茯苓水提物UPLC指纹图谱的建立及其镇静催眠作用的谱效关系研究

目的:建立茯苓水提物的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并考察其与镇静催眠作用的谱效关系。方法:将10批不同产地茯苓经水提后得水提物。采用UPLC法测定该水提物,色谱柱为Waters HSS-C18,流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇(梯度洗脱),流速为0.4~0.2 mL/min,检测波长为210、242 nm,柱温为40℃,进样量为2μL。采用《中药指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立10批茯苓水提物的指纹图谱并进行共有峰指认。以小鼠的入睡率、入睡潜伏期和睡眠持续时间为单一药效指标,考察戊巴比妥钠协同作用下10批不同产地茯苓水提物的镇静催眠作用;将单一药效指标和总药效(由单一指标经层次分析法计算而得)进行数据转化后,采用灰色关联度分析法分析茯苓水提物指纹图谱中各共有峰与单一药效及总药效的关联度。结果:10批茯苓水提物共有24个共有峰,指认出11个成分,分别为16-羟基松苓新酸(6号峰)、16α-hydroxytrametendic acid(7号峰)、茯苓酸B(9号峰)、去氢土莫酸(10号峰)、茯苓酸A(12号峰)、猪苓酸C(15号峰)、3-O-乙酰基-16α-羟基松苓新酸(17号峰)、去氢茯苓酸(20号峰)、茯苓酸(21号峰)、松苓新酸(22号峰)、脱氢齿孔酸(24号峰)。经灰色关联度分析发现,24个峰与睡眠持续时间的关联度均大于0.6(0.6115~0.8118),与入睡潜伏期的关联度除14、24、2号峰外,其余均大于0.6(0.6059~0.7904);与入睡率的关联度除23、19、17、5号峰外,其余均大于0.6(0.6064~0.7216);与总药效的关联度除2、5、19号峰外,其余均大于0.6(0.6190~0.7812);与总药效关联度排名前10位的色谱峰分别为15号峰(猪苓酸C)、16号峰、8号峰、11号峰、12号峰(茯苓酸A)、1号峰、7号峰(16α-hydroxytrametendic acid)、3号峰、9号峰(茯苓酸B)、20号峰(去氢茯苓酸)。结论:本研究建立了茯苓水提物的UPLC指纹图谱,指认了11个共有峰成分;猪苓酸C等10种成分与镇静催眠总药效关联较大,初步揭示了茯苓镇静催眠作用的药效物质基础。

不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠的利水渗湿作用研究

目的探讨不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠的利水渗湿作用。方法采用盐酸多柔比星与氢化可的松联合注射的方法建立肾阳虚下焦水肿大鼠模型。将96只造模成功大鼠随机分为模型组、阳性药组(金匮肾气丸,2.1 g·kg^(-1))、10批次不同产地茯苓水煎液组(S1~S10,7.5 g·kg^(-1)),另取8只正常大鼠作为正常组,连续灌胃给药21 d。观察记录大鼠的证候学表现及体质量变化;采用代谢笼测定大鼠24 h尿量;采用生化试剂盒测定24 h尿蛋白(UP)及血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)水平;采用ELISA法测定血清中抗利尿激素(ADH)水平及肾髓质中水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)水平;采用层次分析法确定各单一指标对总药效的权重,以总药效对不同产地茯苓进行聚类分析。结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量、24 h尿量、血清白蛋白及总蛋白水平明显降低,24 h尿蛋白、ADH及AQP1、AQP2水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,10批次不同产地茯苓可明显上调大鼠体质量(S1、S2、S4~S10)、24 h尿量(S1~S10)、血清白蛋白(S1、S2、S4~S10)、总蛋白(S1、S4~S6、S8、S9)水平,明显下调24 h尿蛋白(S1~S10)、ADH(S1~S10)、AQP1(S1~S10)、AQP2(S1~S9)水平,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。聚类分析结果显示,10批次不同产地茯苓被聚为3大类,S2、S4为一类,S3、S6、S7和S8为一类,S1、S5、S9、S10为一类。总药效的强弱排序为:阳性药(金匮肾气丸)>湖北罗田(S2)、云南楚雄(S4)>湖北恩施(S3)、福建南平(S6)、河南商城(S7)、湖南怀化(S8)>湖北英山(S1)、云南大理(S5)、安徽岳西(S9)、云南丽江(S10)。结论不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠均可产生利水渗湿作用,可能与其调节AQP1及ADH-AQP2相关通路有关,且其作用强弱存在产地差异。

茯苓水提物对肾阳虚下焦水肿大鼠肾功能的影响

目的:探究茯苓水提物对肾阳虚下焦水肿大鼠肾功能的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组(n=8)和造模组(n=96),采用氢化可的松联合盐酸多柔比星复制肾阳虚下焦水肿大鼠模型,连续14 d。将造模成功的大鼠再随机分为模型组、金匮肾气丸组(阳性对照药,2.1 g·kg^(-1))和10批不同产地茯苓水提物组(7.5 g·kg^(-1)),每组8只。空白组和模型组大鼠均灌胃等体积蒸馏水,各给药组均灌胃相应药物;每天1次,连续21 d。末次给药后计算各组大鼠的肾组织脏器系数、测定尿蛋白(UP)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量,观察各组大鼠肾组织的病理形态学变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠肾组织脏器系数、UP、SCr、BUN、HDL-C、LDL-C含量明显升高(P<0.05),cAMP/cGMP比值明显降低(P<0.05),肾组织病变明显。与模型组比较,金匮肾气丸组及10批不同产地茯苓水提物组大鼠的肾组织脏器系数和UP、SCr、BUN、HDL-C、LDL-C水平均有不同程度下降,cAMP/cGMP比值则有不同程度升高,肾组织病理状态均有不同程度改善(P<0.05);与金匮肾气丸组比较,罗田茯苓水提物组、楚雄茯苓水提物组大鼠肾组织脏器系数显著降低(P<0.05),楚雄茯苓水提物组、大理茯苓水提物组、南平茯苓水提物组、商城茯苓水提物组和岳西茯苓水提物组大鼠BUN含量显著降低(P<0.05),罗田茯苓水提物组、楚雄茯苓水提物组和大理茯苓水提物组大鼠HDL-C含量显著降低(P<0.05)。结论:茯苓水提物可改善肾阳虚下焦水肿大鼠肾功能。

黄芪总皂苷对气虚模型大鼠的补气作用及机制研究

目的:研究黄芪总皂苷对气虚模型大鼠的补气作用及可能机制,为阐明黄芪补气的药效物质基础提供参考。方法:将40只雄性Wistar大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组[补中益气丸,4.5 g/(kg·d),以生药量计]和黄芪总皂苷高、低剂量组[252、28 g/(kg·d),以总皂苷量计],每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均采用"饮食不节+疲劳"法复制气虚模型。于造模同时,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常组和模型组大鼠灌胃等体积水,每天1次,连续给药21 d。末次给药后,观察大鼠的一般情况;检测大鼠的体质量、胸腺指数、脾指数;记录其负重力竭游泳时间;测定其脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4,肝组织中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP),血清中白蛋白(ALB),全血中红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HBG)以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、白细胞介素2(IL-2)、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、胸腺指数、脾指数、负重力竭游泳时间以及脾T淋巴细胞亚群CD3、ATP、ADP、ALB和IL-12水平均显著降低或缩短(P<0.05或P<0.01),MDA、乳酸、CK和TNF-α水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,黄芪总皂苷高剂量组大鼠的体质量、脾指数、负重力竭游泳时间以及T淋巴细胞亚群CD3、ATP、ADP、ALB、RBC水平均显著升高或延长(P<0.05),MDA、乳酸、CK、TNF-α水平显著降低(P<0.05或P<0.01);黄芪低剂量组大鼠的负重力竭游泳时间、ATP、ADP、IL-2水平均显著升高或延长(P<0.05或P<0.01),MDA、乳酸、CK、TNF-α水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与阳性对照组比较,黄芪总皂苷高剂量组大鼠脾指数、脾T淋巴细胞亚群CD3水平、负重力竭游泳时间、ATP水平显著升高或延长(P<0.05或P<0.01),黄芪总皂苷高、低剂量组大鼠MDA水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芪总皂苷可通过减少机体乳酸的积累,降低CK活性、体内脂质过氧化物水平以及调节免疫,从而起到补气、延缓疲劳发生、增强运动能力的作用。

黄芪多糖对气虚大鼠的补气作用及其机制探讨

目的探讨黄芪多糖及分级醇沉多糖对气虚大鼠的补气作用及机制。方法将88只Wistar大鼠随机分为11组,分别为正常组,模型组,阳性药组,黄芪多糖(APS)高、低剂量组,10%乙醇沉淀多糖(APSM1)高、低剂量组,40%乙醇沉淀多糖(APSM2)高、低剂量组和80%乙醇沉淀多糖(APSM3)高、低剂量组。除正常组外,其余各组大鼠采用"饮食不节+负重游泳"建立气虚模型,给药组分别灌胃给予黄芪各多糖,正常组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。3周后处死大鼠,记录大鼠体质量、游泳时间,计算胸腺指数、脾脏指数,检测大鼠血清白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素12(IL-12)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)、肝脏三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)等指标,评价黄芪多糖及不同乙醇沉淀多糖对气虚大鼠的补气作用。结果与模型组比较,黄芪多糖及分级醇沉多糖均可以明显降低MDA、TNF-α和乳酸含量(P<0.05,P<0.01),明显提高游泳时间(P<0.01);黄芪多糖、10%乙醇沉淀多糖、80%乙醇沉淀多糖可明显升高ALB、ATP及ADP含量(P<0.05,P<0.01);黄芪多糖、40%乙醇沉淀多糖、80%乙醇沉淀多糖可以明显升高IL-2含量(P<0.01);黄芪多糖、10%乙醇沉淀多糖、40%乙醇沉淀多糖能明显降低大鼠CK活力(P<0.05,P<0.01);40%乙醇沉淀多糖低剂量组还可明显升高IL-12水平(P<0.05)。结论黄芪多糖可通过降低机体血乳酸的积累,降低CK活力,降低大鼠体内脂质过氧化物水平,提升机体免疫力,起到补气、延缓疲劳发生、提高运动能力的作用;分级醇沉多糖作用靶点存在一定差异。

复方鳄鱼油烧伤膏对浅Ⅱ度烧伤皮肤的修复及抗炎镇痛作用

目的:研究复方鳄鱼油烧伤膏对浅Ⅱ度烧伤皮肤的修复及抗炎镇痛作用。方法:将加热后的砝码紧贴豚鼠右侧脱毛部位皮肤4 s,复制浅Ⅱ度烧伤模型。造模成功后,将豚鼠按体质量随机分为模型组、京万红软膏组(阳性对照)和复方鳄鱼油烧伤膏配方一、配方二、配方三组(鳄鱼油质量分数分别为1.5%、3%、4.5%,下同),每组8只。除模型组外,其余各组豚鼠每天按0.7 g/只涂抹给药2次,连续14 d。每天记录豚鼠创面愈合情况,并计算创面愈合率;采用苏木精-伊红(HE)染色法观察豚鼠创面组织病理学变化;采用酶联免疫吸附试验法测定豚鼠血清中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)的水平。将80只昆明小鼠分为2组,每组再按体质量随机分为模型组、京万红软膏组(阳性对照)和复方鳄鱼油烧伤膏配方一组、配方三组,每组10只,分别采用二甲苯耳廓肿胀法和醋酸扭体法以考察复方鳄鱼油烧伤膏的抗炎镇痛作用。结果:在烧伤修复实验中,复方鳄鱼油烧伤膏干预后,豚鼠的创面面积逐渐缩小,且第14天时其创面已极大幅度愈合,创面愈合率显著升高(P<0.01);血清中EGF、SOD水平均显著升高(P<0.01),VEGF、MDA、TNF-α、IL-1水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);创面组织可见较厚的新生表皮层,真皮层中结缔组织和新生血管均明显增多。在抗炎镇痛实验中,复方鳄鱼油烧伤膏干预后,小鼠的耳肿胀度与扭体次数均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:复方鳄鱼油烧伤膏可修复豚鼠浅Ⅱ度烧伤皮肤,且对小鼠的抗炎镇痛作用良好;其作用机制可能与升高血清中EGF、SOD水平,降低VEGF、MDA、TNF-α、IL-1水平有关。

不同产地茯苓中总蛋白的含量差异比较

目的:比较不同产地茯苓中总蛋白的含量差异。方法:以牛血清白蛋白为对照,0.4 mol/L氢氧化钠溶液为提取溶剂,考马斯亮蓝G-250为显色剂,采用紫外分光光度法于595 nm波长处测定茯苓中总蛋白含量,并通过聚类分析对34批(S1~S34)不同产地的茯苓进行分类。结果:牛血清白蛋白检测质量浓度的线性范围为1.45~17.40μg/mL(r=0.999 6);精密度、稳定性(20 min)、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率为100.14%~104.26%(RSD=1.43%,n=9);34批不同产地茯苓中总蛋白的含量为0.388 4%~1.129 7%。聚类分析结果显示,34批茯苓中,湖北省英山县产茯苓(S2、S3)的总蛋白含量>1%,归为一类;湖北、云南、安徽和湖南产茯苓(S1、S5~S10、S12、S13、S16、S17、S19~S21、S23~S25、S28、S30、S31)的总蛋白含量为0.653 5%~0.946 1%归为一类;剩余批次含量为0.388 4%~0.601 2%,归为一类。结论:所建方法可用于获苓中总蛋白的含量测定。34批不同产地茯苓总蛋白含量以湖北省英山县产茯苓最高,云南、安徽等地次之。

新产品开发中的情报工作

随着国民经济的调整和经济体制的改革,兵器工业各厂的形势也发生了很大变化,面对这样的形势,企业要生存,工厂要发展,怎么办呢?开发新产品,势在必行!1980年以来,我厂贯彻执行军民结合,军工技术向民用转移的方针,开始大力发展新的产品。我们情报部门围绕工厂的新产品开发,

指纹图谱及多成分定量结合化学模式识别法评价不同产地青钱柳质量

目的基于UPLC指纹图谱、多成分定量与化学模式识别相结合的方法,评价不同产地青钱柳质量,为其进一步开发利用提供依据。方法建立5个省20批不同产地青钱柳UPLC指纹图谱,确定共有峰,通过对照品比对指认3种化学成分并测定样品中含量;使用SPSS22.2、SIMCA软件进行聚类分析和主成分分析。结果选取了16个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,通过聚类分析可将20批青钱柳分为6类,主成分分析与聚类分析结果基本一致;经主成分分析,5个主成分因子的累积方差贡献率为86.765%,通过主成分分析推测出产于湖北恩施的S14、S15药材样品的质量最好,产于江西修水的S4、S5、S8、S16次之;被指认的异槲皮苷、槲皮苷、阿福豆苷在20批样品中的质量分数分别为0.360%~0.884%、0.263%~1.097%、0.092%~0.403%,其中,S4、S8、S14、S15的主成分分析综合得分及3个成分含量总和均处在前4位,而S18、S20则均处在倒数前2位。结论指纹图谱、结合聚类分析及主成分分析可以更全面地评价青钱柳质量,异槲皮苷、槲皮苷、阿福豆苷可以作为青钱柳质量控制的指标性成分。

茯苓利下焦水湿有效物质部位的筛选及其作用机制研究

目的:探讨茯苓不同物质部位利下焦水湿的作用及机制。方法:采用注射"盐酸多柔比星+氢化可的松"的方法建立肾阳虚下焦水肿模型,造模14 d,造模成功大鼠分为模型组、金匮肾气丸组、茯苓水不溶性多糖组、水溶性多糖组、总三萜组。给药21 d后,收集并记录24 h尿量,分析肾组织病理变化,检测尿蛋白(UP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、抗利尿激素(ADH)、肾组织水通道蛋白1(AQP 1)和水通道蛋白2(AQP 2)的含量及腺苷酸环化酶(AC)、血管加压素受体2(V2R)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)、AQP 1和AQP 2的表达。结果:与空白组比较,模型组体质量、24 h尿量、TP、ALB、cAMP、cAMP/cGMP显著降低,UP、 ADH、cGMP、CRE、BUN、HDL-C、LDL-C含量显著升高(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,总三萜组、水溶性多糖组和水不溶性组24 h尿量、ALB、cAMP/cGMP均显著升高,ADH、CRE、BUN、HDL-C均显著降低,总三萜组体质量、TP显著升高,UP、LDL-C显著降低,水溶性多糖组体质量显著升高,UP显著降低,水不溶性多糖组cAMP显著升高,cGMP显著降低(P<0.01或P<0.05),且3个部位均能不同程度地升高模型大鼠AC、PKA、CREB的表达,降低V2R、AQP 1、AQP 2的表达。结论:茯苓三萜、水溶性多糖和水不溶性多糖均为茯苓利下焦水湿的药效物质部位,其作用机制可能与改善肾功能、调节脂质代谢紊乱以及与"AC-cAMP"调节AQP 1和AQP 2的表达有关。

采收时间及加工方式对青钱柳叶化学成分含量及抗氧化和降血糖活性的影响

目的比较不同采收时间、加工方式对青钱柳叶黄酮、三萜及多糖含量与体外抗氧化和降血糖活性的影响,为青钱柳的采收加工提供依据。方法采用回流法提取青钱柳黄酮、三萜及多糖,紫外分光光度法检测含量;以青钱柳45%乙醇提取液清除DPPH·、OH·、ABTS^(+)·能力以及对α-葡萄糖苷酶抑制能力为指标评价青钱柳体外抗氧化活性与降血糖能力。结果采收时间、叶片颜色以及加工方式不同,导致青钱柳黄酮、三萜及多糖含量存在明显差异但呈现一定的规律性变化,抗氧化及对α-葡萄糖苷酶抑制能力也产生差异。各样品黄酮含量在2.64%~6.79%之间,三萜含量在3.67%~8.92%之间,多糖含量在1.13%~4.86%之间;6月绿色叶阴干样品对α-葡萄糖苷酶抑制能力最强,7月绿色叶杀青样品抗氧化能力最强且具有较强抑制α-葡萄糖苷酶作用。结论综合分析,确定以6、7月份采摘绿色青钱柳叶并采用杀青方式处理为最佳。

黄芪总皂苷的分离纯化工艺研究

目的研究黄芪总皂苷的分离纯化工艺。方法采用D101大孔吸附树脂对黄芪总皂苷进行分离纯化,考察样品质量浓度、上样体积流量、上样量、洗脱剂体积分数、洗脱剂用量等条件,得到最佳工艺。结果黄芪总皂苷纯化最佳工艺:质量浓度为0.1 g/mL的药液,上样体积为3 BV,以1.5 BV/h的体积流量过柱重复两次,吸附完全后,先用5BV蒸馏水冲洗弃去水洗液再用15%的乙醇以2BV/h的体积流量洗脱至无色,弃去洗脱液再用5 BV60%乙醇以相同的体积流量进行洗脱,收集洗脱液,浓缩干燥得总皂苷,该工艺三批验证总皂苷含量均达到50%以上。结论该工艺参数准确、可靠,简单可行,能满足大生产的需求。