王培民效方治验--膝痹宁方

1膝痹宁方组成:淡附片10 g,桂枝10 g,制狗脊10 g,紫河车10 g,山萸肉10 g,巴戟天10 g,生薏苡仁15 g,制何首乌15 g,炒白芍10 g,川牛膝10 g,生甘草10 g。功效:温经散寒,柔肝养血。主治:骨关节退行性疾病导致的慢性疼痛。用法:日1剂,水煎,分2次服。方解:方中淡附片、桂枝益肾助阳、宣痹散寒、温经通络,为君药;臣以紫河车、山萸肉、巴戟天、制狗脊、制何首乌,补益肝肾,滑利关节,增祛风除湿之功;炒白术、生薏苡仁健脾益气且利湿舒筋,并助牛膝活血通经引血下行;甘草缓急止痛,调和诸药。全方共奏温经散寒、柔肝养血之功.

王培民运用温经通络汤治疗腰椎间盘突出症的临床经验

腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)在临床上是以腰痛伴随下肢放射性疼痛、麻木为主要症状,严重影响患者的日常生活。王培民教授具有扎实的中医理论和现代医学理论知识基础,临床经验丰富,擅长从“相火”角度分析“元阳”盛衰在腰痛病发病过程的变化及其作用,“相火”是人体阳气生发运行之根本,辅助“君火”统运一身之阳气。王培民教授认为“肾、脾、肝、胆”诸脏腑皆赖阳以运,而阳气非“相火”充足无以生发。依据“引火归元、益火补土”的核心思想,应用温经通络汤灵活加减治疗腰椎间盘突出症,临床疗效明显可靠,故总结其治疗LDH的临证经验,为LDH的中医治疗提供有益思路。

王培民治疗膝关节滑膜炎临床经验

膝关节滑膜炎是骨科临床常见疾病之一,以关节疼痛、肿胀、关节腔积液为主要表现。王培民教授认为膝关节滑膜炎病位在骨,湿、热、虚为其发生发展的病机要素,水湿、痰浊、瘀血为病理产物。对于膝关节滑膜炎的辨证需考虑外邪与内伤两方面,一方面应明辨虚实寒热与外来邪气侵袭的不同,另一方面还需考虑旧伤劳损、肝肾虚耗以及患者本身脏腑气血阴阳是否失调。治疗大法总以清热利湿、通利关节、补养肝肾,但应随证而立,不可拘泥一法。膝部局部症状与患者整体状况皆需考虑,应首先解决患膝症状继而治病求因、整体治疗。此外,治未病的理念应贯穿始终,加强对患者的健康宣教。

王培民教授辨治跟痛症经验浅析

跟痛症是骨科临床常见疾病之一,以休息后下地行走时足跟处疼痛明显,短时间活动后缓解,继续长时间行走后疼痛又加剧为特点。王培民教授认为跟痛症的发生内因是肝、脾、肾亏虚,外因是风、寒、湿外袭,瘀血、痰浊、水湿是其病理产物,治疗大法以调和气血、扶正祛邪为主,但需随证而立,不可拘泥一法。此外,整体情况和局部症状都需考虑,应先解决疼痛症状,继而整体治疗。

许建安分期辨治股骨头坏死之经验

股骨头坏死(ONFH)是由多种因素导致的发生在股骨头及一定解剖部位的“骨坏死”,大多数患者最终将面临人工髋关节置换。许建安教授认为ONFH乃虚实合病,瘀痹为其核心病机。许教授根据本病临床表现及辅助检查,将ONFH分为三期进行辨治:早期以气血瘀滞型多见,治以化瘀通络、益气强骨,方选加减复活汤;中期以痰瘀痹阻型多见,治以疏肝健脾、活血祛痰,方选通阳豁痰汤合柴胡加龙骨牡蛎汤加减;晚期以气虚肾亏多见,治以补肾养肝、益气活血,方选益气填髓汤加减。同时,配合“伤Ⅰ膏”外敷,内外合治,取效更佳。附验案1则以佐证。

王培民教授运用温肾宣痹法治疗膝骨关节炎的经验

膝骨关节炎（Knee Osteoarthritis,KOA）是骨伤科常见疾病之一,为临床多发病,多表现为关节肿胀、疼痛、活动受限,甚至关节功能活动障碍。临床上疼痛往往是患者就诊的主要原因,超过65%的患者存在慢性的疼痛~[1],该病主要以关节软骨退行性改变,骨、软骨以及其他结缔组织增生为特征,以关节软骨破坏、骨赘形成、滑膜增生、关节囊性病变等为特点。

滑膜纤维化与膝骨关节炎关系的研究进展

膝骨关节炎(KOA)是全球范围内致残率最高的疾病之一,目前尚无特异性治疗方案。KOA是一种慢性炎症性关节疾病,其发病与滑膜炎症密切相关,关节内长期的炎症环境造成的组织损伤会诱导滑膜成纤维细胞异常分化,分泌大量细胞外基质,导致滑膜纤维化(SF)的出现,从而进一步加重膝关节疼痛,这也是造成膝关节僵硬和功能受限的主要原因。SF的出现加速了KOA的病程进展,因此深刻认识SF的产生机制及其在KOA病理进展中的作用,对KOA的预防和治疗具有重要意义。

基于“柔肝养筋”理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎模型小鼠膝关节软骨的影响

目的:基于“柔肝养筋”理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型小鼠膝关节软骨的影响。方法:以超速离心法从3月龄(年轻)和22月龄(老年)C57BL/6雄性小鼠肝脏提取外泌体。将48只7周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组12只。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组小鼠采用前交叉韧带横断术进行KOA造模,Sham组小鼠接受手术但不离断前交叉韧带。术后14 d开始,向Young-EVs组和Aged-EVs组小鼠膝关节腔分别注射10μL年轻和老年小鼠肝脏来源外泌体,每周2次,连续注射4周;Sham组和KOA组用同样方法向膝关节腔注射10μL PBS溶液。外泌体干预结束后,对各组小鼠造模侧膝关节进行X线检查;苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色后进行组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究协会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)骨关节炎软骨组织病理学评价系统及Mankin病理评分系统评价小鼠软骨退变程度;免疫组化法检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ,COLⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)13和一种具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)5表达量。结果:①小鼠膝关节X线检查结果。Sham组小鼠膝关节关节间隙正常,关节面平整光滑,软骨完整,关节边缘无骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为0级;KOA组小鼠膝关节间隙未见明显狭窄,关节面粗糙,软骨出现部分缺损,关节边缘可见明显骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅱ级;Young-EVs组小鼠膝关节间隙轻微变窄,关节表面稍有粗糙表现,软骨缺损较KOA组减少,关节边缘可见轻微骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅰ级;Aged-EVs组小鼠膝关节间隙、关节表面粗糙程度、软骨缺损情况、关节内游离体数量较KOA组更为严重,Kellgren-Lawrence分级为Ⅲ级。②小鼠膝关节软骨组织病理学观察结果。4组小鼠膝关节软骨OARSI评分和Mankin评分组间总体比较,差异均有统计学意义[OARSI评分:(0.417±0.376)分,(4.500±0.632)分,(2.417±0.492)分,(5.417±0.492)分,F=116.800,P=0.000;Mankin评分:(1.083±0.665)分,(7.250±0.880)分,(3.583±0.917)分,(8.833±0.683)分,F=117.100,P=0.000]。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于Sham组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均低于KOA组(P=0.000,P=0.000);Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于KOA组、Young-EVs组(P=0.025,P=0.000;P=0.015,P=0.000)。③小鼠膝关节软骨组织免疫组织化学检测结果。4组小鼠膝关节软骨中COLⅡ和ACAN阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[COLⅡ:(40.050±2.324)%,(26.083±1.119)%,(23.317±2.599)%,(16.717±2.479)%,F=118.500,P=0.000;ACAN:(51.500±3.191)%,(17.700±3.415)%,(19.383±3.924)%,(12.300±1.908)%,F=185.500,P=0.000]。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组的COLⅡ和ACAN阳性表达面积比均低于Sham组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs组与KOA组COLⅡ、ACAN阳性表达面积比的组间差异均无统计学意义(P=0.167,P=0.799);Aged-EVs组的COLⅡ和ACAN阳性表达面积比均低于KOA组、Young-EVs组(P=0.000,P=0.000;P=0.039,P=0.005)。4组MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[MMP13:(11.733±2.191)%,(46.150±6.237)%,(34.417±5.027)%,(57.233±4.049)%,F=106.600,P=0.000;ADAMTS5:(7.950±1.344)%,(30.533±6.184)%,(22.083±3.418)%,(39.317±5.606)%,F=51.450,P=0.000]。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组的MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比均高于Sham组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs组的MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比均低于KOA组(P=0.002,P=0.021);Aged-EVs组的MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比均高于KOA组、Young-EVs组(P=0.003,P=0.000;P=0.016,P=0.000)。结论:小鼠肝脏来源外泌体可能参与软骨细胞合成及分解代谢反应;其中老年小鼠肝脏来源外泌体可加速细胞外基质降解、减少聚集蛋白聚糖合成,加剧KOA小鼠软骨退变;而年轻小鼠肝脏来源外泌体可抑制软骨细胞外基质降解,保护KOA小鼠软骨。

基于网络药理学和分子对接探究温经通络汤治疗腰椎管狭窄症的作用机制

运用网络药理学和分子对接技术研究温经通络汤在腰椎管狭窄症(lumbar spinal stenosis ,LSS)治疗中的作用机制。方法 在TCMSP数据库中筛选温经通络汤的活性成分,并找到与之对应的作用靶点;通过Genecards数据库、OMIM数据库预测LSS疾病靶点,绘制韦恩图,以取得温经通络汤治疗LSS的潜在靶点, 运用 Cytoscape3.9.0软件绘制温经通络汤治疗LSS的"疾病-药物-活性成分-靶点"网络,使用DAVID数据库对潜在靶点进行GO与KEGG的富集分析。通过STRING数据库构建潜在靶点的蛋白质互作网络(PPI),利用Cytoscape 3.9.软件中的MCC算法筛选出温经通络汤治疗LSS的核心靶点。通过 Autodock4及Pymol 2.2.0软件对核心靶点及与之关联的活性成分进行分子对接。结果 筛选出91个温经通络汤的活性成分,234个与其作用的靶点,2280个LSS疾病相关的靶点,通过绘制韦恩图取交集,将交集结果确认为潜在的治疗靶点, 通过"疾病-药物-活性成分-靶点"网络分析,发现温经通络汤含有54种有效活性组分,且与 LSS之间关系紧密。通过MCC算法筛选得到10个核心靶点(TP53、IL6、CDKN1A、JUN、MYC、IL1B、CXCL8、IL1A、CCL2、IL10)。分子对接结果证实其核心靶点与具有相互作用的活性成分间具有稳定的结合性能,结合"疾病-药物-活性成分-靶点"网络,确定核心活性成分为槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、汉黄芩素。结论 本研究初步揭示了温经通络汤的核心活性成分及其多成分、多靶点、多通路治疗LSS的作用机制,发现与抗炎、细胞衰老、凋亡、自噬、铁死亡等途径具有密切的关系,为温经通络汤下一步基础研究的开展提供了相关依据。

基于UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术研究膝痹宁对KOA模型大鼠的软骨保护效应

目的运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)技术分析膝痹宁的药物活性成分,通过干预膝骨关节炎(KOA)模型大鼠代谢因素探讨膝痹宁软骨保护效应的作用机制。方法制备膝痹宁水提物,UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术分析膝痹宁的活性成分。将大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组,提取大鼠软骨组织,HE染色、番红O-固绿染色观察组织结构形态;qPCR和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、PPARγ辅助激活因子1α(PGC1α)及基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平;取各组大鼠血清完成代谢组学分析。结果经鉴定,膝痹宁含活性成分56种;组织学切片提示膝痹宁具有软骨保护作用,并能上调KOA大鼠软骨组织PPARγ、PGC1α的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低MMP3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);此外,代谢组学研究发现,膝痹宁对13种KOA差异代谢物存在干预作用,涉及10条代谢通路。结论膝痹宁具有多种药物活性成分,其KOA软骨保护效应与药物活性成分对KOA的代谢调控有关。

玄七健骨片治疗膝骨关节炎筋脉瘀滞证Ⅲ期临床研究

目的验证玄七健骨片治疗膝骨关节炎(KOA)筋脉瘀滞证的有效性及安全性。方法选取2012年12月-2015年2月7家医院476例KOA筋脉瘀滞证患者进行Ⅲ期临床研究,采用随机数字表法分为试验组和对照组。试验组予玄七健骨片,对照组予安慰剂,均4片/次,3次/d,疗程28 d。比较2组中医证候疗效及疼痛消失情况,观察2组治疗前及治疗7、14、28 d西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)总分及疼痛、僵硬、日常活动评分,中医症状积分,监测2组安全性指标及试验期间出现的不良反应。结果共剔除10例患者,最终466例纳入分析数据集中的全分析集,2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。试验组临床控制率为24.86%(86/346),愈显率为50.00%(173/346),总有效率为89.60%(310/346),对照组临床控制率为0.00%(0/120),愈显率为4.17%(5/120),总有效率为29.17%(35/120),2组比较差异有统计学意义(P=0.000)。试验组治疗后107例患者疼痛消失(30.92%),对照组疼痛消失1例(0.83%),试验组疼痛消失率高于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗7、14、28 d WOMAC总分及疼痛、僵硬、日常活动评分,中医症状积分均显著改善(P<0.05);2组同时点比较,试验组治疗7、14、28 d WOMAC总分及疼痛、僵硬、日常活动评分,中医症状积分均低于对照组(P<0.05)。2组治疗后各相关症状均有所改善,且试验组对疼痛、活动不利、局部肿胀、局部压痛、关节僵硬、日常活动的改善显著优于对照组(P<0.05)。2组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论玄七健骨片治疗KOA筋脉瘀滞证安全有效,其特点在于对患者疾病相关症状体征的改善作用。

新冠疫情防控下境外生中医骨伤科学课程混合式线上教学模式探索

中医骨伤科学是一门极具中医特色的学科,目前中医骨伤科学课程对外教育质量普遍较差,迫切需要调整教学模式。新冠疫情防控期间,境外生均调整为线上教学,对教师能力、课堂设计、气氛调动等提出更高要求。为切实落实停课不停学的指导意见,南京中医药大学中医骨伤科学教研室对2020年春季本学期教学工作进行了相应规划与探讨,形成了以学校在线教育综合平台为载体开展课前导学,联合直播授课,同步利用班级教学群开展教学指导的混合式教学模式,并取得了良好的教学效果。

膝痹宁通过CPT1调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎疼痛的效应机制

目的探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎(KOA)疼痛的效应机制。方法提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞(FLS),采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组,后两组采用5μg/ml脂多糖(LPS)诱导KOA炎症细胞模型,膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁,培养24 h。采用Real-time PCR和Western blotting检测CPT1、肉碱/有机阳离子转运体1(OCTN1)mRNA和蛋白的表达;采用试剂盒检测CPT1、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;使用2?,7?-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧(ROS)水平。提取大鼠背根神经节(DRG)神经元细胞,采用βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色进行鉴定。将收集的各组FLS上清加入DRG神经元中干预24 h,分别设为对照组、KOA组、膝痹宁组,采用Real-time PCR和Western blotting检测DRG神经元瞬时受体电位A1离子通道(TRPA1)mRNA和蛋白的表达,实时荧光钙成像观察DRG神经元中TRPA1开放后Ca^(2+)内流情况,ELISA法检测降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)水平。结果选取膝痹宁冻干粉浓度100μg/ml进行实验。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示,膝痹宁组CPT1、OCTN1 mRNA和蛋白表达水平高于KOA组(P<0.05)。与对照组比较,KOA组ROS水平[(26.46±2.07)AU vs.(5.52±0.78)AU]和MDA含量[(3.13±0.02)nmol/ml vs.(2.77±0.03)nmol/ml]明显升高(P<0.05),CPT1[(4.98±0.02)nmol/min vs.(11.50±0.21)nmol/min]和SOD[(11.38±0.05)U/ml vs.(17.6±0.07)U/ml]活性明显降低(P<0.05);与KOA组比较,膝痹宁组ROS水平[(14.07±1.41)AU]和MDA含量[(2.87±0.01)nmol/ml]明显降低(P<0.05),CPT1[(7.94±0.21)nmol/min]和SOD活性[(13.81±0.07)U/ml]明显升高(P<0.05)。与KOA组比较,膝痹宁组FLS上清干预可抑制DRG神经元中TRPA1 mRNA和蛋白的表达,以及TRPA1开放后Ca^(2+)的内流(P<0.05),降低CGRP和SP表达量[(19.93±1.2)ng/L vs.(30.19±1.58)ng/L,P<0.05;(84.23±1.26)ng/L vs.(123.16±2.95)ng/L,P<0.05]。结论膝痹宁可能通过CPT1调控大鼠滑膜细胞氧化还原稳态而影响DRG神经元细胞膜上TRPA1的Ca^(2+)内流,减少疼痛因子的分泌,从而发挥减轻KOA疼痛的作用。

“易层”贴敷对膝骨关节炎大鼠滑膜纤维化的改善作用及机制

目的探究“易层”贴敷对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜纤维化(SF)的改善作用及潜在机制。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、KOA组和易层组,每组8只。KOA和易层组大鼠以前交叉韧带离断法复制KOA模型。造模14 d后,易层组大鼠于膝关节均匀涂抹“易层”贴敷[三色散(每100 cm^(2)涂抹8 g)和复方三黄油膏(每100 cm^(2)涂抹5 g)],每天贴敷8 h,连续28 d。末次给药后,观察各组大鼠的滑膜炎症程度及纤维化程度并进行Krenn评分,检测其滑膜组织中Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达,血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,以及滑膜组织中纤维化及HMGB1/Toll样受体4(TLR4)/NF-κB通路相关蛋白及mRNA的表达。结果与假手术组比较,KOA组大鼠滑膜衬里细胞大量增生且排列紊乱,炎症细胞浸润和胶原纤维沉积明显;collagenⅠ、HMGB1、p-NF-κB p65阳性表达细胞均明显增加,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量,滑膜组织中纤维化相关蛋白(转化生长因子β、collagenⅠ、金属蛋白酶组织抑制物1、α-平滑肌肌动蛋白)及mRNA的表达,以及HMGB1、TLR4蛋白及mRNA,p-NF-κB p65蛋白及NF-κB p65 mRNA的表达均显著升高(P<0.01)。与KOA组比较,易层组大鼠滑膜组织的病理改变明显改善,上述定量指标均显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论“易层”贴敷可显著改善KOA大鼠的SF,其作用可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路激活有关。

基于Netrin-1介导神经萌发探讨温经活血外治法对膝骨关节炎大鼠疼痛的影响

目的研究Netrin-1介导感觉神经萌发对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠疼痛行为的影响及温经活血外治法的干预作用。方法随机将30只大鼠平均分为空白组、KOA组及外治法组。KOA模型通过前交叉韧带横断术构建,造模成功后,外治法组使用温经活血外治法代表方——“易层”贴敷28 d。给药完成后各大鼠腹主动脉采血并提取各组滑膜组织和背根神经节(Dorasal root ganglion,DRG)组织,苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察滑膜炎症,神经镀银染色滑膜观察神经萌发;ELISA检测血清中促炎因子白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和疼痛介质P物质(Substance p,SP)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)含量;Western blot和qPCR检测滑膜组织Netrin-1、CGRP和DRG组织神经元表面受体结直肠癌缺失基因(Deleted in colorectal cancer,DCC)、非协调同源-5(Uncoordinated-5,UNC5)蛋白和基因表达量。结果HE染色显示外治法组炎性细胞浸润较KOA组明显减少,神经镀银显示外治法组较KOA组神经纤维数量明显减少;KOA组较空白组IL-6和SP含量明显升高,外治法组较KOA组IL-6和SP含量明显减少;KOA组较空白组Netrin-1、CGRP、DCC蛋白和基因表达明显升高,UNC5则明显降低,外治法组较KOA组Netrin-1、CGRP、DCC蛋白和基因表达明显降低,UNC5则明显升高。结论温经活血外治法能够缓解KOA疼痛,其作用机制可能与抑制Netrin-1、影响神经萌发和抑制疼痛因子有关。

基于PI3K/AKT/HIF-1α信号通路研究易层敷贴缓解TGF-β1诱导的膝骨关节炎大鼠滑膜纤维化的机制

目的探讨易层敷贴对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜纤维化TGF-β1、α-SMA、COL1A1表达的影响以及对PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的调控作用。方法将30只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组和易层组,膝关节腔注射200 ng转化生长因子-β1重组蛋白(TGF-β1)建立膝关节滑膜纤维化动物模型,2 d 1次,持续3次,造模14 d后给予易层敷贴外用治疗28 d后取滑膜组织。HE和Masson染色观察滑膜病理变化;免疫组化检测滑膜p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1的表达水平。提取雄性SD大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞(FLSs),以10 ng·mL-1 TGF-β1诱导24 h建立KOA滑膜纤维化细胞模型,易层冻干粉干预24 h,Western blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1的蛋白表达,qPCR检测HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1 mRNA表达。结果与空白组相比,模型组HE染色滑膜炎加重(P<0.01),Masson染色滑膜纤维化占比显著增加(P<0.01),免疫组化中p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1表达均增加(P<0.01);滑膜细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1 mRNA表达均上升(P<0.01)。与模型组相比,易层组滑膜炎和滑膜纤维化状况改善,p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1的表达均减少(P<0.05,P<0.01);滑膜细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1蛋白表达均降低(P<0.05),HIF-1α、TGF-β1、α-SMA、COL1A1 mRNA表达均下调(P<0.05,P<0.01)。结论易层敷贴通过调控PI3K/AKT/HIF-1α信号通路,降低TGF-β1、α-SMA、COL1A1的表达,有效改善TGF-β1诱导的KOA大鼠滑膜纤维化。

三色散凝胶贴膏处方优化

目的优化三色散凝胶贴膏处方。方法根据2020年版《中国药典》四部通则项下规定进行初黏力、持黏力测定,对渗透情况、皮肤残留情况进行评分,流变仪进行振幅扫描、频率扫描、蠕变恢复扫描,分析储能模量(G′)、复合黏度(■*)、蠕变柔量[J(t)]值,结合黏附力、流变学参数采用正交试验优化处方。结果最佳处方为AH-106、甘油、甘羟铝、酒石酸比例55∶300∶2∶3,G′、■*、J(t)值、初黏力、持黏力、剪切应力值、渗透情况评分、残留情况评分分别为1169.63 Pa、11865.6 Pa·s、1.810×10^(-3)/Pa、25号、720 min、723.755 Pa、8分、8分。结论本实验结合流变学参数、黏附力指标调节辅料用量,所得最优处方可使三色散凝胶贴膏形变程度、粘弹性等指标较好,固化时间大大缩短。

三色散凝胶贴膏原料药提取工艺的优化

目的对三色散凝胶贴膏原料药的提取工艺进行优化。方法将SD大鼠分为空白组、模型组、传统工艺组、水提组和醇提组,每组5只,采用前交叉韧带横断术建立膝骨关节炎模型,考察不同提取方式所得凝胶贴膏对膝骨关节炎大鼠的药效学影响。分别以冷、热痛阈值与疼痛介质降钙素基因相关肽(CGRP)、环氧合酶2(COX-2)、P物质(SP)、前列腺素E2(PGE2)含量为指标进行镇痛实验;对大鼠滑膜组织进行HE染色,观察大鼠滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管入侵程度,并以白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6蛋白与mRNA表达水平为指标进行抗炎实验,对比各组大鼠的抗炎镇痛效果差异。以加醇倍数、提取时间、提取次数作为正交试验考察因素,以蔓荆子黄素、士的宁和马钱子碱含量为评价指标并计算综合评分,优选出三色散凝胶贴膏原料药的提取工艺并进行验证实验。结果与模型组比较,各给药组大鼠的冷痛阈值和热痛阈值(除传统工艺组外)均显著升高(P<0.05),疼痛介质CGRP、COX-2、SP、PGE2含量均显著下降(P<0.05);滑膜组织炎症细胞浸润减少、纤维化程度减轻,胶原沉积减少,可见少量毛细血管增生;滑膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白与mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。与传统工艺组比较,醇提组大鼠的大部分检测指标显著降低(P<0.05),而水提组大鼠仅热痛阈值和滑膜组织中IL-6 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。三色散凝胶贴膏原料药的最佳提取工艺为取适量三色散细粉,加8倍量55%乙醇,加热回流提取90 min,提取2次;3次验证实验结果显示,蔓荆子黄素、士的宁与马钱子碱含量平均值分别为0.007%、0.092%、0.214%,RSD均小于5%。结论优化的三色散凝胶贴膏原料药提取工艺稳定、可行,有利于提高该制剂药效。

易层贴敷治疗踝关节急性软组织损伤的临床研究

目的 系统评估易层贴敷治疗踝关节急性软组织损伤的临床疗效.方法 将160例踝关节急性软组织损伤患者随机分为2组,每组各80例.治疗组使用易层贴敷疗法治疗,对照组使用奇正消痛贴治疗,共7d.观察2组疼痛、肿胀、关节功能障碍、皮温差值的改善情况,进行量化评分.结果 治疗组总有效率98.7％,对照组94.7％,2组比较,P＜0.05;治疗组在疼痛、肿胀、关节功能障碍及皮温差值的指标积分改善显著优于对照组（P＜0.05～0.01）.结论 易层贴敷疗法在治疗踝关节急性软组织损伤具有良好的疗效.