miR-142-5p通过影响紧密连接蛋白CLDN1的表达介导旋毛虫Ts-DNaseⅡ-7的肠屏障损伤作用

旋毛虫进入宿主后,脱囊幼虫(肠道感染性第1期幼虫)进入宿主的小肠上皮细胞内继续发育,是旋毛虫感染并致病的关键步骤。本课题组前期研究结果显示,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白通过影响肠屏障,促进旋毛虫侵入肠上皮细胞,从而有利于其在宿主体内寄生。并且,Ts-DNaseⅡ-7能够诱导多种miRNA出现差异化表达,有文献报道其中的miR-142-5p能够参与破坏肠屏障,因此本研究对Ts-DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p通过影响靶基因调控肠上皮细胞屏障功能的机制进行了探讨。试验分为Ts-DNaseⅡ-7处理组、miR-142-5p过表达组(OE)、miR-142-5p抑制组(Inhibition)、阴性对照组(NC)和空白对照组(Control),将miR-142-5p过表达及抑制表达的慢病毒载体,在MOI为80的条件下感染人结直肠腺癌细胞Caco-2,嘌呤霉素(8mg/L)筛选获得稳定抑制miR-142-5p表达及过表达miR-142-5p的细胞系,通过荧光显微镜评估细胞转染情况,采用RT-qPCR检测各组细胞miR-142-5p相对表达量;利用miRNA靶标预测数据库、RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶试验对目的基因进行预测和验证;再应用HE染色、Western blot和单层跨膜电阻(TEER)与FITC通透性定量分析阐明miR-142-5p的作用机制。结果显示:Caco-2细胞经慢病毒感染后,经荧光显微镜及RT-qPCR验证转染成功。此外,双荧光素酶和Western blot结果显示CLDN1是miR-142-5p的直接靶基因(P<0.001),与Ts-DNaseⅡ-7单独处理组和OE+Ts-DNaseⅡ-7组相比,抑制miR-142-5p表达组可缓解Ts-DNaseⅡ-7引起的CLDN1mRNA和蛋白水平下调(分别为P<0.01和P<0.05),并逆转TEER下降和通透性升高(P<0.01)。结果表明,Ts-DNaseⅡ-7可上调miR-142-5p的表达,引起Caco-2单层细胞CLDN1表达减少和肠屏障功能受损,进而促进旋毛虫入侵肠上皮,实现进一步发育。

中国传统文化在国企发展中的重要作用

中华民族上下五千年的文化积淀源远流长、博大精深,要想掌握我国传统文化的重要内容,并将之熟练应用,就必须仔细学习、深入研究。中国的传统文化不仅在规范协调人与人、人与社会的关系方面具有相当的普世价值,在现代的企业管理行为和企业文化构建当中同样具有积极深远的作用,尤其是作为国民经济支柱的国有大中型企业更应当积极吸收实践传统文化中的优良因素,积极弘扬传统文化起好模范带头作用。

创新落实党组主体责任

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