长链非编码RNA在肝细胞癌中的作用机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种常见的恶性肿瘤,具有发病率高、生存率低等特点,目前的治疗方法缺乏有效性。HCC的发生发展是一个复杂的过程,其潜在的分子机制目前尚未完全阐明。长链非编码RNA(lncRNA)参与调控细胞分化、增殖、死亡、代谢等生物学过程,在HCC进展中也发挥重要作用。lncRNA可通过调节基因表达或蛋白活性影响HCC细胞增殖、死亡、迁移、血管生成、免疫逃逸以及细胞代谢重编程等。因此,lncRNA可作为HCC潜在治疗靶点,使HCC患者达到精准治疗,提高患者生存率。

缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。

肝癌组织GPC3通过活化YAP抑制p53的表达

目的:探讨肝癌组织GPC3与p53的相关性及调节机制。方法:从湖北医药学院附属太和医院收集肝癌组织标本38例,免疫组化分别检测癌组织与癌旁组织GPC3与p53的表达;体外培养肝癌Huh7细胞,分别转染GPC3过表达质粒和siRNA后,real-time PCR、western blotting、免疫荧光检测p53与YAP的表达;干扰YAP的表达后,western blotting与免疫荧光检测p53的表达;Huh7细胞同时转染GPC3过表达质粒和靶向YAP的siRNA,western blotting检测p53的表达。结果:肝癌组织GPC3的表达与p53的表达存在显著负相关,Huh7细胞过表达GPC3下调p53的表达,干扰GPC3的表达则相反,但不改变p53的mRNA水平;干扰YAP蛋白则显著上调p53的表达,并减轻GPC3对p53的下调作用。结论:肝癌组织GPC3通过活化YAP蛋白抑制p53的表达。