携带适配体AS1411的液态内核纳米超声造影剂的制备和评估

目的:探讨制备核酸适配体AS411靶向液态内核的纳米超声造影剂的方法,评价该靶向纳米超声造影剂体外显影能力和寻靶能力。方法:将自合成的膜材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物-聚乙二醇(PLGA-PEG-COOH)和全氟辛溴烷(perfluoroctylbromide,PFOB),采用乳化溶剂挥发法,制备液态内核的纳米颗粒(nanoparticles,NP)。然后用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)催化法将AS1411连接到NP表面,制成靶向液态内核的纳米颗粒(NP-AS1411)。用透射电镜检查NP-AS1411的形态。比较NP-AS1411和NP的大小、表面电荷、包封率、生物相容性、体外显影能力和稳定性。用凝胶电泳检查AS1411是否连于NP表面。用荧光显微镜和流式细胞仪检测NP-AS1411的靶向能力。结果:NP-AS1411在电镜下呈壳-核结构,直径为(245.4±16.5)nm,大于NP的直径(P=0.05)。NP-AS1411和NP在表面电荷和包封率上差异无统计学意义(P>0.05)。高浓度(25.0 mg/m L)NP-AS1411与MCF-7细胞孵育24 h后,细胞的活力(89%)和对照组相比明显下降(P=0.04)。NP-AS1411体外相对灰阶值为86.1±6.7,明显高于脱气去离子水(P<0.05),与和NP的体外相对灰阶值相当(P>0.05)。常温保存24 h后,NP-AS1411的相对灰阶值为80.1±9.2,与24 h前相比差异无统计学意义(P>0.05)。NP-AS1411的大小在放置24 h后也无明显变化(P>0.05)。凝胶电泳证实当NP和AS1411的摩尔比为40:1时,连接到NP的AS1411最多。MCF-7细胞分别与载有荧光香豆素6的NP-AS1411,NP孵育后,NP-AS1411在荧光显微镜下能够产生更强的绿色荧光。流式细胞仪证实NP和NP-AS1411与MCF-7细胞均有结合,但是NP-AS1411和MCF-7细胞结合后产生的荧光更强烈。结论:采用乳化溶剂挥发法和EDC/NHS催化法可以成功制备适配体靶向液态内核纳米超声造影剂。该靶向液态内核纳米超声造影剂的体外显影能力好,也同时具有良好的稳定性和特异性。

参麦注射液通过下调miR-106a保护肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤的分子机制

目的参麦注射液已被证实对心肌细胞缺血再灌注(I/R)损伤具有保护作用,但其对肾I/R损伤的保护作用并不明确。文章旨在探讨参麦注射液对肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤的的影响和可能分子机制。方法构建NRK-52E细胞缺氧复氧模型模拟肾I/R损伤过程。根据干预方法不同,将NRK-52E细胞分为正常对照组、I/R组(缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+I/R组(参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h)、miR-NC+I/R组(转染miR-NC,缺氧6 h-复氧24 h)、miR-106a+I/R组(转染miR-106a模拟物,缺氧6 h-复氧24 h)、anti-miR-NC+I/R组(转染anti-miR-NC,缺氧6 h-复氧24 h)、anti-miR-106a+I/R组(转染anti-miR-106a,缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+miR-NC+I/R组(转染miR-NC,参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h)、参麦+miR-106a+I/R组(转染miR-106a模拟物,参麦注射液处理30 min,缺氧6 h-复氧24 h)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-106a的表达水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)蛋白表达。结果与正常对照组Ki67蛋白(0.76±0.07)、细胞活性(0.83±0.05)比较,I/R组(0.33±0.02、0.35±0.02)显著降低(P<0.05),与正常对照组Cleaved-caspase-3蛋白表达(0.42±0.04)、凋亡率[(5.06±0.32)%]比较,I/R组[(0.86±0.07、(16.11±1.01)%]显著升高(P<0.05);与I/R组Ki67蛋白、细胞活性比较,参麦+I/R组(0.70±0.07、0.77±0.06)明显升高,与I/R组Cleaved-caspase-3蛋白表达、凋亡率比较,参麦+I/R组(0.54±0.04、7.24±0.53)明显降低(P<0.05)。I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平(3.27±0.25)较正常对照组(1.00±0.08)和参麦+I/R组(1.53±0.08)显著升高(P<0.05)。与miR-NC+I/R组比较,miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平显著升高,细胞活性、Ki67蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);与anti-miR-NC+I/R组比较,anti-miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a的表达水平显著降低,细胞活性、Ki67蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与参麦+miR-NC+I/R组比较,参麦+miR-106a+I/R组NRK-52E细胞miR-106a表达显著升高,细胞活性、Ki67蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与I/R组比较,参麦+I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与参麦+miR-NC+I/R组比较,参麦+miR-106a+I/R组NRK-52E细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论参麦注射液可促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,保护肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤,其机制可能与抑制miR-106a表达进而激活PI3K/AKT信号通路有关。

甲氨蝶呤非离子表面活性囊泡的构建及表征

目的:制备甲氨蝶呤非离子表面活性囊泡,并进行体外表征。方法:以包封率、平均粒径及粒径分布为评价指标,并以正交设计优化处方,采用薄膜水化-超声法制备甲氨蝶呤非离子表面活性囊泡,并对囊泡的形态、包封率、粒径和稳定性进行考察。以HPMC(K4m)为基质,制备甲氨蝶呤囊泡凝胶及普通凝胶,进行大鼠离体皮肤渗透性研究。结果:制得的囊泡接近球形,包封率(44.15±2.62)%,平均粒径(337.8±19.4)nm。室温及4℃下放置10 d稳定。大鼠离体皮肤渗透性研究发现囊泡凝胶和普通凝胶10 h累积经皮透过量分别为(1.32±0.47)和(1.47±0.64)μg·cm-2,皮肤滞留量分别为(5.16±0.99)和(1.30±0.17)μg·g-1。结论:非离子表面活性囊泡不增加甲氨蝶呤的透过(P>0.05),但能显著提高甲氨蝶呤的皮肤滞留量(P<0.05)。该制剂可能为甲氨蝶呤经皮肤给药治疗银屑病的安全性和有效性提供参考和依据。

复方布洛肾素那敏片有关物质检查方法研究

目的建立复方布洛肾素那敏片有关物质检查的方法。方法采用Ultimate C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);磷酸溶液(pH 2.5)-乙腈为流动相,1.0 mL·min-1的流速梯度洗脱,在214 nm处检查本品中布洛芬(IBU)的有关物质;以乙腈-0.1%辛烷磺酸钠溶液(磷酸调pH至3.0)(20∶80)为流动相A,乙腈-磷酸盐缓冲液(1.15%磷酸二氢铵,0.1%辛烷磺酸钠,磷酸调pH至3.0)(60∶40)为流动相B,1.5 mL·min-1的流速梯度洗脱,在215 nm处检查本品中去氧肾上腺素(PE)和氯苯那敏(CHL)的有关物质。结果主成分与已知杂质以及各杂质之间分离良好、专属性强,布洛芬、布洛芬毒性杂质C、去氧肾上腺素及氯苯那敏的检测限分别为50.5、42.9、52.5和47.4 ng·mL-1。结论所建立的方法可用于本品的有关物质检查。

固体制剂中盐酸去氧肾上腺素和马来酸氯苯那敏的稳定性考察

固体制剂中盐酸去氧肾上腺素与马来酸氯苯那敏会反应生成加合物。考察了温度(25和50℃)、水分(0和10%)、p H调节剂(乳酸、枸橼酸、DL-酒石酸和酒石酸氢钾)和抗氧剂(L-半胱氨酸和没食子酸丙酯)对二者物理混合物稳定性的影响。结果表明,高温和水分能增加混合物中富马酸和加合物的含量;加入酒石酸氢钾和没食子酸丙酯能显著减少混合物中富马酸、加合物及其他杂质的含量。