GC法在检测生物样品中短链脂肪酸的应用

本文综述了GC法检测生物样品(主要为粪便、尿液、血液和细胞培养液)中短链脂肪酸的应用现状,探讨了各种样品提取纯化方式的特点,并比较不同GC进样方式的优缺点,梳理GC法在检测生物样品中短链脂肪酸的应用现状,为探索更经济、快速、简便的测定方法提供研究基础。

土三七致大鼠肝毒性的代谢组学

目的研究土三七致大鼠肝毒性的代谢组学。方法 20只SD大鼠随机分为空白组和给药组,每组10只,空白组灌胃给予蒸馏水,给药组灌胃给予土三七药液(7.5 g/kg),给药14 d后处死,取血和肝脏,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)水平,并进行病理组织学观察。然后,通过LC-MS法分析大鼠血清、肝组织代谢谱变化,并鉴定差异性代谢物。结果与空白组比较,给药组ALT、AST水平显著升高(P<0.01),HE染色可见有不同程度的炎细胞浸润。通过正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)载荷图筛选,可找到变量权重(VIP)>1、P<0.05的差异性代谢物。血清样品中共有68个差异变量,其中13种代谢物差异较大;肝组织样品中共有26个差异变量,其中14种内源性代谢物差异较大。结论土三七致大鼠肝毒性机制可能与甘油磷脂、胆汁酸代谢紊乱有关,本研究可为有毒中药的毒性机制研究提供新的策略和方法。

菊三七致肝损伤及其毒性机制的研究进展

目的:为深入研究菊三七的毒性机制提供参考。方法:以“菊三七”“毒性机制”“肝损伤”“肝窦阻塞综合征”“Gynura segetum”“Toxicity mechanism”“Liver damage”“HSOS”等为关键词,在中国知网、万方数据、PubMed 等数据库中组合查询2000 年1月-2019 年1 月发表的中英文相关文献,对菊三七致肝损伤及其毒性机制研究进展进行综述。结果与结论:共检索到文献70 922篇,最终纳入有效文献42 篇。菊三七致病的靶器官为肝脏,而菊三七诱发肝功能衰竭的毒性机制尚不明确,目前较多研究者普遍认为菊三七致肝损伤是与其所含的吡咯里西啶类生物碱(PAs)经肝代谢后生成的毒性成分有关系。不饱和型PAs、PAs毒性代谢物及细胞色素P450酶3A在菊三七诱发肝毒性的发生和发展中起重要作用。细胞分子学水平的研究表明,不饱和型PAs 可使细胞器受损、内皮细胞损伤、细胞凋亡等,进而产生较强的肝细胞毒性;且PAs诱导的肝损伤与谷胱甘肽的减少和细胞外基质降解也有密切关系。代谢组学的相关研究则从机体的整体角度出发证明了胆汁酸和氨基酸等代谢异常亦可能与其肝毒性有关。但目前对于菊三七致肝损伤的研究多集中于从毒性代谢物和细胞分子毒性的角度来研究,大多仅通过对某一两个毒性成分从某个单一角度采用多种分析方法进行中药毒性及其机制的探究,而对于菊三七致肝损伤的系统性和整体性研究较少。因此,今后研究者可应用系统生物学和生物信息科学,采用系统的、综合的研究思路和手段从整体水平上动态的对一个体系加以阐述探究。

基于收入调节的消费税改革问题研究

调节收入分配对目前收入差距过大的我国来说是非常重要的,其中消费税对调节收入分配起到一定的作用,但是我国消费税的设置并没有发挥出其调节收入的作用。文章从消费税和收入调节的关系出发,论述了消费税的收入调节作用,并根据消费税存在的问题,提出了消费税改革的政策建议。

审计理论在《中国注册会计师审计准则第1151号——与治理层的沟逊具体审计准则中应用分析

审计理论为审计准则的制定提供了重要依据。审计理论要素在《中国注册会计师审计准则第1151号——与治理层的沟通》准则中很好地应用，在很多方面得到体现。该准则在注册会计师与治理层沟通这个必不可少的审计阶段作了很多规定，为注册会计师的工作提供了指导作用。审计理论要素包括审计本质、审计目标、审计假设和审计概念。这四者互相联系，互相制约，互相作用，互相发展。在审计理论的指引下，审计准则越来越完善，整个审计行业得到更好的发展。

菊三七致大鼠肝毒性血清胆汁酸的靶向代谢组学研究

目的应用LC-MS/MS对大鼠血清中14种胆汁酸进行代谢组学分析,评价菊三七致大鼠肝毒性,并筛选差异胆汁酸。方法将18只SD大鼠随机分为高剂量组、低剂量组和空白组,每组6只,分别灌胃给予菊三七15、7.5 g/(kg·d)和等量的纯化水,连续给药10 d,取出肝组织和血。检测血清中TBA、ALT、AST、TBIL水平,并对肝脏进行HE染色,观察病理切片。基于代谢组分析胆汁酸水平变化,筛选差异胆汁酸。结果与空白组比较,高、低剂量组血清中TBA、ALT、AST、TBIL均升高(P<0.05),其中高剂量组的ALT、AST、TBIL均高于低剂量组(P<0.05),而高剂量组的TBA与低剂量组比较降低(P<0.05)。通过正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)的载荷图筛选,找到变量权重VIP>1、P<0.05的差异胆汁酸为CDCA、GCA、DCA、HDCA、GUDCA、TCA、TCDCA、TUDCA和THDCA。结论菊三七给药致大鼠肝毒性时,在一定时间内呈剂量相关性。9种胆汁酸水平在给药后大鼠血清中的变化较大,可作为菊三七致大鼠肝损伤潜在标志物。

基于LC-MS分析4,5-二咖啡酰奎宁酸在大鼠血浆和尿液中的代谢产物

应用超高效液相色谱串联高场轨道阱质谱(UPLC-Orbitrap Elite-MS/MS)分析大鼠灌胃给予4,5-二咖啡酰奎宁酸后,血浆和尿液中的代谢物质组。采用Thermo C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱。在负离子模式下采集生物样品的质谱数据,通过比对空白与给药样品,利用Compound Discovery 2.1软件对数据进行提取处理,比对化合物的精确相对分子质量以及质谱碎裂信息,计算二级碎片拟合比,进而归属代谢产物。结果在大鼠血浆中检测到15种代谢产物,在尿液中检测到16种代谢产物。涉及到的代谢反应有甲基化反应、水合反应、去水合反应、还原反应、葡萄糖醛酸化反应、硫酸酯化反应。血和尿中的代谢产物互为补充,初步揭示了此化合物在体内的移行形式和排泄形式。该研究建立起生物样本前处理、高分辨液质联用仪器采集数据、定性软件鉴定代谢产物结构的方法。为之后中药有效成分、体内药效形式的研究打下了基础。

基于尿液代谢组学的土三七诱导大鼠肝损伤的机制研究

目的:采用代谢组学技术检测土三七干预后大鼠尿液中内源性代谢物的变化,分析土三七诱导大鼠肝脏损伤的可能机制。方法:12只SD大鼠,随机分为对照组和土三七组,每组6只。土三七组大鼠灌胃给予7.5 g·kg-1·d-1土三七水煎液,对照组大鼠灌胃给予等体积纯净水,连续给药14 d。末次给药后,代谢笼收集大鼠尿液,并分离大鼠血清和肝脏组织。生化分析仪检测血清ALT、AST、TBIL和TG水平; HE染色后光镜下观察肝组织病理形态学变化。液质联用(LC-MS)技术检测尿液样本,主成分分析评价组间代谢谱差异,筛选并鉴定差异性代谢物,分析代谢通路。结果:与对照组比较,土三七组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平显著增高(P<0.05,P<0.01); HE染色结果显示,土三七组大鼠肝组织结构破坏,细胞排列紊乱,有炎性细胞浸润。代谢组学分析显示,组间代谢谱差异明显,尿液样本中共鉴定出马尿酸、苯丙氨酸、N-甲基烟酰胺、氧化三甲胺等40个差异代谢物,涉及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,烟酸和烟酰胺代谢,Vit B2代谢等主要代谢通路。结论:土三七诱导大鼠肝脏损伤,其机制可能与苯丙氨酸生物合成和代谢、烟酸和烟酰胺代谢、Vit B2代谢等有关。

基于LC- MS的四氯化碳致大鼠急性肝损伤的脂质组学研究

目的:基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术从脂质组学的角度探讨四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的作用机制。方法:取Wistar大鼠12只,随机分为正常组和模型组,每组6只。模型组大鼠单次腹腔注射50%CCl4诱导急性肝损伤,给药剂量为1 ml/kg;正常组大鼠腹腔注射等体积橄榄油。给药24 h后,采集血清样本,分离肝大叶。生化分析仪检测血清ALT、AST、TG、HDL和LDL水平;HE染色后光镜下观察肝组织病理形态学变化;LC-MS检测血清样本,采用多元统计分析(主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析)比较两组间脂质代谢谱差异,并筛选差异性脂质代谢物。结果:与正常组比较,模型组大鼠ALT和AST水平显著升高(P<0.01),TG含量明显降低(P<0.05)。HE染色可见模型组大鼠的肝细胞肿大、坏死,伴有明显的炎症浸润。脂质组学分析显示,两组间脂质代谢谱差异明显,共找出80个差异性脂类成分;进一步经S-plot图比对,筛选出34个差异最为显著的脂质代谢物,其中15个属于磷脂酰胆碱类,6个属于三酰甘油类,4个属于磷脂酰乙醇胺类,2个属于溶血磷脂酰胆碱类,2个属于鞘氨醇类,5个属于血小板激活因子。结论:脂质组学研究揭示CCl4诱导急性肝损伤的机制与磷脂及三酰甘油代谢紊乱相关。