫苗的开发主要针对这两个蛋白。目前研究的有纯化的F糖蛋白(PFP)、BBG2Na、嵌合型F-G糖蛋白及纯化的F、G和基质蛋白M。本文就目前国内外所研究的RSV亚单位疫苗作一综述。

杆状病毒表面展示鸭坦布苏病毒E蛋白的免疫原性及保护效果的研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降。为评价真核表达DTMUV的E蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表面展示技术,构建表面展示DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒(r BV-DTMUV-E),将其感染昆虫细胞,从而将E蛋白展示在杆状病毒的表面,并对表达的重组E蛋白(r E)的免疫原性和保护效果进行研究。经western blot和间接免疫荧光试验证明r E能够在Sf9细胞中有效表达;并且呈可溶性表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用氢氧化铝乳化(0.1μg/m L),分别以0.2 m L、0.4 m L和0.6 m L的剂量免疫雏鸭,通过ELISA抗体检测结果证明,r E可以诱导产生高水平的Ig G血清抗体;MTT试验结果表明,r E能够刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示,其0.2 m L组免疫保护率为80%,0.4 m L和0.6 m L组保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定了基础。

新城疫病毒Clone 30株辅助表达系统的构建及真核表达

为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒Clone 30株NP、P和L基因的真核表达载体。根据Gen Bank中新城疫病毒Clone 30株的全长序列(Y18898.1),设计3对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒Clone 30株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCI-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。结果表明,重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。

呼吸道合胞病毒黏附蛋白G在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）是在世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒之一，首次感染多发生于1岁以内的婴儿，2月龄婴儿的发病率最高。感染该病毒后不能产生持久的免疫力，可以反复感染，是造成婴幼儿住院的主要原因，也是青少年、老年人以及免疫缺陷人群呼吸道感染的重要病原，因此世界卫生组织要求对其严加监控。呼吸道合胞病毒在我国不但有散发流行，而且还曾引起数次大规模的流行。在南方，呼吸道合胞病毒流行高峰主要在炎热的夏秋季，而北方则发生在寒冷的冬春季。用单克隆抗体对我国部分地区呼吸道合胞病毒分离株亚型监测的结果表明，目前我国流行的呼吸道合胞病毒主要为A亚型。

羊胎盘肽对犬免疫功能的影响

将24只幼犬随机分成4组,1个对照组(n=6),3个试验组(n=6),连续灌服羊胎盘肽10 d,前后各1 d各采血样1次,测定白细胞数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量及溶菌酶活性。结果表明连续给药10 d后幼犬血液白细胞总数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清中溶菌酶活性与给药前相比均明显增加,并且中、高剂量组与用药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。试验结果提示羊胎盘肽可提高幼犬的免疫功能。

猪流行性腹泻的诊断与综合防治措施

1猪流行性腹泻的诊断诊断猪病毒性腹泻的目的是区分致病因素是细菌性、病毒性,还是其他致病因子引起,便于进行有效的综合治疗。由于基层兽医人员没有实验室检验条件,而且病畜不能等到化验结果出来才去治疗,这里根据笔者多年的实践介绍一种简易判断是细菌性病原还是病毒性病原的方法,

莱姆病病原体的研究进展

莱姆病是一种新发现的人兽共患传染病,在人和动物中广泛流行.以硬蜱为传播媒介,目前世界各国流行甚广.笔者对莱姆病病原体、传播媒介、易感动物、流行特点、临床症状进行了系统综述.

鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭产蛋量急剧下降。本研究通过杆状病毒表达系统,利用蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,Mels)构建分泌表达DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒,将其感染Sf9昆虫细胞,从而分泌表达DTMUV E蛋白,并对该表达E蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。经Western blotting、IFA试验证明E蛋白可以在Sf9昆虫细胞培养上清中分泌表达;通过免疫雏鸭试验、间接ELISA结果证明E蛋白可以诱导产生高水平的IgG血清抗体;MTT试验结果显示E蛋白能刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示0.3mL组免疫保护率为80%,0.6mL组和0.8mL组保护率均为100%,而PBS对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。上述研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定基础。