白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化和NF-κBmRNA的影响

目的观察白藜芦醇(Res)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化和NF-κBmRNA表达水平的影响。方法 90只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、Res低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量干预组及地塞米松(DM 3 mg/kg)干预组,以气管内注入BLM法制备肺纤维化大鼠模型,采用Masson染色观察各组肺组织的纤维化改变情况,并用RT-PCR方法测定肺组织中NF-κB mRNA的表达水平。结果 1.模型组及Res低剂量组肺组织胶原纤维随时间的推移明显增多,Res高、中剂量组及DM干预组肺组织病理变化较模型及Res低剂量组明显减轻;2.模型组及Res低剂量组NF-κB表达水平明显高于对照组,并呈现逐渐增高的趋势,Res高、中剂量组及DM干预组变化趋势与模型组类似,但表达水平均低于同时间点的模型组及Res低剂量组。结论 NF-κB的高表达在肺纤维化的发病机制中起重要作用,Res抑制NF-κB的高表达可能是其防治肺纤维化的机制之一。

不同剂量白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预比较

目的比较不同剂量的白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用。方法 90只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、Res低剂量干预组、Res中剂量干预组、Res高剂量干预组、DXM干预组。博莱霉素(5 mg/kg)气管内灌注建立大鼠肺纤维化模型。各组均采用HE染色、Masson染色、HYP含量测定。观察不同剂量的白藜芦醇对大鼠肺纤维化的干预作用。结果 Res中、高剂量干预组及DXM干预组大鼠一般情况均较模型组好。HE染色、Masson染色显示Res低剂量干预组大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度较模型组没有显著差异(P均>0.05)。Res中、高剂量干预组及DXM干预组病理组织染色可见肺泡炎和肺纤维化程度在各时间点均明显轻于模型组(P<0.05)。HYP含量测定中Res低剂量干预组与模型组无显著性差异(P>0.05),而Res中、高剂量干预组及DXM干预组各时间点HYP含量均低于模型组(P<0.05)。结论不同剂量的白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用不尽相同。中、高剂量白藜芦醇的干预作用基本同地塞米松的干预作用。

大黄素通过抑制TGF-β1/ADAMTS-1通路的活性减轻大鼠肺纤维化

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/含1型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)信号通路在大黄素抗肺纤维化中的作用。方法按随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为6组:正常对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量组(20 mg/kg)、大黄素高剂量组(80 mg/kg)和泼尼松组(5 mg/kg),每组10只大鼠。假手术组大鼠气管内注入生理盐水,而后4组大鼠气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,次日起,大黄素低、高剂量组大鼠分别以20 mg/kg、80 mg/kg大黄素2 m L灌胃,泼尼松组予5 mg/kg醋酸泼尼松2 m L灌胃,其余3组则以生理盐水2 m L灌胃。造模后第28天处死大鼠,取血并分离肺组织。常规HE和Masson染色观察肺组织病理改变,荧光实时定量PCR检测各组大鼠肺组织中TGF-β1、ADAMTS-1、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA的水平,Western blot法检测肺组织TGF-β1、ADAMTS-1、Col1、Col3蛋白水平,ELISA测定血清中1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平。结果与模型组比较,各药物处理组肺泡炎及肺纤维化程度明显减轻。与正常对照组、假手术组比较,模型组肺组织TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平以及血清P1CP、P3NP浓度升高,而肺组织ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平降低。与模型组相比,给予低、高剂量大黄素或泼尼松处理后,肺组织TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平及血清P1CP、P3NP浓度则下调,肺组织ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上调。与大黄素低剂量组相比,大黄素高剂量组和泼尼松组上述指标明显改善,但后二者相比无明显差异。结论大黄素抑制TGF-β1/ADAMTS-1途径的活性引起肺组织Col1、Col3降解增多,是其抗肺纤维化的重要机制。

中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸通过激活Keap1/Nrf2信号通路增强肺纤维化大鼠抗氧化能力

目的观察中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸(果王素)对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响,探讨其是否通过Kelch样ECH相关蛋白1(Keap 1)/核因子E2相关因子2(Nrf 2)信号通路发挥作用。方法随机将60只SD大鼠分为对照组、模型组、(60、120、180)mg/kg中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸处理组和5 mg/kg醋酸泼尼松组,每组10只。对照组大鼠以生理盐水气管内注射,其余5组大鼠则以博莱霉素A5气管内注射建立肺纤维化模型。第2天起,中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸处理组大鼠分别予(60、120、180)mg/kg中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸灌胃,泼尼松组以5 mg/kg醋酸泼尼松灌胃,其余2组予生理盐水灌胃。所有大鼠第28天处死,留取肺组织,HE和Masson染色观察肺部病变,通过试剂盒测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中Keap 1、Nrf 2蛋白水平。结果与模型组比较,(60、120、180)mg/kg中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸处理组和泼尼松组肺泡炎症和肺纤维化程度明显减轻,肺组织HYP、ROS、MDA含量、胞质Keap 1蛋白水平降低,而SOD、CAT、GSH-Px含量、胞核Nrf 2蛋白水平升高。此外,与60 mg/kg中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸处理组相比,(120、180)mg/kg中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸处理组和泼尼松组上述指标明显改善,但后三者之间比较无显著性差异。结论中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸能抑制大鼠肺纤维化,与激活Keap 1/Nrf 2信号通路增加抗氧化物生成有一定关系。

IL-17单克隆抗体对肺纤维化大鼠的保护作用及部分机制研究

目的探讨白介素(IL)-17单克隆抗体(m Ab)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用及相关机制。方法将♂SD大鼠75只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、非特异性Ig G组、IL-17 m Ab组,各组15只,后3组大鼠予以博莱霉素A5气管内注入构建肺纤维化模型,而假手术组给予等量生理盐水气管内注入。后2组于d 7、14、21分别给予非特异性IgG、IL-17 mAb尾静脉注射,其余3组给予等量生理盐水尾静脉注射。所有大鼠d 28处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot分析肺组织胞核核因子-κB(NF-κB)p65以及细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)蛋白表达情况,荧光实时定量PCR检测肺组织ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平,分离血清,采用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PIIINP)浓度。结果 IL-17m Ab组肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组及非特异性Ig G组(P<0.01)。模型组和非特异性Ig G组肺组织IL-17、IL-6、TNF-α含量、胞核NF-κB p65蛋白表达、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达以及血清PICP、PIIINP浓度较正常对照组及假手术组明显升高(P<0.01)。经IL-17 m Ab处理后,上述指标相比模型组和非特异性IgG组明显降低(P<0.01)。但非特异性Ig G组与模型组以及假手术组与正常对照组上述指标比较无差异(P>0.05)。结论 IL-17 mAb通过下调NF-κB表达,抑制肺组织炎症反应及减少胶原蛋白合成,对肺纤维化大鼠产生保护作用。

大黄素抑制肺成纤维细胞增殖及转分化和胶原蛋白合成

目的探讨大黄素对肺成纤维细胞增殖、向肌纤维母细胞转化、胶原合成的影响及相关机制。方法用二甲基亚砜(DMSO)和(0、10、20、40、80、160)μmol/L大黄素处理MRC-5人胚肺成纤维细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖。根据细胞增殖实验结果,以DMSO及(40、80)μmol/L大黄素分别培养MRC-5细胞48 h后,采用荧光实时定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶1(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA表达水平;Western blot法检测上述分子的蛋白水平。结果 MRC-5细胞增殖抑制率随着大黄素浓度的增加和处理时间的延长而逐渐增高。在处理48 h后,与对照组相比,(40、80)μmol/L大黄素处理组α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平均降低,而ADAMTS-1 mRNA与蛋白水平升高;与40μmol/L大黄素处理组比较,80μmol/L大黄素处理组α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达进一步下调,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达进一步上调。结论大黄素可抑制肺成纤维细胞增殖及其向肌纤维母细胞转化,并通过抑制TGF-β1/ADAMTS-1信号通路减少Col1、Col3合成。

miR-21通过下调ADAMTS-1表达促进大鼠肺纤维化

目的探讨微小RNA21(miR-21)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响及相关机制。方法收集特发性肺纤维化(IPF)患者及正常人的外周血各20份,采用荧光实时定量PCR检测miR-21表达。将45只SD大鼠随机分为对照组、miR-21激动剂(miR-21agomir)和miR-21拮抗剂(miR-21antagomir)组,每组15只。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型后,分别给予生理盐水、miR21 agomir、miR21 antagomir尾静脉注射,第28天处死所有大鼠。取出肺组织,行HE和Masson染色,通过荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测含1型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA与蛋白表达,分离血清,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)的含量。结果 IPF患者外周血miR-21表达水平明显高于正常人。miR-21 agomir组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度明显重于对照组,而miR-21 antagomir组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度显著轻于对照组。与对照组相比,miR-21 agomir组ADAMTS-1mRNA与蛋白表达水平降低,Col1、Col3的mRNA与蛋白表达水平及血清P1CP、P3NP水平均增加。但miR-21 antagomir组ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平较对照组升高,Col1、Col3的mRNA与蛋白表达水平及血清P1CP、P3NP含量较对照组减少。结论 miR-21促进博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化进展,其机制可能与下调ADAMTS-1表达及随后增加肺组织Col1、Col3含量有关。

硫化氢通过抑制TGF-β1/Smad信号通路抗大鼠肺纤维化

目的观察硫化氢(H2S)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其是否通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路发挥作用。方法 SD大鼠50只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、硫氢化钠(Na HS)组和地塞米松组,每组10只,假手术组大鼠以生理盐水气管内注入,而后3组大鼠以博莱霉素A5气管内注入制备肺纤维化模型。自第2天起,Na HS组、地塞米松组大鼠分别以Na HS、地塞米松腹腔注射,其余3组腹腔注射等量生理盐水。全部大鼠第28天处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过试剂盒测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA和蛋白表达。结果与模型组比较,Na HS组和地塞米松组肺泡炎症与肺纤维化程度明显减轻(P<0.01)。与正常对照组或假手术组比较,模型组肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平升高,但Smad 7 m RNA和蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。通过Na HS或地塞米松处理后,肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平减少,而Smad 7 m RNA和蛋白表达水平增加,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。然而,Na HS组与地塞米松组以及假手术组与正常对照组上述指标相比无显著性差异(P>0.05)。结论 H2S可能通过抑制TGF-β1/Smad信号转导通路下调α-SMA表达,从而减少ColⅠ、ColⅢ合成发挥抗大鼠肺纤维化作用。

白藜芦醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5生长的抑制作用

目的探讨白藜芦醇(Res)对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及相关机制。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,分别予20μL二甲基亚砜(DMSO)及0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1Res处理细胞24、48、72 h,通过MTT法分析细胞增殖抑制率。另外,以20μL DMSO(溶媒组)及50、100μmol·L-1Res孵育细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,行原位缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡指数(AI),应用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA与蛋白表达,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果随着Res浓度的升高和处理时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加(P<0.01)。在共同培养48h后,50、100μmol·L-1Res处理组S、G2/M期DNA比例及Cyclin D1、CDK4 mRNA与蛋白表达水平、Bcl-2蛋白表达水平降低,而G0/G1期DNA比例、AI、凋亡率及Bax蛋白表达水平增加,与溶媒组比较,差异均有显著性(P<0.01),并且100μmol·L-1Res效果强于50μmol·L-1(P<0.01)。结论Res能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与阻碍细胞周期进展及促进细胞凋亡有关。

博来霉素气管灌注构建肺纤维化模型大鼠肺组织低氧诱导因子1α的动态表达

背景:低氧诱导因子1α是介导低氧反应的核转录因子,其对肺纤维化的作用尚不明确。目的:观察低氧诱导因子1α在肺纤维化发病中的作用。方法:采用博来霉素(5mg/kg)一次性气管内灌注建立SD大鼠肺纤维化模型。造模后7,14,28d观察大鼠肺组织的病理学改变及肺组织中低氧诱导因子1α蛋白及mRNA的动态表达。结果与结论:博来霉素灌注后,大鼠肺组织炎症反应明显,并逐渐出现纤维化及胶原纤维沉积。免疫组织化学及RT-PCR结果显示,在大鼠肺纤维化发病过程中,低氧诱导因子1α蛋白及mRNA的表达趋势相同,即随造模时间的延长表达逐渐增多,并于造模后第14天达高峰。提示低氧诱导因子1α在大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,其过度表达可能参与了肺纤维化的发生与发展。

核转录因子κB在大鼠肺纤维化中的表达及白藜芦醇干预作用

目的观察核转录因子kB（NF-kB）在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及白藜芦醇（Res）干预作用。方法90只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、Res低（25mg／kg）、中（50mg／kg）、高（100mg／kg）剂量组及地塞米松（DM，3mg／kg）干预组，以气管内注入博莱霉素法制备肺纤维化大鼠模型，观察各组肺组织炎症及纤维化的改变情况，检测各组肺组织羟脯氨酸含量，并用免疫组织化学方法测定肺组织中NF-kB蛋白的表达水平。结果①在实验性大鼠肺纤维化发病过程中，呈现典型的肺泡炎（7d）、纤维组织增生（14d）及稳定的肺纤维化（28d）等表现。②与对照组[（265．20±8．90）ug／g，（325．60±31．26）ug／g，（325．80±48．75）ug／g]相比，第7、14、28天模型组[（486．00±36．15）ug／g，（770．60±63．29）ug／g，（1065．00±181．31）ug／g]及Res低剂量组[（454．80±46．61）ug／g，（803．20±126．96）ug／g，（962．00±184．12）ug／g3中羟脯氨酸含量随纤维化进展逐渐增高（P值均〈0．05），Res高[（363．80±27．31）ug／g，（511．40±43．62）ug／g，（530．20±161．04）ug／g]、中剂量组[（376．60±30．15）ug／g，（510．00±76．66）ug／g，（596．40±139．00）ug／g]及DM干预组[（349．60±41．53）ug／g，（475．60±38．64）ug／g，（524．80±135．89）ug／g]变化趋势与模型组及Res低剂量组类似，但羟脯氨酸含量低于同时间点的模型组及Res低剂量组（P值均〈0．05）。③第7、14、28天模型组（28．02±1．36，42．22±1．29，54．33±0．58）及Res低剂量组（27．61±1．28，42．16±0．99，53．86±0．76）中NF—kB表达水平高于对照组（2．89±0．19，3．01±0．33，2．90±0．28，P值均〈0．05），并呈现逐渐增高的趋势，Res高（23．04±1．46，27．80±1．48，33．92±0．96）、中剂量组（23．67±0．59，28．38±0．64，34．28±1．08）及DM干预组（22．14±2．14，27．22±1．89，33．18±1．44）变化趋势与模型组类似，但表达水平均低于同时间点的模型组及Res低剂量组（P值均〈0．05）。结论NF-kB的高表达在肺纤维化的发病机制中起重要作用，Res抑制NF-kB的高表达可能是其防治肺纤维化的机制之一。

黄芪甲甙干预大鼠肺纤维化相关基因的时空表达

目的:通过基因芯片技术研究大鼠肺纤维化不同时间点和应用黄芪甲甙干预后的基因差异表达,寻找肺纤维化的致病基因和应用黄芪甲甙进行干预治疗相关的靶基因。方法:用含41000个基因的安捷伦大鼠芯片同模型组7天和模型组28天以及BLM+黄芪甲甙组28天的大鼠肺组织进行杂交,利用安捷伦基因扫描仪扫描杂交图像,模型组7天和BLM+黄芪甲甙组与模型组28天进行比较,筛选Ratio值大于2的差异基因进行分析,重复3次。结果:模型组28天对比7天共有2063个基因表达差异,筛选109个基因,43个上调,66个下调。黄芪甲甙28天组对比模型28天组4269个基因表达差异,筛选68个基因,45个上调,23个下调。通过GO和PATHWAY分析软件,提示有不同的功能分类和信号传导途径。结论:基因芯片为了解肺纤维化不同时间点的基因表达的异常,以及黄芪甲甙治疗肺纤维化的可能机制和药物靶基因的提供了理论基础。

慢性阻塞性肺疾病患者鼻吸气压与肺功能和呼吸耐力相关性研究

目的探索鼻吸气压(SNIP)评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)吸气肌力有效性以及SNIP与COPD患者病情严重程度的相关性。方法前瞻性、随机、对照入组设计,纳入49例COPD稳定期男性患者为病例组,20名健康男性为对照组。测定对照组及病例组的身体特征、肺功能、呼吸肌强度(SNIP、MIP)、6分钟步行距离(6MWD),对SNIP与肺功能、6MWD进行分析。结果病例组的SNIP值低于对照组(t=-2.733,P<0.05)。病例组SNIP与MIP、6MWD、第1秒用力呼气容量占预计值百分比(FEV1%pred)、第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)各项指标均显著相关(r=0.837、0.509、0.512、0.563,P值均<0.05)。结论SNIP可有效的评价COPD患者吸气肌功能。COPD患者SNIP值较正常人群明显下降。SNIP与COPD严重程度存在关联,可以成为COPD病情综合评估的参考指标。

阻塞性睡眠呼吸暂停合并肺动脉高压肺血管重塑的机制

阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)是一种多数由上呼吸道,特别是鼻、咽部位的解剖学狭窄导致的,在睡眠状态下反复出现呼吸暂停和/或低通气、睡眠中断,从而使机体发生一系列病理生理改变的临床综合征。OSA是一种常见疾病和多发病,对人类的健康危害极大,尤其是OSA合并肺动脉高压患者预后差。OSA与肺动脉高压密切相关,OSA既可以是肺动脉高压的病因也可以是合并症,因此其发病机制复杂。研究证实,肺动脉重塑在OSA的肺动脉高压的发生、发展过程中起着重要的作用。本综述旨在对近年来肺动脉重塑在OSA合并肺动脉高压形成过程中主要机制的进展进行总结,为临床进一步研究提供参考。