何氏育麟方通过调控PI3K/Akt信号通路对卵巢储备功能下降大鼠颗粒细胞的影响

目的探讨何氏育麟方含药血清对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及凋亡的影响。方法分离并培养DOR大鼠卵巢颗粒细胞,设置对照组1、模型组1[环磷酰胺(CTX)含药血清]、阳性组1(CTX含药血清+补佳乐含药血清)、育麟方组1(CTX含药血清+育麟方含药血清)和对照组2(LY294002)、模型组2(LY294002+CTX含药血清)、阳性组2(LY294002+CTX含药血清+补佳乐含药血清)、育麟方组2(LY294002+CTX含药血清+育麟方含药血清)。应用流式细胞术、荧光探针、RT-qPCR、Westernblot技术分别检测细胞活力、细胞周期及凋亡率、线粒体膜电位,以及ATP水平,PI3K、AktmRNA表达,PI3K、p-Akt/Akt、PIP2、PIP3、CytC、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与模型组比较,育麟方组颗粒细胞活力及线粒体膜电位、ATP水平升高(P<0.01),凋亡率降低(P<0.01),PI3K、AktmRNA表达及p-Akt/Akt、PIP2、PIP3表达升高(P<0.05,P<0.01),同时伴随下游促凋亡蛋白CytC、Bax表达降低(P<0.05,P<0.01)及抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P<0.01)。结论育麟方可能通过调控线粒体依赖性PI3K/Akt信号通路改善DOR大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能,抑制颗粒细胞凋亡。

何氏育麟方治疗卵巢储备功能下降作用机制的网络药理学和分子对接研究

卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)是指卵巢中剩余卵母细胞数量减少、质量下降,生育能力下降、性激素缺乏等^([1]),可进展为卵巢早衰,并出现一系列围绝经期症状,对女性远期心脑血管等健康造成威胁。目前对于DOR的临床治疗主要运用激素替代治疗、脱氢表雄酮、抗氧化剂补充等,但不能从根源上改善DOR患者的卵巢功能,且有一定的副作用^([2])。

何氏养巢方通过ERβ/PCG1α/TFAM通路提高颗粒细胞线粒体生物发生以改善早发性卵巢功能不全

目的:探究何氏养巢方(简称“养巢方”)提高卵巢颗粒细胞线粒体功能的机制。方法:取36只6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为空白对照组,模型对照组,养巢方小、中、大剂量组和阳性对照组。均予环磷酰胺90 mg/kg单次腹腔注射以建立原发性卵巢功能不全(POI)模型后,分组灌胃21 d后处死。另取6只6~8周龄C57BL/6J雌鼠造模后获取原代颗粒细胞,分为养巢方组、PHTPP(一种雌激素受体阻滞剂)组、养巢方+PHTPP组,分别予养巢方含药血清或PHTPP或同时给予两者干预培养24 h。分别采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学变化;荧光素酶法检测颗粒细胞腺苷三磷酸(ATP)水平;定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)的拷贝数;透射电镜观察线粒体结构变化;蛋白质印迹法检测雌激素受体β(ERβ)、过氧化物异酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、线粒体转录因子A(TFAM)、超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达;qRT-PCR检测Erβ、Pgc1α、Tfam、Sod2 mRNA表达。结果:模型对照组卵巢组织次级及三级卵泡较少,养巢方各剂量组及阳性对照组次级及三级卵泡较多。与空白对照组比较,模型对照组颗粒细胞ATP和mtDNA水平均下降(均P<0.01),线粒体嵴消失或空泡化结构异常比例增加,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均下降(均P<0.01)。养巢方中、大剂量组及阳性对照组颗粒细胞内ATP生成增多、mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);颗粒细胞内结构异常线粒体减少,ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均增加(P<0.05或P<0.01)。体外实验中,与PHTPP组比较,养巢方+PHTPP组线粒体结构正常比例更高,线粒体ATP含量增加(P<0.05或P<0.01),mtDNA拷贝数增加(P<0.05或P<0.01);ERβ、PGC1α、TFAM、SOD2蛋白及其mRNA表达均上升(P<0.05或P<0.01)。结论:养巢方可以通过ERβ/PGC1α/TFAM通路提高线粒体生物发生从而改善POI小鼠卵巢功能。

章勤治疗再生育人群不孕症验案举隅

[目的]总结浙江省名中医章勤教授针对再生育人群不孕症临床辨证施治经验。[方法]通过跟随章勤教授临诊,选取章师临床治疗再生育人群卵巢储备功能低下、输卵管炎性疾病、子宫内膜容受性低下以及剖宫产后疤痕子宫憩室等各类具有人群特殊性的不孕症验案,分析总结老师治疗再生育人群不孕症的学术观点和临床经验。[结果]章勤教授认为治疗再生育人群不孕症以补肾为基本大法,其中卵巢储备功能低下者以补肾填精为主;患有输卵管炎性疾病者以分其缓急、扶正祛邪为要;子宫内膜容受性低下者以补肾活血化瘀为法;患有子宫切口瘢痕憩室者以"化瘀"与"止漏"两步而治。辨证施治,疗效显著。[结论]章勤教授治疗再生育人群不孕症经验特色鲜明,疗效显著,值得学习与推广。

章勤针对薄型子宫内膜之助孕策略

[目的]总结浙江省名中医章勤教授治疗薄型子宫内膜患者不孕症的临床辨治经验。[方法]通过跟随章教授临诊,学习收集医案,总结章教授临床治疗薄型子宫内膜患者不孕症之学术观点和临床经验,并举验案一则以佐证。[结果]章教授认为薄型子宫内膜患者其病因分以"局部因素"与"全身因素"两方面,"局部因素"指由于各种局部原因导致子宫内膜组织的结构和功能破坏继而发生薄型子宫内膜,以奇经受损、肾虚血瘀为病机,当以补肾活血化瘀之法治之;而"全身因素"指以肾精亏虚为本,故以补肾填精法治之。所举验案为薄型子宫内膜合并宫腔粘连的患者,以补肾活血化瘀法联合宫腔镜下粘连分解术治疗后,其多年不孕症告愈。[结论]章勤教授针对薄型子宫内膜患者助孕分病因而治,思路清晰,特色鲜明,疗效显著,值得学习与推广。

章勤针对再生育人群助孕经验

随着二胎政策的开放,高龄妇女的再生育需求持续攀升,但由于年龄相关性,卵巢储备功能下降、输卵管炎性疾病以及子宫内膜容受性降低等原因导致了该人群自然妊娠率的下降,自然流产率与生育风险的提高。再生育人群的生殖问题也成为目前临床医生研究的热点。章勤教授是浙江省名中医,浙江中医药大学博士研究生导师,第二批全国名老中医药专家何少山主任医师的学术继承人,全国第二批优秀中医临床人才,现任杭州市中医院妇科主任。

浙派医家楼英《医学纲目》论治月经病探微

通过研读楼英的《医学纲目》之卷三十四,分析了楼英在书中论述的14种月经病及涉及的18种病证,总结书中月经病的病因病机、治则治法,并尝试归纳其中重要内容。楼英在《医学纲目》中涉及的月经病病因病机概括为七情、六淫、气血失调、禀赋后天不足及痰饮瘀血五大类,所涉及治则治法总概括为调气、和血、化湿开痰三种。楼英在《医学纲目》一书中对月经病论治的思想总结颇为具体,值得后世思考与借鉴。

明代浙派中医名家楼英调治不孕症思想初探

[目的]总结明代浙派中医名家楼英调治不孕症的学术特点及遣方用药经验,以期对不孕症的诊治提供新的思路与参考。[方法]通过对楼氏所著《医学纲目》中有关不孕症的章节加以研究分析,总结楼氏治疗不孕症的诊治心得,浅析其治疗不孕症的学术特点及用药经验,并引用三种证型加以说明。[结果]楼氏在提炼明代以前医学名家治疗不孕症的学术思想基础上,结合自身临床经验,认为不孕症的主因有气血不足、痰瘀气滞、体质偏颇、男方精气不足等,治疗该病以调和气血为原则,通过养血益气、行气化瘀、温经暖宫、化痰祛湿、温通督脉诸法辨证施治。文中所引痰塞胞络型、阴虚血亏型、瘀滞胞宫型三种不孕证型,充分体现了楼氏以健脾化痰、滋阴养血、化瘀通络为治则,采用丹溪植芝汤、增损三才丸、荡胞汤为主方调治不孕症的诊疗思路。[结论]楼氏认为不孕症是由多因素引起的女性机体气血失和,难以摄精成孕,其治疗当以调和气血为总则,辨证论治,其学术思想具备临床价值,同时也体现了明代浙派中医诊治不孕症的源流及特色。

何氏养巢方对DOR小鼠超排卵和卵母细胞质量的影响

何氏养巢方在何氏祖传经验方——育麟方的基础上优化而成,多年临床应用显示其能显著改善卵巢储备功能减退(DOR)患者的卵巢功能。本研究在前期研究基础上,进一步观察何氏养巢方对DOR小鼠超排卵及卵母细胞质量的影响,为中医药在辅助生殖领域的运用奠定基础,为DOR不孕症提供更完善的治疗方法。

基于网络药理学探究寿胎丸治疗先兆流产作用机制

目的应用网络药理学方法探讨寿胎丸治疗先兆流产可能的作用机制。方法依托TCMSP和TCMID数据库获取寿胎丸全方4味中药主要活性成分,利用Pubchem、SwissTargetPrediction数据库预测活性成分的潜在靶点,通过TTD、Genecards、NCBI等数据库获取先兆流产相关的靶基因,将药物预测靶点和疾病相关靶点交集,获得交集靶基因,将交集的靶基因上传至STRING数据库,构建PPI网络,通过cytoscape软件构建复方⁃成分⁃靶基因⁃疾病网络图;最后,运用R语言对交集靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果分析得到寿胎丸治疗先兆流产的有效成分15种及交集靶点36个,有效成分中自由度较高的为β⁃sitosterol及quercetin,作用靶点中自由度较高的为KDR、SLC6A4、ESR1等,PPI网络中核心基因为STAT3、EGFR等,GO富集分析显示主要与体内酶活性调节、基因转录、核受体活性、激素受体结合等相关,KEGG通路富集分析显示PI3K/Akt、HIF⁃1、Estrogen信号通路为显著性最高的通路。结论本研究初步揭示了寿胎丸治疗先兆流产的潜在活性成分及其可能的作用机制,为该制剂活性成分进一步研究提供了理论依据,同时也证实其多成分、多靶点、整体调节的作用特点。

何氏妇科基于温阳理论治疗崩漏经验

崩漏者,妇科血症,经量急骤、暴下不止谓之崩,淋漓不尽、潮期无止谓之漏,两者多交替转化,不易分开,故概称为崩漏。古今医家多认为,崩漏之症热多寒少,乃热扰充任、迫血妄行所致,多从热论治[1]。何氏妇科认为,崩漏之症应观脏腑、求因论治,摄血止崩,并以之分血热沸溢、冲任虚寒、中虚堤防、胞络瘀滞四型。结合当代女子习性,何氏妇科认为,崩漏阳虚者十有八九,冲任虚寒,固摄失司,阴损及阳,尤以暴崩之后夹寒者多。

反复超促排卵对老龄模型小鼠生殖能力的影响

目的探索反复促排卵对老龄模型小鼠生殖功能的影响。方法30只7月龄雌性C57BL/6小鼠,按照随机数字表法分成对照组与模型组,模型组予孕马血清促性腺激素(PMSG)腹腔注射,隔48 h后注射人绒毛膜促性腺激素(hCG),每周1次,连续4周,建立反复超促排卵老龄模型小鼠;对照组仅在第4周注射PMSG、hCG促排卵。第4次促排卵16 h后检测对照组、模型组小鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、抑制素B(INHB)水平;HE染色卵巢组织形态学变化,透射电镜观察颗粒细胞超微结构;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测卵巢c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、人体抑癌基因(p53)、叉形头转录因子O亚型(FOXO3a)等基因的表达;体式显微镜下观察卵母细胞形态并检测其活性氧(ROS)水平。结果与对照组比较,模型组小鼠血清E2、P、INHB均显著降低[E2:(33.71±5.64)pg/mL比(53.20±7.17)pg/mL,P:(9.07±2.13)ng/mL比(17.28±2.37)ng/mL;INHB:(18.10±4.73)pg/mL比(27.76±4.15)pg/mL,P均<0.01],卵巢原始卵泡[(3.83±0.75)个比(9.83±2.56)个,P<0.01]、发育卵泡[(1.33±0.82)个比(3.00±1.26)个,P<0.05]均减少,黄体数量显著增加[(8.67±1.21)个比(5.83±1.33)个,P<0.05];模型组小鼠卵巢颗粒细胞中嵴模糊[(24.96±2.24)%比(16.10±0.90)%,P<0.01]及空泡征的线粒体明显增多[(10.69±1.03)%比(3.19±0.90)%,P<0.01];模型组JNK、Bax、p53水平较对照组显著增加[JNK:(1.44±0.21)比(0.91±0.08);Bax:(1.15±0.10)比(0.93±0.03);p53:(1.30±0.10)比(0.93±0.06),P均<0.05],FOXO3a水平较对照组降低[(0.73±0.08)比(1.00±0.04),P<0.01];同时,模型组小鼠的卵母细胞碎裂率及ROS水平均显著增加(P<0.01)。结论经过4周连续超促排的老龄模型小鼠卵巢储备功能下降,可获得的卵子质量和数量减少,可能与连续超促排卵导致卵泡内ROS积聚,卵巢氧化应激水平激增,JNK、Bax、p53等凋亡相关基因表达增加,颗粒细胞线粒体功能紊乱有关。由过度氧化应激反应导致这一系列变化后最终导致老龄模型小鼠卵母细胞质量降低甚至碎裂。

从三焦膜系论治产科抗磷脂抗体综合征

抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid antibody syndrome,APS)是以持续存在的抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies,aPLs)阳性为特征,以动静脉血栓形成和病理妊娠为临床表现的一种非炎症性自身免疫性疾病。其中,以病理妊娠为主要临床特征时称为产科抗磷脂综合征(obstetric antiphospholipid syndrome,OAPS)[1]。

基于PLC的往复式压缩机控制系统设计分析

目前,往复式压缩机已经在我们生活中的多个领域都实现了良好应用,在对空气进行压缩的过程中,如何控制压 缩机安全、稳定运行非常重要,直接影响着生产的正产开展。本文对基于 PLC 的往复式压缩机控制系统进行了分析,旨在通 过运用变成控制器来进一步强化对压缩机组的监控和自动控制。

“四步预培法”治疗复发性流产经验

文章根据复发性流产的病因病机,结合临床实践,总结章勤教授运用“四步预培法”治疗复发性流产的经验。“四步预培法”包括“流产后清畅胞宫-备孕前预培其损-备孕期循期取候-妊娠期培元安胎”4步。章教授之“四步预培法”并非单纯注重孕前调理,于4步各时期治疗皆寓预培其损之意,其合理运用使冲任气血和调,以培本固元,夯实基础,常取不俗疗效。

章勤“养阳在滋阴之上”理论调经助孕经验浅探

文章介绍了章勤教授"养阳在滋阴之上"调经助孕理论,具体阐述养阳法在妇人不孕诊治中的重要性,并总结养阳法贯穿整个月经周期的调理理论:卵泡期当养阳滋长,排卵期当养阳疏理,黄体期当养阳助孕,经行期当养阳通经,循月经周期阴阳消长四期而治,则使经调孕至。章勤教授在临床诊治中遵循"治病求本",以辨证论治为基础,运用"养阳在滋阴之上"理论对阳虚妇人调经助孕疗效显著。