新形势下大学生党员在班级学风建设中的先锋模范作用

大学生党员是大学生群体中的先进分子,是党员队伍的重要组成部分,也是未来国家改革建设发展的生力军,肩负着建设中国特色社会主义、实现中华民族伟大复兴中国梦的庄严使命。党的二十大报告指出培育创新文化,弘扬科学家精神,涵养优良学风,营造创新氛围。新形势下,班级学风建设仍是高校办学中的重中之重,是高校开展思想政治工作的有力抓手,是推进高校治理体系和治理能力现代化的实践要求。文章就如何发挥大学生党员在班级学风建设中的先锋模范作用进行了初步思考。

鼠源性甲状旁腺激素相关蛋白1～84片段的制备及其促进骨形成的作用

目的:构建并表达鼠源甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)1～84片段的载体,并检测其在促进骨形成中的作用。方法:应用RT-PCR方法体外扩增mPTHrP1～84基因,经测序后重组入原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP1～84原核表达载体转化E.coliBL21,IPTG诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,通过细胞学实验确定纯化的重组PTHrP片段在促进骨形成中的作用。结果:构建的重组表达载体pGEX-2TK/mPTHrP1～84诱导表达产物以可溶性的形式存在;纯化的mPTHrP1～84可促进小鼠的间充质干细胞向成骨方向增殖和分化。结论:构建、表达的mPTHrP1～84片段可促进骨形成。

PGC-1α-shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响

目的:构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α)短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰PGC-1α编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLKO.1/PGC-1α-shRNA感染DSPC,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的表达,细胞化学染色和实时荧光定量PCR检测其对DPSC分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,DPSC转染了PGC-1α-shRNA后PGC-1α表达水平降低,干扰效率达81%,而且细胞钙化结节增多,牙本质涎磷蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显上调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的PGC-1α-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响牙髓干细胞的分化。

全人源抗肝癌重组免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用

目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用。结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60kD;纯化的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml。结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin鄄A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用。

体外鉴定甲状旁腺激素相关蛋白与Bmi-1的相互作用

目的:探索并鉴定甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)与Bmi-1的结合作用,为进一步研究PTHrP相关信号转导通路提供线索。方法:应用RT-PCR方法体外扩增鼠源性PTHrP基因,经测序后重组人原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP原核表达载体转化E.coli BL21,IPTG诱导表达。表达产物经活性鉴定,通过体外GST pull-down技术和免疫印迹实验,检测PTHrP与Bmi-1蛋白的相互作用。结果:成功构建和表达了重组载体pGEX-2TK/mPTHrP;通过体外蛋白质结合实验证实了PTHrP与Bmi-1蛋白可以相互作用。结论:PTHrP与Bmi-1蛋白之间存在相互作用,此结果为研究PTHrP介导的下游信号转导通路的机制奠定了基础。

β-tubulin-Ⅲ基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系的研究

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)基因的表达与患者对长春碱类药物化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:共入选35例NSCLC患者,随机分入长春瑞滨(NVB)联合顺铂(PDD)或卡铂(CBP)组成NP方案化疗组和吉西他滨(GEM)联合PDD或CBP组成GP方案组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中β-tubulin-ⅢmRNA的表达,以Westernblot检测β-tubulin-Ⅲ蛋白的含量。结果:NP组19例,GP组16例,两组患者临床特点无明显差别,对化疗总的有效率相似,在NP组内,有效10例,无效9例,有效患者的肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA测量值为4.8±1.9,而无效患者为15.8±8.0,两者有显著性差异(P<0.01);有效患者β-tubulin-Ⅲ蛋白的测量值为3.7±1.5,无效患者为13.5±6.2(P<0.01)。GP组7例无效,9例有效,有效与无效患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA和β-tubulin-Ⅲ蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ基因的表达与患者对长春碱类药物的敏感性有关,β-tubulin-Ⅲ基因高表达,提示对长春碱类药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。

rhIL-1α/rhTGF-β1诱导下大鼠髁突软骨细胞PRG4的表达

目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响。方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定。细胞上清液中加入10ng/ml的rhIL-1α,48h后加入10ng/ml的rhTGF-β1。不同时间点应用RT-PCR检测PRG4mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化。结果:加入rhIL-1α24、48、72h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低。48h组再加入rhTGF-β124h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高。结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用。

靶向黏着斑激酶siRNA表达载体构建及转染Tca8113细胞的沉默效应

目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用。方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Western-blot鉴定FAK的沉默效应。结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;pSi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制。结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达。

stathmin基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系

背景与目的:化疗是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的主要治疗手段,但是NSCLC常对化疗耐药,导致治疗失败。因此,针对不同分子生物学特点的NSCLC进行化疗疗效预测,成为提高疗效的重要方法。本研究通过研究晚期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin基因的表达与患者对长春碱类药物的化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:2005年5月—2007年12月,共78例晚期NSCLC患者入组,随机分入NP方案[长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)或卡铂(CBP)]化疗组或GP方案[吉西他滨(GEM)联合DDP或CBP]化疗组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中StathminmRNA的表达,以Western印迹法检测Stathmin的蛋白含量。结果:NP组41例,GP组37例,两组患者的性别、年龄、病理类型及肿瘤分期等临床特点无显著性差异(P>0.05),对化疗总的有效率分别为46.3%(19/41)和48.6%(18/37),两者之间亦未见显著差异(P>0.05);在NP组内,有效19例,无效22例,有效患者的肿瘤组织中stathminmRNA测量值为1.9±1.1,而无效患者为7.5±2.8,两者之间差异有显著性(P=0.003)。有效患者的Stathmin蛋白测量值为1.5±0.7,无效组为4.3±1.6,两者之间差异有显著性(P=0.002)。GP组18例有效,19例无效,有效与无效患者肿瘤组织中stathminmRNA及Stathmin蛋白无明显差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中stathmin基因的表达与患者对长春碱药物的敏感性有关,stathmin基因高表达,对长春碱药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30保护性免疫力持续时间的研究

目的 确定日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 NP30主动免疫诱导保护性免疫力的持续时间。方法 实验组昆明种小鼠腹腔注射 NP30 10μg/鼠 ,主动免疫 3次 ,每次间隔 2周 ,对照组腹腔注射生理盐水。末次免疫后 8、12、16、2 0、2 4周感染日本血吸虫尾蚴 (4 0± 1)条 ,尾蚴感染后 4 0 d行足垫试验。结果 NP30末次免疫后 8、12、16周感染日本血吸虫尾蚴的减虫率为 2 1.4 3%～4 1.16 % ,分别与对照组相比差异有显著性 ;足垫试验结果显示 8、12周实验组与对照组差异有显著性。结论 NP30主动免疫诱导的保护性免疫力持续约 4个月 ;

1,25(OH)_2D_3缺乏对小鼠下颌骨体及髁突骨形成的影响

目的:研究1,25(OH)2D3缺乏对小鼠下颌体及髁突骨形成的影响及机制。方法:利用组织化学、免疫组织化学和western-blot等方法比较分析6周龄野生型(WT)和1α(OH)ase-/-小鼠髁突的骨形成及其与下颌体骨形成的差异。结果:与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠髁突骨量明显增加,ALP和I型胶原的阳性面积也明显增加,而下颌体的骨量明显减少,ALP和I型胶原的阳性面积明显减少。1α(OH)ase-/-小鼠的下颌体PTHR和IGF-1蛋白表达水平轻度减少,而在髁突中PTHR和IGF-1蛋白表达水平明显增加。结论:内源性1,25(OH)2D3在小鼠下颌体骨形成中发挥了重要作用,PTH通过和PTHR结合在IGF-1的介导下在髁突骨形成中发挥重要作用。

pEGFP-N1/hIL-1ra重组真核表达载体的构建及其在人牙龈成纤维细胞中的瞬时表达

目的:构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞并检测其表达,为牙周炎症的基因治疗提供实验基础。方法:TRIzol法提取人乳腺癌组织总RNA进行RT-PCR,将纯化的扩增产物hIL-1ra与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序正确后将重组体pMD18-T/hIL-1ra与真核表达质粒pEGFP-N1分别进行双酶切,连接后转化感受态细菌E.coliTOP10。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA瞬时转染人牙龈成纤维细胞,荧光显微镜观察绿色荧光的表达,RT-PCR方法检测其基因的表达。结果:构建的pEGFP-N1/hIL-1ra真核表达载体经PCR及双酶切鉴定均表明人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。瞬时转染人牙龈成纤维细胞后能观察到绿色荧光,RT-PCR可得到目的片段。结论:成功构建了重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞后检测到其基因水平的表达,为炎性细胞因子拮抗剂基因用于牙周炎抗炎治疗奠定了实验基础。

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL/OPG表达的影响

目的:探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量RT-PCR法和Western blot法分别检测RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算RANKL/OPG的比值。结果:牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12.5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达RANKL和OPG,破坏RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。

肝细胞癌MAGE-A9基因的克隆、表达及特性鉴定

目的:扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE鄄A9(melanomaantigenA9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE鄄A9单抗,观察其在肝细胞癌中的表达。方法:从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE鄄A9cDNA,插入载体pMD18鄄T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gIII鄄MAGE鄄A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L鄄Arabinose诱导表达纯化后,制备抗MAGE鄄A9单抗,免疫组化检测MAGE鄄A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果:获得MAGE鄄A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS鄄PAGE分析其相对分子质量为35kD。获得抗MAGE鄄A9单抗,MAGE鄄A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE鄄A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论:有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE鄄A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性,MAGE鄄A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。

年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平及功能的影响

目的:观察不同年龄组小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4(TLR2/4)表达水平的差别,以及该细胞在脂多糖(LPS)刺激下,炎症因子TNF-α分泌水平的差别。方法:采用real-time PCR和流式细胞技术,检测低龄组和高龄组小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平的差异;同时检测1μg/mL大肠杆菌(E.coli)LPS或1mg/L牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)LPS刺激后,两组细胞TLR2/4表达水平的变化;采用ELISA技术检测炎症因子TNF-α分泌水平的变化。结果:刺激前,两组细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平均无明显差别。E.co-li LPS或P.gingivalis LPS刺激后,低龄组细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达水平均明显高于高龄组(P<0.05),其分泌的TNF-α水平也显著高于高龄组(P<0.05)。结论:年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平没有显著影响,但增龄性变化可能导致TLR2/4功能的减退。

定格动画的广告性创新研究

文章试从影视广告的特性和诉求、动画广告的表现方式以及定格动画的文化价值等方面出发,结合英国阿德曼动画公司制作的定格动画广告片,浅谈定格动画的广告性创新。

pEGFP-N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的:构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达。方法:利用RT-PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序。重组质粒双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT-PCR检测Snail在该细胞中表达。结果:本实验成功构建了pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达。结论:本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础。

互联网语境下大学生财富观的生成影响机制研究

互联网对当代大学生的影响越来越大,由浅入深地辐射进当代大学生的方方面面。互联网通过对信息的重新结构化对社会大众观念的形成产生作用,大学生处于观念形成的重要阶段,更容易受到网络的影响,财富观便是其中重要的一种。本项目研究将受众选择为大学生,采取问卷调查和深度访谈的形式,研究互联网对当代大学生的财富观造成的负面影响,这些负面影响是通过什么方式施加的。根据调查的结论对如何处理好互联网与大学生之间的关系提出建设性建议。

全长型脾酪氨酸激酶在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系

目的通过检测口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中全长型脾酪氨酸激酶[SYK(L)]的表达、与淋巴结转移的相关性分析,探讨SYK(L)对OSCC发生发展和转移的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫印迹(Western blot)、免疫组织化学法检测SYK(L)在27例OSCC及其癌旁组织中表达的差异,并采用14例正常口腔黏膜作为对照,探讨其与OSCC发生及转移的关系。结果 OSCC组织中SYK(L)表达量明显低于正常牙龈组织(P<0.01),同一患者癌组织中SYK(L)表达量比癌旁组织低(P<0.05);淋巴结转移组患者的SYK(L)表达量普遍低于未转移组患者(P<0.05)。结论 SYK(L)可能与OSCC的发生和发展有关,作为抑癌基因在肿瘤的淋巴结转移过程中起至关重要的作用。

NRP-1在调控人舌鳞状细胞癌细胞分化中的作用

目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰NRP-1编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PL-KO.1/NRP-1-shRNA感染SCC25,western blot和实时荧光定量PCR检测NRP-1的表达,划痕实验和实时荧光定量PCR检测其对SCC25分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,SCC25转染了NRP-1-shRNA后NRP-1表达水平降低,干扰效率达65%。划痕实验结果表明NRP-1下调明显降低了SCC25的迁移能力。实时荧光定量PCR结果表明NRP-1下调可以导致SCC25上皮标记蛋白钙粘附蛋白(epi-thelial cadherin,E-cadherin)表达上调,而间充质标记蛋白纤粘蛋白(fibronectin,FN)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达下调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的NRP-1-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响SCC25的分化。