微波热辐射致小鼠脏器超微结构改变的研究

局部微波热辐射是对射线抵抗性细胞的物理增敏手段,已做为一种癌症治疗的有效方法应用于临床。直接微波热辐射对机体深部器官所造成的热损伤国内已见报道。但非直接、局部辐射对整个机体,对各个脏器所引起的超微结构改变尚未见报道。本研究以小鼠为对象,经局部微波热幅射,手术取其脏器进行透射电镜观察,探讨其对脏器的损伤。

人喉癌裸鼠移植瘤模型的建立及部分生物学特性研究

用人喉癌手术切除标本建立了裸鼠移植瘤模型,已传至13代。原代移植成功率为66.7％,潜伏期30～70d;鼠间传代移植成功率为100％,潜伏期14～19d,生长稳定。经光学显微镜检查,各代移植瘤组织结构与原人喉癌组织基本一致。电镜检查证明,具有人喉癌特征,癌细胞间有大量桥粒,细胞浆中可见张力原纤维,有的张力原纤维与桥粒相连。细胞表面有较大的指状突,核膜较规则,胞浆中线粒体较多。

微波辐射对脏器实质细胞的超微病理改变的观察

用微波辐射家兔的胸腹部，观察其肾脏、肺脏、肝脏和脾脏实质细胞的超微结构的病理改变。发现：细胞核畸形，异染色质凝集；细胞质溶解变性，出现大面积空泡；线粒体溶解变性，呈透明区，峭萎缩；粗面内质网明显扩张；各种细胞器模糊不清等全细胞性改变。

微波照射人喉癌裸鼠移植瘤超微结构改变的实验研究

以人喉癌手术切除标本为瘤源，移植于ＡＢＬＢ／ｃＡ裸小鼠颈后部，长出瘤体，建立移植瘤模型。用４３４ＭＨ２．３５０Ｗ微波热疗机照射瘤体２～４周，分别处死，透射电镜观察。发现：瘤细胞出现核固缩，核仁呈致密团块，甚至核仁分散、解离：常染色质出现颗粒凝集：细胞间腔数量增多，并伴有明显扩张及大面积溶解区。细胞内出现大量次级溶酶体，在胞质内形成残质体。部分瘤细胞分化较高，核形规则，染色质分布均匀，细胞器较发达。结果提示：（１）微波照射使癌细胞活跃程度受到抑制，甚至崩溃、自溶；（２）部分细胞出现逆转分化的迹象。

医用生物学学习辅导（第七章）

医用生物学学习辅导（第七章）中国医科大学医学遗传学教研室王太一沈阳医学院生物学教研室李玉侠医学遗传学是医用生物学的重要组成部分，是医学与遗传学相结合的一门边缘学科，是研究遗传病的遗传方式、病因、发病机理、诊断和防治的学科。遗传病是指个体生殖细胞或受精...

2型糖尿病证病结合动物模型的研究

目的探讨2型糖尿病证病结合动物模型的造模方法及成模标准,建立2型糖尿病病证结合动物模型。方法应用STZ造成大鼠糖尿病(FBG≥16.7mmol/L)后应用中药造成中医阴阳两虚;阴虚热盛;气阴两虚;血瘀气滞证候模型。结果(1)造模后出现饮水增多、尿量增多、生长迟缓、身体消瘦、拉尾排便、排尿等糖尿病大鼠共同特征。阴阳两虚组大鼠还出现大便干燥、舌红等征象;阴虚热盛组大鼠出现大便干燥、舌红等征象;气阴两虚组大鼠出现精神萎糜、倦怠懒动、舌胖大,少津;血瘀气滞组大鼠还出现背毛减少、臀部毛色枯黄、性情暴烈、易激惹、捕捉时叫声频繁、抵抗力大、攻击行为频繁、大便质稀色深、舌质暗等血瘀气滞气滞的症状。(2)实验室指标有不同程度改变。结论应用传统的糖尿病造模方法与糖尿病病证特点和中药四气五味药性理论相结合,研制2型糖尿病病证结合动物模型具有可行性。

小鼠Doc-1R基因的克隆及其表达

背景与目的:Doc-1R基因是1999年克隆的一种新的基因,已有的研究表明Doc-1R基因可能是一种潜在的抑癌基因。为了进一步研究此基因的功能,我们首先克隆了小鼠的Doc-1R基因,并对此基因的表达进行了初步的研究。方法:根据小鼠的Doc-1R基因cDNA序列,设计合成基因组特异引物,应用巢式PCR对小鼠基因组步移文库进行扩增。对测序结果进行序列分析及剪接位点的鉴定。另外应用RT-PCR的方法研究了Doc-1R基因在小鼠肝、脾、胰、肾、肺、肠、心、脑、骨、肌肉、膀胱、卵巢、睾丸等13种组织的表达。结果:经二次基因组步移获得了小鼠Doc-1R基因组全长序列。基因组全长2787bp,含4个外显子和3个内含子,外显子与内含子接头符合GT/AG法则。RT-PCR结果表明,Doc-1R基因在小鼠13种组织和器官中均有表达。结论:成功克隆了小鼠Doc-1R基因,为进一步研究此基因的功能奠定了基础。RT-PCR表达结果提示此基因可能是对维持组织器官的功能具有重要的作用的管家基因。

抗G418小鼠胚胎干细胞饲养层的制备

目的:建立具有G418抗性的 3T3细胞系,用于转染pTet on基因的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法: 通过脂质体转染的方法,将含有neo基因的质粒pWL/neo导入 3T3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定。结果:经 500μg/ml的G418压力筛选后,获得了抗G418细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异,用特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明neo基因片段已整合入G418抗性 3T3细胞中。结论:成功地培育了G418抗性的 3T3细胞,为进行pTet on基因转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。

蚓激酶基因在山羊乳腺中的瞬时表达

构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和蚓激酶基因cDNA的乳腺表达载体pβLK.通过直接注射将重组载体DNA导入山羊的乳腺组织,以纤维蛋白平板法测定乳汁中蚓激酶基因表达产物的活性.实验证实蚓激酶基因可以在山羊乳腺中瞬时表达.在进行山羊乳腺的瞬时表达时,适宜的注射剂量为500μg/ml.注射后6～9 h的表达量最高,达到2.0×105U/L,并持续表达至60h.

由体外受精囊胚获得ICR小鼠ES细胞

收集鼠卵母细胞和精子 ,采用体外受精技术 ,获得早期胚胎。体外培养胚胎至囊胚 ,分离内细胞团 ,获得 ICR小鼠的 ES细胞。结果不但获得了来自体外受精囊胚的 ICR小鼠 ES细胞 ,而且表明用体外受精方法获得的小鼠早期胚胎的数量明显大于常规方法 ,且比较稳定。ICR小鼠 ES细胞的获得 ,为研究小鼠的 ES细胞分化提供了条件。

加温对小白鼠染色体影响的研究

加温是一种对放疗中射线抵抗性细胞增敏的有效方法。加温是否对机体有损伤目前很少有人探讨。本文利用微波辐射、恒温水浴为热源对小白鼠加温,观察细胞染色体的改变,判定热疗过程对机体的损伤。

稳定整合pTet-on载体小鼠胚胎干细胞株的建立

目的建立稳定整合Tet-on基因的ES-D3细胞系,用于人胰岛素基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中诱导表达调控的研究。方法通过电穿孔转染的方法,将pTet-on质粒导入ES-D3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染的ES-D3细胞进行压力筛选,用PCR和Southern blot方法进行DNA整合鉴定,并用瞬时转染荧光素酶报告基因(pTRE-Luc)对筛选的Tet-on阳性克隆株的功能进行鉴定。结果经400μg/mL的G418压力筛选后,获得了11个细胞克隆株,特异性核苷酸引物检测细胞基因组DNA,有9个ES-D3细胞株可以扩增出相应的核苷酸片段,部分Tet-on阳性ES-D3株Southern blot鉴定结果表明Tet-on基因片段已整合入ES-D3细胞基因组DNA,荧光素酶报告基因功能鉴定获得1株诱导表达倍率为21.31的ES-D3细胞株,且Tet-on基因阳性ES-D3细胞的形态和生长速度与正常ES-D3细胞没有差异。结论通过电穿孔转染的方法成功地获得1株诱导表达倍率为21.31的高表达ES-D3细胞株,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)在ES-D3细胞中转染和诱导表达打下了基础。

G418和潮霉素B双重抗性小鼠胚胎干细胞饲养层的制备

通过脂质体转染的方法,先后将含有neo基因的质粒pWL/neo和含有潮霉素基因的质粒导入NIH3T3细胞中,利用G418和潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,经500μg/ml的G418和300μg/ml潮霉素B压力筛选后,获得了具有G418和潮霉素B双重抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,用PCR法特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段。生长在双抗NIH3T3细胞饲养层上ES细胞基本保持正常ES细胞特征,成功地培育了G418和潮霉素双重抗性的NIH3T3细胞,为进行pTet-on和pTRE-H-Insulin目的基因电转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。

感染旋毛虫小鼠脾T细胞亚群动态变化观察

感染旋毛虫小鼠脾Ｔ细胞亚群动态变化观察王海鹏，刘英杰，王太一细胞免疫的作用日益受到人们的重视。进行Ｔ细胞亚群的研究，有助于了解宿主的免疫调控状态和免疫反应水平。据研究，旋毛虫感染期间，小鼠脾淋巴细胞转化反应及对绵羊红细胞的细胞免疫应答存在着免疫抑制现...

潮霉素抗性3T3细胞的建立和鉴定

目的 建立具有潮霉素 (hygromycin)抗性的 3T3细胞系 ,用于转染目的基因 (pTRE Ins human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法 通过脂质体转染的方法 ,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入 3T3细胞中 ,利用潮霉素的药物选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行PCR鉴定。结果 经 5 0 0 μg ml的潮霉素压力筛选后 ,获得了抗性细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异 ,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA ,可以扩增出对应的核苷酸片段。结论 成功地培育了潮霉素抗性的 3T3细胞 ,为进行目的基因 (pTRE Ins human)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。

基因导入的脂质体转染法和磷酸钙转染法之比较

将外源基因导入真核细胞的方法很多。我们通过对绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因在真核细胞中表达的研究 ,比较了较常用的两种方法—脂质体转染法和磷酸钙转染法。研究结果表明 :脂质体转染法的转染效率较磷酸钙转染法高 ,且简单易行 ,是外源基因导入体外培养细胞内较理想的方法。

p^(15)基因真核表达重组体及人宫颈癌细胞转染的研究

将含人ｐ１５ ｃＤＮＡ质粒ｐＢＳ－ＳＫ－ｐ１５以ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ进行双酶切，再与真核表达载体ｐＣＲＴＭ３经相同酶切点连接，转化感受态细菌，筛选、鉴定得到可在真核细胞中表达人ｐ１５基因的重组质粒ＰＣＲ－ｈｐ１５。以脂质体介导法转染人宫颈癌细胞，用Ｇ４１８筛选，得到转染的人宫颈癌细胞，转染细胞的恶变程度有所改善。